PRDXⅢ在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的探讨PRDXⅢ在不同级别胶质瘤组织中的表达水平以及在胶质瘤细胞凋亡中的作用。方法通过免疫组织化学方法检测PRDXⅢ蛋白在胶质瘤和正常脑组织的表达水平,利用Tunel法检测细胞凋亡指数。分析不同级别胶质瘤及脑组织相互间PRDXⅢ表达水平的差异以及与细胞凋亡指数间的关系。结果 PRDXⅢ蛋白在正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤组织中表达阳性率分别为20.0%(2/10)、30.3%(10/33)和81.3%(26/32),高级别胶质瘤PRDXⅢ蛋白表达阳性率明显高于正常脑组织和低级别胶质瘤。随病理级别增高,PRDXⅢ蛋白表达强度也明显增加(r=0.576,P=0.00)。正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤组织的凋亡指数分别为(24.51±3.27)%、(17.68±2.27)%和(8.78±3.02)%,随着胶质瘤级别的增高,凋亡指数逐渐降低,差异有统计学意义(F=74.45,P=0.00)。在正常脑组织和胶质瘤中,PRDXⅢ蛋白表达阳性组的凋亡指数为(10.29±4.87)%,PRDXⅢ蛋白表达阴性组为(19.07±4.64)%,PRDXⅢ蛋白表达阳性组的凋亡指数明显低于PRDXⅢ阴性组(t=7.99,P=0.00)。结论 PRDXⅢ在胶质瘤中高度表达,表达强度随着肿瘤级别的增高而增加,高级别级胶质瘤中PRDXⅢ表达的强度明显高于低级别胶质瘤和正常脑组织,说明PRDXⅢ可能与胶质瘤的生长和恶性表型有关。在PRDXⅢ表达阳性的胶质瘤中,细胞的凋亡指数低于PRDXⅢ表达阴性者。

RNAi沉默PRDX Ⅲ基因表达诱导U251胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨RNAi沉默PRDXⅢ基因表达诱导U251胶质瘤细胞凋亡。方法设计合成针对PRDXⅢ的siRNA,脂质体介导转染人U251多形胶质母细胞瘤细胞,RT-PCR法检测转染后24 h PRDXⅢmRNA的表达水平,Western-blotting检测转染后48 h PRDXⅢ蛋白的表达水平,筛选出有效的干扰序列;流式细胞仪、DNAladder、PI染色检测转染后48 hU251细胞的凋亡状况,MTT检测转染后48 h U251细胞的生长抑制率。结果 RT-PCR、Western Blotting检测显示空白对照组、空载体组和无关序列组PRDXⅢmRNA表达无明显变化,干扰序列1、3使PRDXⅢmRNA的表达明显降低。DNA ladder显示干扰组出现明显梯形电泳条带,空白对照组、空载体组和无关序列组细胞未见明显梯形电泳条带。PI染色结果显示空白对照组,空载体组和无关序列组细胞未见明显凋亡,而干扰组细胞核的染色质高度浓染,部分细胞核裂解为碎块,符合凋亡形态学的改变。FCM检测结果显示干扰组细胞凋亡率明显高于空白对照组、空载体组、无关序列组(P<0.01)。MTT检测干扰组对U251细胞生长的抑制率为44.4%,明显减慢了细胞生长(P<0.01)。结论 RNAi技术成功地抑制了U251细胞中PRDXⅢ基因的表达,并诱导U251细胞凋亡,表明PRDXⅢ基因与胶质瘤的凋亡有关,PRDXⅢ基因有可能成为胶质瘤基因治疗的靶基因。