染料木黄酮对青春期前雄性大鼠生殖系统影响的机制研究

目的研究染料木黄酮(genistein,GEN)对青春期前雄性大鼠生殖系统影响的机制。方法选用30只初断乳(21日龄)SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组(Con组)、GEN低剂量组(G1组)、GEN高剂量组(G2组),每组10只。根据大鼠体质量,分别以5 mL/kg玉米油、150 mg/kg和300 mg/kg用玉米油溶解的GEN灌胃6周,隔天称取体质量1次。6周后处死大鼠,解剖睾丸、附睾、前列腺组织,计算脏器系数;观察睾丸组织病理结构变化;计数精子数量并计算精子畸形率;放射免疫法检测血清中睾酮和雌二醇的质量浓度;免疫荧光技术检测睾丸组织中蛋白磷酸酶2调节亚基2C(PPP2R2C)蛋白的表达定位;分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠睾丸组织中PPP2R2C和细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK2)的mRNA和蛋白表达水平;免疫共沉淀法检测睾丸组织中蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性。结果各组大鼠体质量、精子数量、血清雌二醇、PP2A酶活性差异均无统计学意义(P>0.05);G2组睾丸组织的病理结构紊乱;G1和G2组的精子畸形率高于Con组(P<0.05);G2组的血清睾酮质量浓度低于Con组(P<0.05);G2组PPP2R2C和CDK2的mRNA水平高于Con组(P<0.05),但蛋白水平低于Con组(P<0.05);PPP2R2C蛋白在各组睾丸组织中均有表达。结论青春期前长期暴露高剂量(300 mg/kg)GEN会对雄性大鼠成年后的生殖功能造成不良影响。由于在PP2A酶活性没有改变的情况下,磷酸化CDK2(p-CDK2)蛋白的表达量出现下降,PPP2R2C-PP2A-CDK2磷酸化路径可否影响大鼠的生殖系统仍需进一步研究。