影响根癌农杆菌的电击转化条件

采用电击转化方法将双元载体质粒pCAM3300导入根癌农杆菌LBA4404,研究了不同实验条件对转化率的影响.结果表明:当电场强度为11 kV/cm时,转化率最高,每微克DNA得到9.8×103CFU;在细胞OD600为1.0时进行电转化,转化率最高,每微克DNA得到9.54×103CFU;在一定的细胞浓度范围内,电击转化率与细菌浓度密切相关,转化率随着细菌浓度的上升而上升;质粒大小与电击转化率之间没有明确的关系.将含pCAMBIA3300的根癌农杆菌与粗糙脉胞菌共培养转化,在含有膦化麦黄桐(PPT)(405 mg/L)的平板上筛选到转化子.PCR扩增转化子的染色体,初步证明Bar基因整合进粗糙脉胞菌的染色体中.

农杆菌介导白细胞介素-2基因转化大白菜的研究

以大白菜4￣5d苗龄、带2mm子叶柄的子叶为外植体,利用农杆菌介导的方法将人源白细胞介素-2基因(il-2)导入北方大白菜优良品种鲁白七号和602中,分别获得带有PPT抗性和卡那霉素抗性的两种转化植株,转化率分别最高达到16.7%和8.0%,讨论分析了两种质粒(PPT和卡那霉素两种抗性标记基因)对转化效率的影响。转化植株进行PCR和PCR-Southern杂交、Western杂交检测,结果证明白细胞介素-2基因已整合入白菜基因组中,il-2蛋白在转基因大白菜中得到表达。