PPP2R5C基因结构特点和生物学功能

PPP2R5C是蛋白磷酸酶2A的调节性亚单位中一个家族成员,它在调节细胞增殖、分化和转化等方面具有重要作用,其作用主要通过对P53蛋白某些位点氨基酸的去磷酸化而实现。近期研究提示,PPP2R5C基因表达模式的改变与细胞恶性转化相关;此外,有研究发现PPP2R5C可以作为B-CLL病情进展的相关标记。本文就PPP2R5C基因结构、生物学功能及PPP2R5C基因与肿瘤发生发展的关系进行了探讨。

PPP2R5C转录本在正常人和血液肿瘤病人中的分布情况

目的:建立分析不同PPP2R5C转录本检测方法,分析正常人和血液肿瘤病人中5种PPP2R5C基因转录本的表达特点。方法:根据PPP2R5C基因的结构特点,设计4对引物,利用RT-PCR方法分析9例正常人、7例T细胞-非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)、11例B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和8例急性髓细胞白血病(AML)病人外周血单个核细胞(PBMC)中PPP2R5C基因的表达情况。结果:所设计的4对引物,均可在样本中扩增到预期PCR产物,其中第1对引物可扩增两个不同大小PCR产物(包含12+13+14外显子的大片段及仅含12+14外显子的小片段),而另3对对引物所扩增的产物分别为10+11+12+12 a外显子,Ⅲ+2外显子和Ⅳ+2外显子的基因片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实。结果显示所有样本均表达全部PPP2R5C转录本。结论:初步建立区分不同PPP2R5C转录本的方法,各转录本在正常人和不同血液肿瘤病人中的分布情况基本一致。

下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53通路相关调控基因表达谱的影响

目的利用基因芯片技术研究RNA干扰下调PPP2R5C对Jurkat细胞中GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53通路相关基因表达的影响。方法利用核转染技术将PPP2R5C-si RNA799转导Jurkat细胞,培养48 h后,提取细胞总RNA,纯化m RNA后反转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3’IVT杂交,以Affymetrix Gene Chip Scanner 3000扫描仪扫描得到原始图像数据,并应用Gene Spring GX 11.0软件进行差异表达谱分析。结果基因芯片分析GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53信号通路相关的47个基因,发现全部基因发生了差异表达,其中上调基因有22个,下调基因有25个。明显上调的基因有SNAI1、APC、CDKN1A、ATM、MDM2和pTEN,而明显下调的基因只有GSK-3β。结论下调Jurkat细胞PPP2R5C基因时,在一定程度上选择性调节涉及细胞增殖和凋亡相关的GSK-3β、MDM2、pTEN和TP53信号通路基因的表达,从而抑制Jurkat细胞增殖。

下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞TAL1相关调控基因表达谱影响的初步分析

目的:前期研究显示,下调PPP2R5C表达能抑制T细胞白血病细胞株Jurkat细胞增殖。本研究利用基因芯片技术分析RNA干扰下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞中TAL1通路相关基因的影响。方法:利用核转染技术将PPP2R5C-siRNA799转导Jurkat细胞,培养48 h后,提取细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3'IVT杂交,以Affymetrix Gene Chip Scanner 3000扫描仪扫描得到原始图像数据,并应用Gene spring GX 11.0软件进行差异表达谱分析。结果:基因芯片分析的TAL1信号通路相关的26个基因全部发生了差异表达,其中上调表达的基因有15个,下调表达的基因有11个;明显上调表达的基因有GATA1、TCF4、XRCC6和TCF3,而明显下调表达的基因有SIN3A和RUNX1。结论:下调Jurkat细胞PPP2R5C基因表达,在一定程度上能抑制TAL1信号通路基因,从而抑制Jurkat细胞增殖。

下调PPP2R5C表达对K562细胞TP53相关通路基因表达的影响

目的:利用基因芯片技术研究RNA干扰下调PPP2R5C对K562细胞中TP53通路相关基因表达的影响。方法:Affymetrix U133 plus 2.0基因表达谱芯片检测核转染PPP2R5C-siRNA991和SC对照组的K562细胞,应用Genespring GX 11.0软件分析差异基因相关信号通路变化情况。结果:基因芯片分析TP53信号通路紧密相关的22个基因,发现全部基因发生了差异表达,其中上调基因有8个,下调基因有14个。明显上调的基因有EP300、CCND1、BRCA2和USP7,而明显下调的基因则有MDM4、ESR1、ATM、CDK2、CDKN1A、TP53和CDKN2A。结论:下调K562细胞PPP2R5C基因时,在一定程度上选择性调节与细胞增殖密切相关的TP53信号通路相关基因的表达,从而抑制K562细胞增殖,促进了K562细胞凋亡。

