HBV感染者血清表面抗原大蛋白,DANE颗粒,HBV-DNA与PreS1蛋白检测分析

目的 检测HBV感染者血清中乙肝表面抗原大蛋白（LHBS）,DANE颗粒,HBV-DNA和PreS1蛋白,探讨LHBS在临床诊治中的价值.方法 对1 042例HBV感染者采用酶联免疫吸附试验检测乙肝病毒HBeAg,LHBS,DANE颗粒和PreS1蛋白,并采用定性PCR检测HBV-DNA.结果 245例HBeAg（＋）的HBV感染者中,LHBS阳性率（96.33%）,DANE颗粒阳性率（90.20%）,分别与HBV-DNA阳性率（92.65%）比较,差异无统计学显著性意义（P＞0.05）,三者均明显高于PreS1阳性率（66.53%）,差异均有统计学显著性意义（P＜0.01）;797例HBeAg（-）的HBV感染者中,LHBS阳性率（78.17%）高于DANE颗粒阳性率（56.46%）,HBV-DNA阳性率（33.12%）和PreS1阳性率（17.44%）,依次比较差异均有统计学显著性意义（P＜0.01）.结论 LHBS是判断HBV感染者体内病毒复制程度的可靠指标,在HBeAg（-）的HBV感染者中,LHBS有指导治疗、预后判断的作用;DANE颗粒亦是判断病毒复制程度的可靠的新指标.LHBS和DANE可用于暂无条件开展PCR实验的的基层医疗单位,代替HBV-DNA检测.

ASGPR与HBV preS1蛋白之间相互作用的验证

目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共沉淀技术验证ASGPR与HBV preS1蛋白之间的相互作用,操作方法参照试剂盒说明书进行。结果哺乳动物双杂交实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在细胞环境中具有相互作用;免疫共沉淀实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在非细胞环境中具有相互作用。结论 ASGPR可能是介导HBV入侵的肝细胞膜受体之一。

乙型肝炎病毒PreS1蛋白与初期多肽相关复合体α亚单位特异性结合的研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1蛋白与人类初期多肽相关复合体α亚单位(nascent-polypeptide-asso-ciated complex alpha polypeptide,NACA)之间的结合作用。方法采用交合实验验证PreS1蛋白和NACA在酵母细胞内的结合作用,利用离体结合实验证实二者在体外的结合作用,免疫共沉淀实验证实二者在哺乳动物细胞中的特异性结合。结果携带NACA基因的酵母同携带preS1基因的酵母交合后发生反应,LacZ活性检测菌落呈现蓝色,离体结合实验Western印迹中出现特异性结合活性反应条带,提示PreS1蛋白和NACA在体外存在直接相互作用,免疫共沉淀实验在13×103处出现蛋白条带,提示在哺乳动物细胞水平仍能检测到PreS1蛋白和NACA的特异结合。结论NACA与PreS1蛋白在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在特异性结合,推测NACA可能通过与PreS1蛋白的结合影响病毒黏附及反式激活等过程。

HBV preS1蛋白及ASGPR的亚细胞定位及其在肝组织中的分布

目的检测HBV preS1蛋白及ASGPR的亚细胞定位及在肝组织中的分布情况,为研究二者的生物学功能提供依据。方法激光共聚焦显微镜检测HBV preS1蛋白及ASGPR在HepG2细胞中的亚细胞定位情况以及二者是否存在共定位;免疫组织化学技术检测HBV preS1蛋白和ASGPR在肝组织中的表达情况。结果激光共聚焦显微镜下观察,在HepG2细胞的胞膜、胞质及胞核中均可见明亮的绿色荧光,表明HBV preS1蛋白弥散分布于肝细胞的胞膜、胞质及胞核中;在胞膜上可见明亮的红色荧光,而胞质中的红色荧光较弱,表明ASGPR主要表达于肝细胞膜上,在肝细胞质中呈弱表达。提示在HepG2细胞的细胞膜上HBV preS1蛋白与ASGPR具有共定位。在乙肝肝硬化患者的肝组织中,HBV preS1蛋白在肝细胞的胞膜、胞质及胞核中均有阳性表达;ASGPR不仅在肝细胞膜上有阳性表达,在胞质中的表达率也较高。此外,ASGPR在肝组织中的分布形式与HBV preS1蛋白无明显差异(P>0.05),并且二者的表达水平呈显著正相关(Pearson相关系数0.776,P<0.000 1)。结论 ASGPR除介导HBV入侵外,可能还参与了病毒的分泌及胞内运输等其他生命活动。

