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PPF1基因C端片段在大肠杆菌中的融合表达和纯化以及抗体制备 被引量:6
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作者 徐云剑 苏力坦.阿巴白克力 +1 位作者 吉栩 朱玉贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期594-599,共6页
PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一 .以pSK PPF1为模板 ,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段 ,称为PPFC .进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM T easy ,再酶切得到PPFC片段插入到pGEX 4T 1载体中 ,构建成表达质粒p... PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一 .以pSK PPF1为模板 ,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段 ,称为PPFC .进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM T easy ,再酶切得到PPFC片段插入到pGEX 4T 1载体中 ,构建成表达质粒pGEX 4T PPFC .在BL2 1细胞中经IPTG诱导表达 ,得到GST PPFC融合蛋白 .用GST亲和柱纯化得到PPFC蛋白 ,将其作为抗原得到兔源的多克隆抗体 .Western杂交分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6.该抗体的获得为用免疫沉淀等免疫分析技术研究PPF1与其它蛋白质的相互作用 。 展开更多
关键词 ppf1基因 C端片段 大肠杆菌 融合表达 纯化 抗体制备 多克隆抗体 植物细胞
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延缓衰老基因PPF1转化水稻的初步研究 被引量:7
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作者 李双成 张玉 +3 位作者 王世全 尹福强 邹良平 李平 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1014-1020,共7页
利用农杆菌介导法,把短日豌豆花后特异表达、具有延缓衰老作用的基因PPF1(post-floral-specificgeneexpressedinshort-day-grownG2pea)转入水稻,以期获得延缓衰老的转基因植株。约970块未成熟胚性愈伤组织与农杆菌共培养后,得到了约280... 利用农杆菌介导法,把短日豌豆花后特异表达、具有延缓衰老作用的基因PPF1(post-floral-specificgeneexpressedinshort-day-grownG2pea)转入水稻,以期获得延缓衰老的转基因植株。约970块未成熟胚性愈伤组织与农杆菌共培养后,得到了约280块抗性愈伤组织,从中分化出抗性绿苗54株。PCR和Southernblotting检测结果表明,外源基因已经插入受体基因组,其中42株含有目的基因,阳性率为77.7%。部分阳性植株分析表明,多数转基因植株的叶绿素含量和光合指标显著高于对照。衰老进程研究证实,转基因植株的叶片衰老表现一定程度的延迟。说明PPF1基因在植株内得到了表达,并具一定延缓衰老的作用。 展开更多
关键词 农杆菌介导 短日豌豆花后特异表达基因ppf1 延缓衰老 叶绿素含量 光合指标 叶片衰老进程
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Expression of the Thylakoid Membrane Localized PPF1 in Transgenic Arabidopsis Affects Chloroplast Development 被引量:3
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作者 徐云剑 王大勇 朱玉贤 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第11期1314-1320,共7页
PPF1 is a vegetative growth related gene that encodes a putative membrane protein having high homology with Arabidopsis chloroplast thylakoid protein ALB3. Immunoelectron microscopic assay showed that PPF1 was mainly ... PPF1 is a vegetative growth related gene that encodes a putative membrane protein having high homology with Arabidopsis chloroplast thylakoid protein ALB3. Immunoelectron microscopic assay showed that PPF1 was mainly localized in the thylakold membrane and was highly expressed in well-developed chloroplasts of short day (SD) grown G2 pea while having a very low abundance in chloroplasts of long day (LD) grown plants two weeks after flowering. Comparison of the leaf senescence processes in transgenic Arabidopsis and wild type plants revealed that overexpression of PPF1 delayed leaf senescence, while the depression of its Arabidopsts homologue (ALB3) with PPF1 antisense mRNA accelerated leaf senescence obviously. Ultrastructural analysis of transgenic Arabidopsis plants showed that when PPF1 was overexpressed in Arabidopsis, the chloroplasts were bigger and had much more grana and stroma thylakoid membranes than those of wild type plants. On the contrary, when PPF1 was expressed in antisense orientation to reduce the level of PPF1 homologue in Arabidopsis, the transgenic plants had smaller chloroplasts With less grana. and poorly developed thylakoid membrane systems. These results suggested that the developmental status of chloroplasts was positively correlated with the level of PPF1 or its Arabidopsts homologue, ALB3. Our results suggested that PPF1 gene might regulate plant development by controlling chloroplast development. 展开更多
关键词 ppf1 IMMUNOLOCALIZATION chloroplast development SENESCENCE
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差异筛选与基因克隆
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作者 朱玉贤 《科学中国人》 2003年第7期44-45,共2页
1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调... 1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调控因子基因Knotted1表达,也能明显延缓烟草叶片的衰老.与此同时,有学者撰文称在番茄中过量表达拟南芥己糖酸化酶基因,导致转基因植物衰老进程加快.此后,不少作者相续报道了不同基因或不同成份对植物生长发育的调控作用. 展开更多
关键词 基因克隆 基因植物 cDNA差示分析法 ppf1基因 细菌异戊烯转移酶基因 细胞分裂素 差异筛选 G2豌豆 生长发育
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