PR-957对A1反应性星形胶质细胞形成的影响

目的 探讨PR-957对A1反应性星形胶质细胞形成的影响.方法 取出生1 d内的雌性大鼠脑皮质培养出原代星形胶质细胞,将细胞分为对照组、LPS组及LPS+PR-957组.LPS组给予5μmol/L LPS处理48 h,LPS+PR-957组先用PR-957(终浓度200 nmol/L)处理1 h,再用5μmol/L LPS处理48 h.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测补体3(C3,A1反应性星形胶质细胞标记物)和肿瘤坏死因子α(TNF-α);采用实时荧光定量PCR法检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖6(glypicans 6,Gpc6)、SPARC样1(SPARC-like 1,Sparcl1)和脂质运载蛋白2(lipocalin 2,lcn2)mRNA的相对表达量.上述各实验均独立重复3次.结果 对照组几乎不表达C3,LPS组与LPS+PR-957组C3水平高于对照组,但LPS+PR-957组的C3水平低于LPS组(P<0.05).TNF-α的表达结果与C3一致.与对照组相比,LPS组和LPS+PR-957组的Gpc6 mRNA及Sparcl1 mRNA表达水平均降低,lcn2 mRNA表达水平均升高(P<0.001);与LPS组相比,LPS+PR-957组的Gpc6 mRNA及Sparcl1 mRNA表达水平均升高,lcn2 mRNA表达水平降低(P<0.001).结论 LPS能够诱导星形胶质细胞成为A1反应性星形胶质细胞;PR-957可以抑制LPS诱导的A1反应性星形胶质细胞形成.

免疫蛋白酶体抑制剂PR957对DOCA-高盐高血压小鼠肾脏纤维化的保护作用

目的探讨免疫蛋白酶体抑制剂PR957对醋酸脱氧皮质酮(DOCA)盐敏感型高血压小鼠血压和肾脏损伤的保护作用。方法给雄性C57BL/6J小鼠摘除左侧肾脏,2 d后皮下包埋DOCA药片,饮用含0.9%NaCl和0.2%KCl的高盐水,持续3周,复制DOCA-高盐高血压小鼠模型;治疗组小鼠分别给予皮下注射免疫蛋白酶体抑制剂PR957(12 mg/kg/d),每两天1次,持续3周;其余两组皮下注射DMSO与生理盐水的混合液。3周后处死小鼠测定肾脏指数。HE和Masson染色观察肾组织的形态结构变化;qPCR方法检测炎症因子和纤维化因子的表达变化。结果与对照组相比,模型组小鼠血压和肾重/体重显著增高,肾脏病理学检查显示出现肾纤维化改变,collagenⅠ、collagenⅢ、ⅠL-1β、ⅠL-6、TNF-α和MCP1显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);PR957治疗后,肾脏指数均明显低于模型组,肾脏病理学检查显示肾纤维化病变明显得到改善,以及炎症因子和纤维化因子的表达水平较模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫蛋白酶体抑制剂PR957对DOCA-高盐高血压小鼠的肾脏损伤可以起保护作用。

免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫脑炎中的作用研究

免疫蛋白酶体在炎症性疾病模型中发挥重要作用。为研究免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫感染引起小鼠脑部炎症过程中的作用,本研究将36只BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只:对照组小鼠腹腔注射PBS,实验组小鼠腹腔注射弓形虫RH强毒株,于人工感染第2 d分别对实验组小鼠腹腔注射PBS(RH+PBS组)和PR-957(RH+PR-957组,免疫蛋白酶体亚基LMP7特异性抑制剂),分别于感染后第10 d和第23 d随机迫杀6只小鼠采集脑组织,western blot结果显示,RH+PR-957组小鼠的免疫蛋白酶体亚基LMP7在感染后第23 d时未见其表达被抑制;该组小鼠LMP10和LMP2表达量与RH+PBS组对比变化不大。小鼠存活率结果显示,RH+PR-957组小鼠存活率为67.7%,高于RH+PBS组和PBS组;脑组织病理学结果显示,RH+PBS组小鼠脑组织内有明显的血管套现象,RH+PR-957组小鼠脑组织有胶质细胞浸润和轻微的血管套现象;免疫组化结果显示,RH+PBS组小鼠脑组织中小胶质细胞的数量相比于RH+PR-957组增多,细胞突起变长、变粗,呈现高分枝状;荧光定量PCR结果显示,RH+PR-957组小鼠脑组织的促炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β和IL-6的RNA转录水平明显低于RH+PBS组。上述结果表明抑制免疫蛋白酶体亚基LMP7的表达可减弱弓形虫感染引起的小鼠脑部炎症。本研究为免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫性中枢神经系统疾病致病机理的研究奠定基础。

免疫蛋白酶体β5i亚基在DOCA盐敏感高血压性心肌肥厚中的作用及机制

目的探讨免疫蛋白酶体β5i亚基对醋酸脱氧皮质酮(DOCA)盐敏感型高血压小鼠心肌肥厚的影响及机制。方法给野生小鼠皮下植入DOCA药片及饮用Na Cl溶液(10 g/L)三周建立高血压性心肌肥厚模型。手术前一天开始皮下注射β5i抑制剂PR-957(浓度12 mg/kg,每周4次)。三周后进行心脏超声、心肌细胞表面积、心脏组织中β5i及钙调神经磷酸酶蛋白水平的检测。结果β5i蛋白水平、心脏功能(EF%,FS%)、心肌肥厚指标(心脏重量/体重、心室壁厚度、心肌细胞面积)及钙调神经磷酸酶蛋白水平比假手术组均明显增高。相反,这些作用在PR-957处理的心脏中明显减轻。结论免疫蛋白酶体β5i亚基激活促进DOCA盐诱导的心肌肥厚,其机制部分与钙调神经磷酸酶信号通路激活相关。

抑制免疫蛋白酶体亚基β5i活性加重小鼠心脏缺血/再灌注损伤

目的探讨免疫蛋白酶体亚基β5i特异性抑制剂PR-957在心脏缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用及机制。方法 32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为四组:假手术组、假手术+PR-957组、缺血/再灌注组和缺血/再灌注+PR-957组。在心肌缺血/再灌注前一天皮下注射β5i特异性抑制剂PR-957(12 mg/kg)一次,然后结扎左心室左前降支30分钟再灌注24小时。小鼠处死后采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察心肌梗死面积;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;Western blot检测心脏组织中钙调神经磷酸酶A(Calcineurin A)蛋白水平。结果与假手术组相比,缺血/再灌注引起心肌中β5i蛋白水平明显降低;而导致梗死面积增大、细胞凋亡数量增多和钙调神经磷酸酶A蛋白水平增高;应用β5i抑制剂PR-957处理后进一步加重了缺血/再灌注引起的这些改变。结论抑制免疫蛋白酶体亚基β5i活性可加重缺血/再灌注引起的心肌损伤,其机制作用部分是通过减少钙调神经磷酸酶A被蛋白酶体降解。