乙型肝炎病毒PreS1蛋白研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝DNA病毒科,是多数肝脏疾病和肝癌的主要发病原因之一。慢性HBV感染是全球化的健康问题,肝癌是世界上最严重的恶性肿瘤之一,死亡率排在第三位,严重威胁人类健康。虽然我们对于这个具有高度肝脏特异性病毒的分子生物学研究的知识有所增加,但是病毒黏附和进入宿主细胞的机制仍是未知数。乙肝病毒PreS1蛋白位于HBV病毒颗粒表面,并在病毒的组装和感染中发挥重要的作用。为了阻止HBV入侵及抗病毒感染,目前一系列基于PreS1抗原肽的方法正在研究中,而这些有可能成为新的抗病毒治疗方法。

酵母双杂交系统筛选HBV PreS1相互作用蛋白

目的利用Sos招募系统(SRS),构建含HBV PreS1基因的酵母双杂交诱饵载体,筛选人肝细胞与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,进一步探讨HBV侵入肝细胞的机制。方法以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,PCR扩增HBV PreS1基因,克隆到酵母表达载体pSos中,构建诱饵质粒pSos-PreS1,将其转化cdc25酵母感受态细胞,提取酵母蛋白质进行Western blot分析,证实其在酵母细胞中的表达;将pSos-PreS1分别与pMyr Lamin C、pMyr SB共转化酵母,证实诱饵蛋白无自激活作用。将pSos-PreS1与人肝cDNA文库共转化cdc25酵母感受态细胞,通过营养及温度选择性培养筛选阳性菌落,扩增阳性菌落目的基因并测序。结果成功构建了HBV PreS1基因酵母双杂交诱饵载体pSos-PreS1,筛选得到5个准阳性克隆,序列分析表明其分别与人类钾通道调制因子1(KCMF1)、细胞色素C、VitD结合蛋白、人源去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)和人白蛋白具有高度同源性。结论利用SRS筛选出5个可能与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,为进一步了解HBV侵入肝细胞的机制奠定了基础。

e抗原阴性慢性乙肝患者血清表面抗原大蛋白、PreS1蛋白、PreS2蛋白与HBV-DNA检测分析

目的:通过检测HBeAg阴性慢性乙肝患者血清表面抗原大蛋白(HBV-LP)、PreS1蛋白、PreS2蛋白和HBV-DNA比较分析,以探讨血清乙肝大蛋白检测对于HBeAg阴性慢性乙肝患者在临床诊治中的价值和意义。方法:采用ELISA法检测247例HBeAg阴性慢性乙肝患者HBV-LP、PreS1蛋白、PreS2蛋白,并应用实时荧光定量PCR技术平行检测HBV-DNA。结果:247例HBeAg阴性慢性乙肝患者HBV-DNA阳性率51.0%,血清HBV-LP阳性率66.4%,PreS1蛋白阳性率22.3%,PreS2蛋白阳性率34.0%,血清中HBV-LP阳性率明显高于PreS1蛋白和PreS2蛋白阳性率,差异均有显著性(P均<0.01)。结论:HBeAg阴性慢性乙肝患者检测其血清HBV-LP较PreS1蛋白和PreS2蛋白更敏感反映体内HBV感染和复制状态,HBV-LP更有利于HBeAg阴性慢性乙肝患者的疗效观察和预后判断。

