恒河猴PPARgamma基因的生物信息学分析

恒河猴Macaca mulatta是继黑猩猩Pan troglodytes后第2个完成基因组测序的非人类灵长类动物,在生命科学领域中具有重要意义。本文利用生物信息学方法寻找与人类肥胖密切相关的PPARg基因在恒河候中的同源基因,对该基因的序列、外显子信息、编码蛋白及其理化性质进行分析,并预测其编码蛋白的结构与功能,构建其同源基因的系统进化树,旨在为今后人类肥胖的相关研究提供一定的依据。

Leptin通过JAK-STAT3通路抑制原代大鼠脂肪细胞perilipin mRNA的表达

【目的】探讨瘦素(Leptin)影响大鼠脂肪细胞perilipin、ADRP和TIP47 mRNA表达的分子机理。【方法】以体外培养的原代大鼠脂肪细胞为研究对象,用50 ng/mL Leptin及Leptin与JAK-STAT3通路抑制剂(AG490)、MEK通路抑制剂(U0126)、PPARgamma激活剂(罗格列酮(Ros))联合处理原代大鼠脂肪细胞3 h,提取总RNA,半定量(Semi-quantitative,SQ)RT-PCR法检测PPAR gamma、perilipin、ADRP和TIP47 mRNA的表达情况。【结果】阻断JAK-STAT3通路,可以减弱50 ng/mL Leptin对原代大鼠脂肪细胞perilipin mRNA表达的抑制作用(P<0.05),但加剧了Leptin对大鼠脂肪细胞ADRP和TIP47 mRNA表达的抑制(P<0.05);阻断MEK通路可以加剧Leptin对大鼠脂肪细胞perilipin、ADRP和PPAR gamma mRNA表达的抑制作用(P<0.05)。【结论】Leptin通过JAK-STAT3通路抑制原代大鼠脂肪细胞perilipin mRNA的表达。

UM171体外扩增脐血造血干细胞的机制

背景:研究表明UM171可以在体外扩增造血干细胞,但作用机制尚不清楚。目的:通过高通量对接(HTDocking)筛选技术研究UM171作用的靶点,并概述其潜在的作用机制。方法:利用StemCellCKB在线计算平台,找出UM171可能的作用靶点。通过验证实验排除阴性靶点,利用表面等离子体共振(SPR)分析确定UM171和转化生长因子βRⅠ之间的相互作用。Western blot法检测UM171作用于转化生长因子β信号通路的几种重要蛋白质表达变化。结果与结论:(1)根据StemCellCKB计算得分,找出了UM171可能的作用靶点有转化生长因子βRⅠ等;(2)表面等离子体共振分析得出KD_(50)值为62.5μmol/L,说明UM171和转化生长因子βRⅠ有较强的结合能力;(3)转化生长因子β信号通路中转化生长因子βRⅠ、Smad3、p-Smad3、Smad4等主要蛋白质的表达水平显著提高;(4)结果提示UM171通过作用于转化生长因子β信号通路扩增脐血造血干细胞。

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(C19H14O4F2)诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡

目的观察5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)诱导人卵巢癌(CoC1)细胞凋亡的作用。方法以体外培养的人卵巢癌CoC1为研究对象。采用软琼脂克隆测定ADFMChR对细胞集落的影响;流式细胞术(FCM)检测ADFMChR诱导细胞凋亡率;凝胶电泳观察ADFMChR诱导基因DNA梯形条带。Western blot分析ADFMChR对CoC1细胞PPAR,γNF-KB,Bcl-2,Bax蛋白表达的影响。结果软琼脂克隆显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制细胞集落形成;FCM分析发现ADFMChR呈剂量依赖性诱导细胞凋亡;ADFMChR(30μmol/L)孵育CoC1细胞48h后,DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带。Western blot分析结果表明ADFMChR以剂量依赖方式上调CoC1细胞PPARγ和Bax蛋白表达,下调NF-κB和Bcl-2蛋白表达。结论ADFMChR诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡与其活化PPARγ,抑制NF-KB表达和提高Bax/Bcl-2比值有关。

