慢性髓系白血病中prame基因转录本的定量研究

本研究旨在分析慢性髓系白血病(CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(prame)的基因转录本表达状况及其临床意义。用实时定量PCR(RQ-PCR)方法对30例CML患者和15例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓单个核细胞中prame基因转录本水平进行检测。结果表明:15例缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中prame转录本水平为0%-1.46%(中位0.19%),30例CML患者中BMMNC中prame基因转录本水平为0%-772.25%(中位8.28%),二组之间具有显著性差异(p<0.001)。CML患者中prame基因转录本含量与bcr-abl融合基因转录本水平显著相关(r=0.708,p<0.001);6例CML加速期(AP)和急变期(BC)患者中prame基因转录本水平明显高于24例慢性期(CP)患者(p=0.007)。动态检测2例CML患者在不同病程中prame基因转录本水平变化显示,AP及BC时prame基因转录本水平增高,经治疗后恢复至CP时prame基因转录本水平降低,与bcr-abl转录本变化趋势一致。结论:CML患者中prame基因转录本表达水平增高,且与病情发展相关,可用于病情监测。

慢性髓细胞白血病患者PRAME基因启动子甲基化改变

目的:慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)基因启动子区域的甲基化改变其及其临床相关性。方法:应用实时定量甲基化特异性PCR(real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP)技术对55例CML患者及20例对照组骨髓单个核细胞标本的PRAME基因启动子甲基化状态进行检测。结果:28/55例(51%)CML患者出现PRAME启动子低甲基化改变,而20例对照未显示低甲基化,两组差异有显著统计学意义(P<0.001)。PRAME低甲基化与患者血液学相关参数及染色体分组均无相关性。PRAME启动子低甲基化频率随疾病进展而降低,在慢性期、加速期及急变期中分别为48%(22/46)、33%(1/3)及17%(1/6)。结论:PRAME基因低甲基化可能是参与CML发生的早期分子事件之一。

EvaGreen染料法实时定量PCR检测急性髓系白血病PRAME基因转录本

目的：采用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）法检测急性髓系白血病（AML）中黑色素瘤优先表达抗原（PRAME）基因转录本,初步评价其在AML中的临床意义。方法：设计PRAME基因引物,建立扩增PRAME基因转录本的EvaGreen染料法RQ-PCR法,对PRAME转录本克隆质粒进行扩增,评价其特异性、重复性和灵敏性。并对10例AML患者的骨髓单个核细胞标本进行初步检测。结果：所建立的EvaGreen RQ-PCR法具有良好的特异性,最低可检测到10个拷贝/μl的阳性模板,但其重复性差,而10^8～10^2拷贝/μl阳模的重复性良好。10例初诊AML患者PRAME转录本绝对含量为4.91×10^2～8.07×10^5拷贝/50ng（中位7.26×10^3拷贝/50ng）,ABL标化后的相对含量为4.42%～13 170.01%（中位67.98%）。而对照组8例缺铁性贫血患者中PRAME转录本相对含量为0.00%～0.01%（中位0）。1例AML患者诱导缓解后PRAME转录本下降,复发时又明显升高。结论：EvaGreen染料法RQ-PCR检测PRAME转录本方法敏感可靠,可用于AML患者临床监测。

PRAME基因在小儿急性白血病患者中的表达及其与预后的相关性

目的探讨小儿急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)PRAME(preferentiallyexpressed antigen of melanoma)基因的表达及其与预后的相关性。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测95例AL患者PRAME mRNA的表达水平,并将检测结果进行分析。结果 PRAME阳性表达率:ANLL为60.0%,ALL为56.9%,2组比较差异无统计学意义(P>0.05),而完全缓解组(complete remission,CR)及对照组PRAME均阴性;在ANLL中,以M3、M2、M4亚型的阳性检出率较高,分别为75.0%、62.5%、60.0%;有效组PRAME的表达水平显著低于无效组(P<0.01);对8例初治时PRAME高表达患儿进行随访,化疗CR后均转阴,分别在CR后6个月～1年的不同时间内复发,其中5例PRAME再次升高早于临床复发,3例在临床复发时再次升高。结论 PRAME基因是小儿急性白血病的一个重要标记基因,动态检测PRAME的表达水平可在一定程度上了解疾病的状态和体内白血病细胞的总负荷量,对小儿AL患者的化学治疗、预后判断及监测微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)、防治复发有一定的意义。

PRAME基因与肿瘤的研究

1 PRAME在各种肿瘤中的表达 1997年Ikeda等[1]首次在体外对1例黑色素瘤复发患者的自身淋巴细胞进行刺激,制得细胞毒性T细胞克隆17（CTL17）,从而引发特异性的免疫反应,由此对能被CTL溶解的由HLA-A24呈递并在黑色素瘤细胞表达的抗原命名为LB33-E,而将编码这一抗原的基因命名为黑色素瘤特异性抗原（preferentially expressed antigen of melanoma,PRAME）.PRAME基因位于22q11,编码509个氨基酸的蛋白质,无启动序列.在88%初发和95%转移黑色素瘤中都有表达[1],正常皮肤组织和良性黑素细胞则不表达,提示PRAME可能是黑素细胞恶性转变中发生[2].

PRAME基因在白血病的表达及其临床意义

PRAME是黑色素瘤抗原,作为新的肿瘤抗原在各种类型的白血病中高度表达。PRAME也可作为一个广谱的白血病标志物,用于微小残留病的检测。PRAME亦可看作新的肿瘤抗原,针对PRAME蛋白的免疫治疗有潜在的临床应用价值。

PRAME mRNA在初诊急性髓系白血病患者中的表达及微量残留病监测中的应用

目的了解黑色素瘤优先表达的抗原（PRAME）mRNA在初诊急性髓系白血病（AML）患者中的表达，评估其在微量残留病（MRD）监测中的作用。方法采用基于TaqMan探针的实时定量RT—PCR技术检测142例初诊AML患者（其中72例不具有特异融合基因）骨髓单个核细胞PRAME mRNA水平，动态观察3例持续缓解及6例血液学复发患者（2例不具有特异融合基因）治疗前后共60份骨髓标本PRAME mRNA水平，以22份异基因骨髓移植供者的骨髓标本作为健康对照。随访的7例AML1-ETO（＋）M2患者同时检测AML1-ETOmRNA水平。以ab1作为内参基因。结果健康对照骨髓标本均表达PRAME mRNA，表达水平最高为0．28％。全部初诊AML患者骨髓中位PRAME mRNA水平为3．97％（0．00％～714．97％）。无特异融合基因的AML患者骨髓中位PRAME mRNA水平为0．60％（0．00％～408．72％）。PRAME mRNA水平在AML各亚型之间差异有统计学意义（P〈0．01），AML1-ETO（＋）M，患者PRAME mRNA水平高于其他亚型（P值均〈0．01），S型PML—RARer（＋）急性早幼粒细胞白血病患者次之。随访的AML1-ETO（＋）M，患者PRAME mRNA与AML1-ETO mRNA呈现同样的变化趋势，二者呈明显正相关（r=0．88，P〈0．01）。血液学复发患者中3例复发前PRAME mRNA水平逐步升高，分别在复发前1～4个月超过正常上限，另3例患者在血液学缓解状态时PRAME mRNA水平始终未降至正常。结论PRAME mRNA可以用于监测AML患者MRD，其水平持续升高或始终异常预示血液学复发。