在法兰克福大学访问研究的体会

受中国留学基金(China Scholarship Council)和德国研究基金(DFG)联合资助，我于2002年9月1日至2002年11月29日在德国法兰克福大学有机与化学生物学研究所进行了为期3个月的访问研究。

不同胃疾病来源幽门螺杆菌菌株PPIase编码基因分布频率及其意义

目的:探讨肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)编码基因在不同胃疾病来源幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)菌株中的分布情况,旨在揭示其在胃疾病动态发展过程中的作用及其与胃疾病相关性.方法:选取浅表性胃炎(superficial gastritis,GS)、萎缩性胃炎(atrophic gastritis,GA)、胃癌(gastric cancer,GC)三组疾病来源胃黏膜活检标本分离培养出的H.pylori菌株64例,其中GS26例、GA18例、GC20例,使用酚-氯仿法提取菌种DNA,经聚合酶链反应及琼脂糖凝胶电泳对PPIase编码基因进行检测.用2检验或Fisher精确检验分析不同胃疾病来源H.pylori菌株PPIase编码基因分布频率差异.结果:GA组来源的H.pylori菌株PPIase基因分布频率(94.4%)最高,与GS组(57.7%)和GC组(65.0%)相比差异有统计学意义(P=0.014,P=0.045);GC组(65.0%)PPIase基因分布频率高于GS组(57.7%),无统计学差异(P>0.05).结论:萎缩性胃炎来源H.pylori菌株携带较高频率PPIase编码基因,其与萎缩性胃炎的发生密切相关.

人亲环素B基因的克隆表达及重组蛋白的生物活性

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人淋巴细胞中扩增出亲环素Ｂ（ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＢ，ＣｙＰＢ）基因，克隆入ｐＥＴ－２８ａ载体中表达．表达产物以包涵体形式存在，占细菌可溶性蛋白的１５％．经Ｎｉ－ＮＴＡ树脂金属螯合亲和层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析纯化，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测呈单一条带，毛细管电泳为单一色谱峰，纯度达９５％．经复性处理。

肽基脯氨酰异构酶在细胞核内的功能

有许多酶具有调节转录因子的功能，例如蛋白激酶、磷酸酯酶和乙酰转移酶等。目前Ｌｅｖｅｒｓｏｎ等提出一种新的酶调节机制：肽基脯氨酰异构酶（Ｐｅｐｔｉｄｙｌ－ｐｒｏｌｙｌｉｓｏｍｅｒａｓｅｓ，ＰＰＩａｓｅ）参与调节转录因子的活性［１］。转录因子ｃ－Ｍｙｂ结...

重组日本血吸虫FKBP12基因的酶活性及其转录水平鉴定

目的对日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)FK506结合蛋白12(FKBP12)进行肽基脯氨酸顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)活性鉴定,并比较它与26 000 Mr的谷胱甘肽转移酶(Sj26GST)基因在成虫、尾蚴和虫卵的转录水平。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增SjFKBP12基因,将其克隆入pGEX-4T-1载体中,诱导表达重组融合蛋白,经纯化后进行PPIase活性测定。利用RT-PCR半定量分析SjFKBP12基因与Sj26GST基因的转录水平。结果将SjFKBP12基因成功克隆入pGEX-4T-1载体中后,表达、纯化的重组融合蛋白有PPIase活性。SjFKBP12在尾蚴与虫卵期的转录水平相仿,都高于Sj26GST基因,是成虫期转录水平的1.5倍左右。结论成功鉴定了重组SjFKBP12酶活性,SjFKBP12在尾蚴和虫卵期较高的转录水平,为将其进行疫苗等研究提供了依据。

亲环素A与头颈部肿瘤的研究进展

亲环素家族（cyclophilins，Cyps）最先被认为是环胞素A（cyclosporine A，CsA）的胞内结合蛋白，是由一组具有肽基脯氨酰顺反异构酶活性（peptidyl—prolyl cis transisomeras，PPI—ase）的蛋白质所组成，目前，已知人类中有7大类16种亲环素蛋白。亲环素A（cyclophiline A，CypA）是亲环素家族中重要的一员，是最早被发现的亲环素，也是Handschumacher在1984年从小牛胸腺中最早被提纯的亲环素。CypA在病毒感染、T细胞功能、肌肉分化、免疫抑制等方面起着重要的作用。近年来，大量研究表明，CypA与肿瘤的发生、发展有着必然的联系。本文就CypA在头颈部肿瘤中作用的相关进展及作用机制作一综述。

FKBP52功能及与疾病联系的研究进展

FKBP52为FK506结合蛋白(FKBPs)家族的一个亚类,其包括FK1、FK2、TRP区在内的三个结构区。其中,FK1区的FK506结合位点具有可调控靶蛋白的PPIase活性,而TRP区可为Hsp90提供结合位点。FKBP52的主要功能在于对甾体激素受体信号通路的调节,如受体的结合、转运等,同时在调控神经元微管功能中也发挥重要作用。最近研究发现,FKBP52与多种癌症、生殖疾病及某些中枢神经系统相关疾病的发生存在一定联系。本文主要对FKBP52目前已知的生物学功能及与疾病的关联进行综述,同时对其应用前景进行展望,以期为FKBP52的进一步研究提供参考。

蜡梅亲免素基因CpFKBP的克隆与表达分析

在已构建好的蜡梅花cDNA文库及EST分析的基础上,随机克隆测序得到一个蜡梅FKBP基因,将其命名为CpFKBP,Genebank登录号:JQ337962.该基因cDNA长为482bp,具有一个339bp的ORF,编码一个113个氨基酸的多肽,预测等电点为8.48,理论分子量为12.08KD.在大肠杆菌中获得并纯化了重组的CpFKBP蛋白质,并进一步对重组蛋白进行PPIase活性分析,结果显示CpFKBP重组蛋白有较高的PPIase酶活性.

