miR-338-3p通过靶向PPM1B促进口腔癌细胞凋亡

目的探讨miR-338-3p在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的作用及其调节细胞增殖、迁移和凋亡的机制。方法以正常口腔组织或成人牙龈成纤维细胞(HGF)作为对照组,RT-qPCR法检测OSCC组织或OSCC细胞(TSCCA,CAL-27,Tb3.1)中miR-338-3p和PPM1B mRNA的表达情况;免疫组化法检测OSCC组织与正常组织PPM1B表达量;过表达miR-338-3p后,MTT法检测OSCC细胞增殖、Annexin V-FITC-PI双染试剂盒检测OSCC的凋亡;Western blot法检测PPM1B与凋亡相关蛋白Bax和Claved-caspase 3、Bcl-2的表达;采用生物信息学软件Target scan网站和荧光素酶检测法探索miR-338-3p和PPM1B潜在的靶向关系。通过敲除和过表达PPM1B探索其对OSCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果OSCC组织和细胞中miR-338-3p表达下调,而PPM1B mRNA与蛋白水平均升高(P<0.05)。过表达miR-338-3p可抑制OSCC细胞的增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05)。Western blot检测显示,miR-338-3p可以促进Bax和Claved-caspase 3并抑制PPM1B、Bcl-2的表达(P<0.05)。敲除PPM1B也抑制了细胞的生长并诱导细胞凋亡(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测显示PPM1B和miR-338-3p之间有直接结合(P<0.05)。过表达PPM1B部分逆转了miR-338-3p对OSCC细胞增殖、凋亡的作用(P<0.05)。结论miR-338-3p在OSCC患者和OSCC细胞系中表达下调。过表达miR-338-3p通过靶向PPM1B,抑制OSCC细胞增殖并诱导细胞凋亡。

TRIM59靶向调控PPMIB对鼻咽癌侵袭和迁移的作用

目的探讨TRIM59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法TCGA数据库分析TRIM59在鼻咽癌中的表达;Western blot实验检测TRIM59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况;RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中TRIM59和PPM1B mRNA和蛋白的相对表达量;建立HNE1细胞TRIM59过表达及抑制表达的稳定细胞系,实验设未转染组(Control)、模拟物阴性对照组(mimic NC)、TRIM59模拟物组(mimic-TRIM59)、抑制剂阴性对照组(inhibitor NC)及TRIM59抑制剂组(si-TRIM59)。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测TRIM59和PPM1B靶向关系;Transwell小室检测HNE1细胞侵袭和迁移能力的变化。结果TCGA数据库结果表明,TRIM59在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P=0.006);TRIM59在鼻咽癌组织中表达增加(P=0.01)且PPM1B表达下降(P=0.03);与HNEpC细胞相比,TRIM59在HNE1细胞中相对表达量显著增加(P=0.04),PPM1B在HNE1细胞中相对表达量显著下降(P=0.02);PPM1B为TRIM59下游靶基因且与TRIM59表达呈负相关(P=0.01);Transwell结果显示,上调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力增强(P=0.01,P=0.02),下调TRIM59表达,HNE1细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制(P=0.01);同时下调TRIM59且上调PPM1B表达后,HNE1细胞侵袭和迁移能力均较单独下调TRIM59表达显著被抑制(P=0.02,P=0.01)。结论TRIM59通过靶向调控PPM1B影响鼻咽癌细胞侵袭和转移。