乙型肝炎病毒血清标志物与PreS1抗原的关系

目的:了解PreS1与HBVM和HBV DNA的关系及其临床应用价值。方法:对306例临床血清采用ELISA方法检测HBVM和PreS1,荧光定量PCR法检测HBV DNA。结果:中HBeAg阳性146例,其中前S1阳性127例阳性率88.1%,HBeAg阴性共160例,其中前s72例阳性率45%,HBeAg阴性血清160例前s多数存在于抗HBe阳性血清中,阳性率40.6%。结论:PreS1比HBeAg更能较好反映病毒存在和复制状态.HBVM、PreS1和HBV DNA联合检测,更有利于乙肝病情监测和疗效评估。

HBV preS1基因酵母表达载体的构建及表达

目的构建HBV preS1基因的酵母表达载体,探讨HBV preS1蛋白的功能。方法以HBVayw亚型全长质粒PCP10为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HBV preS1基因,克隆到pGEM-T载体中命名为T-preS1,以NcoⅠ和MluⅠ双酶切T-preS1后回收与酵母表达载体pSos连接,对重组质粒进行序列测定后命名为pSos-preS1,经醋酸锂法将其转化酵母菌cdc25(a),提取酵母蛋白质进行Western免疫印迹分析。结果成功构建了HBV preS1基因的酵母表达载体,Western免疫印迹分析显示HBV preS1基因在酵母细胞中正确表达。结论pSos-preS1的构建为通过SOS招募系统(sos-recruit ment system,SRS)筛选与HBV preS1蛋白相互作用的蛋白和进一步探讨HBV preS1蛋白在HBV致病中的作用奠定了基础。

乙型肝炎病毒PreS1抗原与HBV血清标志物的相关性

传统乙肝血清标志物是目前我国用于乙肝检测与筛查的普及指标，但其在检测病毒复制等方面尚有不足。文章分析前Sl抗原（PreSl）和乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物之间的关系，探讨乙型肝炎病毒前S1蛋白在临床上的应用价值。关于PreSl、抗PreSl与HBV免疫标志物的相关性。采用ELISA对306例HBsAg阳性标本进行PreSl、抗PreSl与HBV血清标志物相关性的研究证实，前S1抗原（Pre—SlAg）检测是对乙肝“两对半”，尤其是e抗原和HBV—DNA测定的重要补充和加强。

HBV Pre-S1蛋白及HBV-DNA含量检测在诊断乙肝病毒复制中的临床意义

目的:探讨乙肝患者不同血清学标志物模式(HBV-M)与乙肝病毒DNA含量及乙肝病毒前S1蛋白的关系,为预测乙型肝炎病毒的传染程度、预防、诊断及治疗提供实验室依据。方法:采用ELISA法对1385例携带不同血清学标志物的乙肝患者进行HBVPre-S1和乙肝5项指标检测,并用聚合酶链反应定量检测血清HBV-DNA含量。结果:不同HBV免疫模式中HBsAg、HBeAg和HBcAb同时阳性,其HBV-DNA和HBVPre-S1的检出率分别为90.7%和71.1%;HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性组的检出率分别为35.8%和27.3%;其他不同血清学模式组也有不同的阳性率。结论:HBV-DNA、乙肝病毒5项标志和HBVPre-S1联合检测,对HBV感染早期诊断,了解病毒的复制情况,疗效观察和预后判断均具有重要意义。

乙肝preS1检测试剂盒的初步应用

目前各级医疗单位乙肝的有关血清学标志物(HBVM)的检测开展已很普遍，但检测HBV-DNA判断乙肝HBV在体内复制的方法(斑点杂交法、PCR法等)在基层医院开展就有一定的难度。最近我们应用ELISA法检测血清“乙肝表面抗原preS1蛋白”与不同类型HBsAg阳性血清进行了比较，以观察HBV复制情况。