环孢素A结合蛋白的生物学功能

环抱素A结合蛋白（cyclophilins，CyP）是一类在生物界广泛存在、高度保守的蛋白质。它有肽基脯氨酰顺/反异构酶（peptidylprolylcis/transisomerase,PPIase）活性、核酸酶活性、分子伴侣功能以及多种细胞因子特性。这些特征决定了CyP对细胞生命活动的维持有重要作用。

Cyclophilin A-regulated Ubiquitination Found Critical for RIG-I-mediated Antiviral Immune Responses

Cyclophilin A(CypA,encoded by PPIA)is a peptidyl-prolyl cis/trans isomerase(PPIase)that is expressed ubiquitously in all type of cells.CypA is the major cellular target for the immunosuppressive drug cyclosporin A(CsA)and is involved in protein folding,cell signaling,inflammation,and tumorigenesis.Recent work suggests that it

SLE患者血清抗PPIase自身抗体的检测

作者从猪肾皮质提纯了肽基一脯氨酰基转移同工酶(PPIase,即环孢素A结合蛋白),并建立了检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗PPIsae抗体的ELISA方法。检测80例SLE病人血清,结果抗PPIase抗体阳性率53％,显著高于类风湿关节炎(RA)组(2.5％,P<0.05)和其它风湿病组(3.3％,P<0.05)。因此,抗PPIase抗体的检测可作为SLE诊断的指标。

球形孢子丝菌亲环素B的功能和定位研究

目的研究球形孢子丝菌亲环素B(CypB)的抗原性、免疫原性以及亚细胞定位。方法通过生物信息学方法从球形孢子丝菌基因组数据库中鉴定出CypB基因(Sg.CypB)及其蛋白(Sg.CypB)。通过原核表达的方法表达出重组Sg.CypB(r Sg.CypB)。将纯化的重组蛋白免疫SD大鼠获得抗r Sg.CypB抗体,用ELISA法检测获得的抗体滴度。用获得的抗体对球形孢子丝菌行免疫荧光染色,观察Sg.CypB在球形孢子丝菌上的分布。结果Sg.CypB基因长930 bp,编码的Sg.CypB含有309个氨基酸。预测Sg.CypB具有分泌信号肽和C端跨膜序列,蛋白主体部位位于细胞外,具有典型的肽基脯氨酸顺反异构酶(PPIase)活性,且能检测出原核表达的r Sg.CypB具有PPIase活性。利用大鼠产生的抗r Sg.CypB抗体(滴度达到1∶51200,P<0.05),免疫荧光检测到Sg.CypB位于球形孢子丝菌表面。结论Sg.CypB是位于球形孢子丝菌表面的具有PPIase活性的抗原分子,可能在真菌-宿主相互作用中发挥作用。

免疫亲和素与蛋白折叠、信号传导和免疫抑制的关系

免疫亲和素(CyP,FKBP)分别是免疫抑制剂环孢素A、FK506和雷帕霉素的受体蛋白,对阻断T细胞信号传递,介导免疫抑制发挥重要作用。这些蛋白又具有肽基脯氨酸顺/反异构酶活性,是普遍存在于生物体内的两个蛋白质家族,对蛋白质折叠、装配和运输等细胞生命过程起调节作用。

肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1与心血管疾病的研究进展

Pinl是肽基脯氨酰顺反异构酶（peptidyl．prolylcis．transisomerase，PPlase）微小菌素蛋白家族成员之一，由哈佛大学医学院的卢坤平教授于1996年首次发现并命名，是目前发现的人体内唯一能够识别磷酸化的丝氨酸／苏氨酸．脯氨酸（pSer／Thr-Pro）基序的顺反异构酶。Pinl蛋白编码基因定位于19p13，由163个氨基酸组成，相对分子质量为18000，含WW和PPlase两个结构域，WW结构域特异结合底物蛋白的pSer／Thr-Pro基序，PPIase结构域催化其肽键发生顺反异构，从而改变靶蛋白的构象，调节靶蛋白的活性、稳定性、磷酸化水平、亚细胞定位及与其他蛋白质之间的相互作用，参与调控细胞周期、基因转录和信号转导等生命活动过程。

亲免蛋白在植物中生理功能的研究进展

亲免蛋白(immunophilin)是在生物体内普遍存在的一类蛋白,它们的共同特征是拥有肽基脯氨酰顺/反异构酶活性(peptidyl prolyl cis/transisomerase,PPIase)结构域。亲免蛋白在植物中存在的数量最多,在植物细胞的各个部位都有分布,对植物细胞的生命活动有广泛的影响。本文就目前亲免蛋白的研究现状,总结了它们在植物的生长发育、对逆境反应过程中的生理作用,以及叶绿体亲免蛋白在光合作用中的关键功能。

Identification of LepA as PPIase reveals a common molecular mechanism of translational GTPases regulating L11 switch on the ribosome

LepA, the highly conserved translational GTPase (trGTPase), triggers one-codon back-movement of the elongating ribosome. Here we identify a new enzymatic activity