蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因5'侧翼区多态性在广东汉族人群中的分布

目的:探讨蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因PPP2RIA启动子区的遗传多态性在中国南方汉族人群中的分布特征。方法:随机选取部分广东汉族人群,获取全血基因组DNA。PCR扩增获得PPP2RIA基因5′-侧翼区的目的片段产物直接再测序,筛查并确证潜在的基因多态性位点,采用HaploView软件进行该人群多态性等位基因分布频率的分析、并与HapMap结果进行分布特征比较。结果:PCR扩增和成功测序63例健康人(126条染色体)PPP2RIA基因-1 844～+201nt的目的片段,序列比对发现该人群中6个已知多态性位点及其人群最小等位基因频率分别为-1 039 G>T(+Ins)(rs10414793,但其中T等位基因型含有29个碱基片段的插入)(8.73%)、-568 G>A(rs1864007)(25.40%)、-241 -/G(rsl 1453459)(26.90%)、+87 T>C(rs13344984)(7.94%)、+107 -/C(rs3833207)(30.16%)和+108 A>G(rs1 7554825)(7.94%);且其中2个位点在该人群中的分布与HapMap公布的国外人群数据存在不同(P<0.05);同时,该人群中还发现-512 G>A(2.38%)的潜在新多态性位点。结论:筛查PPP2RIA基因5′-侧翼区在中国广东汉族人群中多态性位点的等位基因分布,为进一步开展多态性功能性分析提供基础。

镉对肝细胞中PPP2R1A启动子区甲基化及其转录水平的影响

目的：分析镉染毒处理肝细胞中蛋白磷酸酶2A（ PP2A）-Aα支架亚基基因PPP2R1A启动子区甲基化状态及其转录水平的改变。方法采用永生化人正常肝L02细胞及肝细胞癌HepG2细胞为研究对象，对其进行以下分组和处理：①低、中和高剂量氯化镉（ CdCl2）处理组，分别予浓度为20.0、40.0和60.0 μmol/L CdCl2处理24 h；②低、中和高剂量5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-dC）处理组，分别予浓度为2.5、5.0和10.0 μmol/L 5-Aza-dC处理48 h；③5-Aza-dC组予浓度为5.0 μmol/L的5-Aza-dC处理48 h，CdCl2组予浓度为40.0 μmol/L 的 CdCl2处理24 h，（5-Aza-dC＋CdCl2）组予浓度为5.0 μmol/L的5-Aza-dC预处理48 h后再予浓度为40.0 μmol/L CdCl2处理24 h；④ CdCl2处理组予浓度为40.0 μmol/L CdCl2处理24 h。上述4种分组均设对照组，予等体积生理氯化钠溶液或二甲基亚砜处理。经①~③处理后的细胞采用实时荧光定量聚合酶链反应（ PCR）检测PPP2R1A、金属硫蛋白1B（MT1B）和DNA甲基转移酶3A（DNMT3A）的mRNA转录水平（以对照组水平为1.00）。经④处理后的细胞采用亚硫酸氢盐修饰后PCR扩增PPP2R1A启动子区克隆测序检测CpG岛的甲基化情况。结果 L02细胞和HepG2细胞中，不同剂量CdCl2处理组PPP2R1A mRNA转录水平随镉处理剂量增高呈剂量依赖性下降（ P〈0.05）；不同剂量5-Aza-dC处理组PPP2R1A mRNA转录水平随5-Aza-dC处理剂量增加呈剂量依赖性升高（P〈0.05）。2种细胞中，分别与对照组和5-Aza-dC处理组比较，CdCl2处理组和（5-Aza-dC＋CdCl2）处理组PPP2R1A mRNA转录水平均下降（P〈0.05），MT1B和DNMT3A的mRNA转录水平均升高（P〈0.05）；与CdCl2处理组比较，（5-Aza-dC＋CdCl2）处理组PPP2R1A mRNA转录水平均升高（P〈0.05），MT1B和DNMT3A的mRNA转录水平均下降（P〈0.05）。甲基化测序结果显示，L02细胞 CdCl2处理组 PPP2R1A 启动子区甲基化率高于对照组（6.35％ vs 2.31％，P 〈0.01）， HepG2细胞CdCl2处理组PPP2R1A启动子区甲基化率与对照组比较，差异无统计学意义（5.19％ vs 3.85％，P＆gt;0.05）。结论外源化学物CdCl2可诱导肝细胞中PPP2R1A转录水平降低，可能与镉能够引起目的基因启动子区甲基化状态改变有关，提示PP2A亚基基因的表观遗传学调控可影响镉诱导的肝细胞功能。