过氧化物酶体增殖物活化型受体γ在抑制大鼠心肌肥厚中的作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体γ(peroxisomeproliferator activatedreceptorγ ,PPARγ)在大鼠心肌肥厚过程中的作用。方法 新生大鼠的原代心肌和非心肌培养细胞 ,以血管紧张素Ⅱ诱导建立体外心肌肥厚模型 ,并用不同浓度的PPARγ内、外源性激活物 15脱氧前列腺素J2 (15d PGJ2 )和吡格列酮作用细胞。采用RT PCR法检测心肌肥厚特征性基因心钠肽和脑钠肽mRNA的表达 ,以MTT比色法和3 H TdR掺入实验检测非心肌细胞增殖情况 ,以3 H 亮氨酸掺入实验检测心肌细胞蛋白合成速率 ,并用软件分析心肌细胞表面积。结果 血管紧张素Ⅱ诱导后 ,心肌细胞表面积、心钠肽和脑钠肽mRNA的表达以及蛋白合成速率增加 ;非心肌细胞增殖活跃 ,但心钠肽和脑钠肽mRNA的表达没有显著变化。PPARγ激活物 15d PGJ2 和吡格列酮可以逆转这些变化 ,同时下调非心肌细胞的心钠肽和脑钠肽mRNA的表达 ,并呈一定的剂量依赖性。

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素通过活化过氧化物酶体增殖因子激活受体γ诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

目的探讨5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)通过活化过氧化物酶体增殖因子激活受体(PPARγ)诱导人卵巢癌细胞凋亡作用的分子机制。方法采用 MTF 法测定 ADFMChR对卵巢癌(CoCl)细胞系细胞增殖抑制作用;碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测 ADFMChR 诱导CoCl 细胞凋亡程度;DNA 琼脂糖凝胶电泳证实 ADFMChR 诱导 CoCl 细胞凋亡作用。Western 印迹检测 ADFMChR 对 CoCl 细胞 PPARγ,NF-kB,Bcl-2,Bax 蛋白表达的影响。结果 MTT 法显示ADFMChR 呈剂量依赖性抑制 CoCl 细胞增殖作用,IC_(50)值为7.76 μmol/L;FCM 分析 ADFMChR 呈剂量依赖性诱导 CoCl 细胞凋亡,ADFMChR(10.0,30.0 μmol/L)处理 CoCl 细胞48 h,凋亡率分别为33.07%和73.70%,均高于相应浓度白杨素诱导凋亡率(21.70%、40.00%);ADFMChR(30 μmol/L)处理 CoCl 细胞48 h 的 DNA 琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带,加用 PPARγ阻断剂(GW9662)后条带消失;Western 印迹分析 ADFMChR 以剂量依赖方式上调 CoCl 细胞 PPARγ和 Bax 蛋白表达,下调NF-kB 和 Bcl-2蛋白表达。结论 ADFMChR 通过活化 PPARγ抑制 NF-kB 和 Bcl-2表达,上调 Bax,诱导 CoCl 细胞凋亡。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ和PTEN在肝癌组织中的表达及意义

目的检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和PTEN蛋白在肝癌组织与癌旁组织的表达情况,探讨两种蛋白表达㈦临床病理各参数的关系及意义。方法收集100例中山大学附属第一医院手术切除的肝癌㈦癌旁组织标本,构建组织微阵列芯片,应⒚免疫组化染色检测PPARγ和PTEN蛋白的表达。在体外实验中,应用Western blotting法检测人肝癌Huh7细胞中PPARγ活化对PTEN蛋白的影响。结果PPARγ、PTEN蛋白在肝癌组织中阳性表达率分别为82%和62%,明显低于癌旁组织的表达率(分别为95%和92%),差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织中PPARγ蛋白的表达与癌组织的分化程度密切相关,PTEN蛋白表达与癌组织的分化程度和肿瘤门静脉浸润关系密切。体外实验证实Huh7细胞中PPARγ活化后上调PTEN蛋白表达。结论PPARγ和PTEN蛋白在肝癌组织中阳性表达率均低于癌旁组织,PPARγ活化后上调PTEN蛋白表达,两种蛋白在肝癌发生发展中起着重要作用。

15-LOX-1和PPARγ间的相互作用及其与肿瘤的关系

15-脂加氧酶1（15-LOX-1）表达于人的多种组织细胞中，是催化不饱和脂肪酸代谢的关键酶之一，可以将亚油酸、花生四烯酸分别代谢为13-羟基十八碳二烯酸和15-羟基二十碳四烷酸，这些不饱和脂肪酸及其代谢衍生物是过氧化物酶增殖激活受体γ（PPARγ）的天然配体。研究发现，PPARγ以非活性状态在多种肿瘤组织中高表达，其与配体结合活化后，可诱导肿瘤细胞凋亡或者分化，发挥潜在的抗肿瘤作用。以15-LOX-1和PPARγ为靶向的肿瘤防治及其临床应用具有广阔前景。