RNA干扰下调PPP2R5C对T-ALL TCR Vβ亚家族分布和克隆增殖的影响

目的:基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA(PPP2R5C-siRNA)抑制白血病T细胞增殖的结果,进一步了解PPP2R5C-siRNA对T-ALL样本中TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用PPP2R5C-siRNA转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单个核细胞(PBMC),设无关序列对照组(SC)和空白对照组(NC);利用实时定量PCR检测PPP2R5C基因表达水平.利用RT-PCR扩增各组样本中24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区3(CDR3);阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,了解其Vβ亚家族T细胞克隆性.结果:PPP2R5C-siRNA处理后明显下调PBMC中PPP2R5C基因表达水平.2例初发T-ALL外周血中分别可检测到10和17个Vβ亚家族,多数Vβ亚家族T细胞为多克隆性,病例1中Vβ9和Vβ17为寡克隆性,而病例2中,Vβ14和Vβ16呈寡克隆性;经过RNA干扰处理后,TCR Vβ亚家族表达率降低,仅检测到3和4个Vβ亚家族,分别为Vβ2,Vβ3,Vβ16和Vβ17.其中2个Vβ家族的寡克隆性模式发生改变,病例1中,Vβ17转为多克隆,而病例2中,Vβ16也转变为多克隆.结论:RNA干扰下调白血病T细胞PPP2R5C基因表达抑制细胞增殖时,在一定程度上影响TCR Vβ亚家族T细胞增殖和克隆模式变化,对正常T细胞功能可能存在一定影响.

PPP2R5C小干扰RNA的安全性分析

目的探讨PPP2R5C小干扰RNA的安全性。方法利用原子力显微镜观察转染PPP2R5C小干扰RNA 72 h K562细胞株干扰组、空转组及阴性对照组间微观形态学变化;利用荧光实时定量PCR检测K562细胞株组、健康人骨髓单个核细胞组、转染PPP2R5C-siRNA的健康人骨髓单个核细胞组及空转的健康人骨髓单个核细胞组的PPP2R5C基因表达量;利用甲基纤维素半固体培养方法分析PPP2R5C小干扰RNA作用后,对转染组(siRNA)及空转组(MOCK)的健康人骨髓单个核细胞体外分化及增殖能力的影响。结果转染PPP2R5C小干扰RNA 72 h K562细胞株各组间在细胞高度和半径上的差异无统计学意义(P> 0. 05); 3例健康人骨髓单个核细胞中的PPP2R5C基因表达明显低于K562,差异有统计学意义(P <0. 05);转染前后骨髓单个核细胞中PPP2R5C基因表达量无明显变化。PPP2R5C-siRNA转染、种板后14 d,健康人骨髓单个核细胞体外BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg的形成与MOCK对照组比较差异无统计学意义(P=0. 723、0. 826、0. 448)。结论 PPP2R5C小干扰RNA对健康人骨髓单个核细胞的体外增殖和分化无显著影响,初步说明其安全性。

下调PPP2R5C诱导K562细胞凋亡过程中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体及调控基因表达水平的研究

目的：在前期研究显示下调PPP2R5C抑制慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞增殖基础上，利用基因芯片技术研究RNA干扰下调PPP2R5C对K562细胞中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）通路相关基因表达的影响。方法利用核转染沉默K562细胞株中PPP2R5C基因，培养48 h后，提取细胞RNA，经质控合格后进行Affymetrix基因表达谱芯片分析，并应用Genespring GX 11.0软件对TRAIL信号通路相关的21个基因进行差异表达谱分析。结果基因芯片分析发现全部基因存在表达差异，其中上调基因有8个，下调基因有13个。明显上调的基因有FASLG、TNFSF11和RIPK1，而明显下调的基因有CFLAR、TNFRSF10B、TRAF2、TNFRSF10D、TNFRSF10C、TNF和CASP10。结论下调K562细胞PPP2R5C基因时，在一定程度上涉及对TRAIL信号通路基因的抑制，从而抑制了K562细胞增殖，促进了K562细胞凋亡。