FKBPs的研究进展

FKBPs是一类可以和免疫抑制剂 FK5 0 6结合的蛋白质。本文对其 PPIase活性、生物学特征及其与免疫抑制剂之间的关系的研究等进行了综述。

日本血吸虫Sj CyclophilinA基因的克隆、表达及其生物学功能研究

【目的】克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA(Sj CyPA)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,PCR扩增一EST序列的基因全长cDNA,提交到NCBI,登录号为GQ403666。应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达。诱导、表达、纯化和复性重组蛋白,测定其PPIase活性。利用Western blot检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。【结果】PCR获得了Sj CyPA编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为519bp。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在13d童虫表达量最高,为童虫期高表达基因。构建了重组表达质粒pET28a(+)-Sj CyPA,并在大肠杆菌中成功表达。复性重组蛋白具有PPIase活性。Western blot试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得18.72%的减虫率和44.6%的肝脏减卵率。【结论】获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPA基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPA原核重组表达质粒,在大肠杆菌中成功表达,纯化复性得到有PPIase活性的Sj CyPA重组蛋白,并证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。

银杏种子ADPG焦磷酸化酶研究初探

以广东南雄市产银杏（ＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａＬ．）种子为材料，研究ＡＤＰＧ焦磷酸化酶的特性实验结果表明，银杏种子中ＡＤＰＧｐｐｌａｓｅ最适温度为３０～３２℃，最适ｐＨ为８０～８３，二价阳离子Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、Ｂａ２＋、Ｃｕ２＋对其有明显影响，而Ｐｂ２＋有强烈的抑制作用ＡＤＰＧｐｐｌａｓｅ在银杏幼小种子中活性较低；在种子膨大期，其活性迅速而显著地增强；在种子成熟期。

银杏种子UDPG焦磷酸化酶特性的研究

银杏(Ginkgo biloba L.)种子中UDPG PPlase最适温度为29-30℃,最适pH为7.5-80,二价阳离子中Zn^(2+)、Ba^(2+)对其活性影响较小.Mn^(2+)、Mg^(2+)、Ca^(2+)对其有明显影响,而Cu^(2+)、Pb^(2+)有强烈的抑制作用.银杏种子幼小至膨大期,UDPG PPlase活性较低;种子成熟期至贮藏初期,活性迅速而显著地增强;贮藏过程中活性保持较高水平.

球形孢子丝菌亲环素B的功能和定位研究

目的研究球形孢子丝菌亲环素B(CypB)的抗原性、免疫原性以及亚细胞定位。方法通过生物信息学方法从球形孢子丝菌基因组数据库中鉴定出CypB基因(Sg.CypB)及其蛋白(Sg.CypB)。通过原核表达的方法表达出重组Sg.CypB(r Sg.CypB)。将纯化的重组蛋白免疫SD大鼠获得抗r Sg.CypB抗体,用ELISA法检测获得的抗体滴度。用获得的抗体对球形孢子丝菌行免疫荧光染色,观察Sg.CypB在球形孢子丝菌上的分布。结果Sg.CypB基因长930 bp,编码的Sg.CypB含有309个氨基酸。预测Sg.CypB具有分泌信号肽和C端跨膜序列,蛋白主体部位位于细胞外,具有典型的肽基脯氨酸顺反异构酶(PPIase)活性,且能检测出原核表达的r Sg.CypB具有PPIase活性。利用大鼠产生的抗r Sg.CypB抗体(滴度达到1∶51200,P<0.05),免疫荧光检测到Sg.CypB位于球形孢子丝菌表面。结论Sg.CypB是位于球形孢子丝菌表面的具有PPIase活性的抗原分子,可能在真菌-宿主相互作用中发挥作用。

肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1与心血管疾病的研究进展

Pinl是肽基脯氨酰顺反异构酶（peptidyl．prolylcis．transisomerase，PPlase）微小菌素蛋白家族成员之一，由哈佛大学医学院的卢坤平教授于1996年首次发现并命名，是目前发现的人体内唯一能够识别磷酸化的丝氨酸／苏氨酸．脯氨酸（pSer／Thr-Pro）基序的顺反异构酶。Pinl蛋白编码基因定位于19p13，由163个氨基酸组成，相对分子质量为18000，含WW和PPlase两个结构域，WW结构域特异结合底物蛋白的pSer／Thr-Pro基序，PPIase结构域催化其肽键发生顺反异构，从而改变靶蛋白的构象，调节靶蛋白的活性、稳定性、磷酸化水平、亚细胞定位及与其他蛋白质之间的相互作用，参与调控细胞周期、基因转录和信号转导等生命活动过程。