PPP2R1A基因变异致智力障碍、小头畸形和胼胝体缺如1例并文献复习

目的 总结PPP2R1A基因变异的临床特征,探讨基因表型关系。方法 回顾性分析1例2021年7月确诊的PPP2R1A基因变异患儿临床资料,并复习相关文献。结果 2岁男性患儿,临床特征为智力障碍、发育迟缓、小头畸形、长脸、四肢肌张力低下和胼胝体缺如。全外显子测序发现PPP2R1A基因R258H新生错义变异。目前无中文文献报道,全球检索到4篇英文文献37例病例。所有变异均为新生错义变异(共17个单核苷酸变异),其中以p.R182W和p.M180T为热点变异。具有至少两个临床表型,共同临床特征为中重度智力障碍(91.2%),发育迟缓(78.9%),肌张力低下(86.8%),轻症为p.F141I、p.T178N/S和p.M180T/V/K/R变异伴巨头畸形,没有痫性发作;重症为p.P179L、p.R182W、p.R183W/Q、p.S219L、p.V220M和p.R258S/H变异伴小头畸形、长脸、痫性发作和胼胝体发育不全。结论 PPP2R1A基因变异以不同程度智力障碍/发育迟缓合并肌张力低下为主要特征,巨头或小头畸形伴胼胝体发育不全、面部畸形等。基因型与表型存在一定相关性。

广东人群PP2A-Aα亚基基因5′-侧翼区单体型分析

目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)-Aα亚基基因启动子区多态性的人群单体型分布特征。方法采用Haploview软件分析部分广东汉族人群PPP2R1A基因5′-侧翼区筛查到的7个多态性位点的遗传学特征、连锁不平衡(LD)、标签(tag)SNP和单体型(域)分布。结果各多态性位点基因型频率均符合H-W平衡(P>0.05);各位点在该人群的杂合度(π)不同,且在-568G>A和+87T>C与HapMap中的不同人群存在明显差异(P<0.05);-1039G>T(+Ins)与+87T>C和+108A>G、-568G>A与-241-/G位点之间呈强LD,+87T>C与+108A>G之间为完全LD;构建该人群中的5种单体型(H1～H5),频率分布为野生单体型(H1)53%、其余4种变异单体型(H2～H5)为44%;得到两个单体型域,筛选出-1039G>T(+Ins)、-512G>A、-241-/G、+107-/C为4个tag SNP,并确定了2个单体型域内标签SNPs(htSNP)及其分别代表的单体型。结论首次确定并报道中国广东汉族健康人群PPP2R1A基因5′-侧翼区的标签SNP和单体型(域)分布。

不同剂量电离辐射对人外周血淋巴细胞DNA损伤修复相关基因转录水平的影响

目的阐明不同剂量电离辐射对人外周血淋巴细胞中DNA损伤修复相关基因(hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D)转录水平的影响。方法抽取志愿者外周静脉血约30 mL,分置于7支肝素锂抗凝管中,以剂量率为0.38 mGy·min-1的60Coγ射线(剂量分别为0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6和3.2 Gy)对人外周血照射后培养12 h,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并进行定量和纯度分析。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)的方法分析不同剂量电离辐射诱导DNA损伤修复相关基因hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D基因转录水平的变化。结果 hOGG1基因、MGMT基因和PPP2R2D基因的mRNA转录水平均在0.1 Gy时达到峰值。PPP2R1A基因的mRNA转录水平在0.2 Gy剂量时达到峰值。hOGG1基因转录水平在0.1和0.2 Gy剂量组均较对照组显著增高,差异均具有统计学意义(P <0.05)。MGMT基因转录水平在0.1、0.2和0.8 Gy剂量组均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(P <0.05)。PPP2R1A基因转录水平在0.2 Gy剂量组比对照组明显增高,在3.2Gy剂量组比对照组明显降低,差异均具有统计学意义(P <0.05)。PPP2R2D基因转录水平在0.1、0.2、0.4和0.8 Gy剂量组均明显高于对照组,3.2 Gy剂量组比对照组明显降低,差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论不同剂量电离辐射均可诱导DNA损伤修复相关的应答基因hOGG1、MGMT、PPP2R1A和PPP2R2D的转录水平改变,适宜剂量的电离辐射(0.1~0.2 Gy)可诱导细胞产生辐射兴奋效应或适应性反应。