Preβ-1高密度脂蛋白与心血管疾病关系的研究进展

动脉粥样硬化是心血管疾病重要的病理生理基础,延缓和防治动脉粥样硬化对于减少和降低心血管疾病的发病率及病死率具有重要意义。高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)通过参与介导胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT)在抗动脉粥样硬化的形成和进展中发挥了重要作用。Preβ-1高密度脂蛋白(prebeta-1 high density lipoprotein,Preβ-1HDL)作为HDL的一种亚类,是外周细胞移出胆固醇的最初接受体,直接参与了RCT的起始步骤,并在随后的胆固醇酯化及转运中起着重要作用。本文就Preβ-1HDL的结构、代谢及其与心血管疾病的关系作一简要综述。

乙肝病毒前S1蛋白对孕妇及婴儿影响的研究

目的 探讨乙肝病毒 (HBV)前S1(PreS1)蛋白对孕妇及婴儿的影响。方法 孕妇分别在孕早期、孕中期、孕晚期及分娩时共采血四次 ,婴儿出生后1个月至1个半月间抽血一次。每次血均测定PreS1蛋白和乙肝三系。结果 300例孕妇中受乙肝病毒感染者29人 (9.6 % ) ,PreS1蛋白阳性者19人 (6.3 % ) ,HBeAg阳性者12人 ,其中11人伴有 preS1蛋白阳性 ,婴儿受感染者18例 (6 % ) ,其中母亲PreS1蛋白阳性者14例 (77.8% )。结论 PreS1蛋白与HBeAg具有一致性 ,PreS1蛋白阳性 ,特别是孕晚期阳性 ,容易通过围产期传给婴儿。

乙型肝炎病毒前S1蛋白检测及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒前S1蛋白(PreS1)检测方法及在乙型肝炎病毒诊断中的临床意义。方法采用ELISA法对158例各型乙型肝炎病毒患者血清标志物PreS1进行检测,同时对每个标本进行HBV-DNA定量及乙肝“两对半”的双盲测定。比较各组PreS1、HBV-DNA、HBeAg三者之间的关系。结果PreS1在HBeAg阳性组合中的检出率为87.9%,明显高于HBeAg阴性组46.7%(P<0.01)。以乙肝病毒HBV-DNA≥103拷贝/毫升为判断乙肝病毒存在复制的标准,PreS1在HBV-DNA阳性组合的检出率为93.0%,明显高于HBV-DNA阴性组25.8%(P<0.01)。结论血清乙型肝炎病毒PreS1测定可以作为乙型肝炎病毒早期感染、复制及预后判断的重要指标。

乙型肝炎病毒外膜蛋白的分子生物学研究进展

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)外膜蛋白含PreS1、PreS2和S 3种蛋白,位于病毒颗粒的外表面,参与病毒颗粒的吸附、组装与成熟,在保护性免疫应答反应中起重要作用,HBV感染肝细胞所合成的外膜蛋白对肝细胞的生长、代谢,甚至是恶性转化产生一系列重要的生物学调节效应,外膜蛋白的变异使得HBV对受染肝细胞的影响非常复杂且成多样化,在病毒性乙型肝炎慢性化及其相关疾病演变过程的分子病理机制扮演重要角色。

乙肝前S蛋白检测的临床应用

[目的]探讨乙肝前 S 蛋白的临床应用价值。[方法]对186例 HBsAg 阳性标本进行 PCR 法检测 HBV-DNA, 并采用 ELISA 方法测定 HBV 血清标志物、PreS1蛋白、PreS2蛋白,将结果作比较。[结果]HBV-DNA(+)标本中,PreS1 蛋白检出率为66．10%,PreS2蛋白检出率为91．53%；在 HBeAg(+)标本中,PreS1蛋白检出率为72．73%,PreS2Ag 检出率为96．1%,其检出率均明显高于 HBV-DNA(-)组及 HBeAb(+)组。[结论]前 S 蛋白与 HBeAg、HBV-DNA 显著相关, 可作为 HBV 复制的新指标,能完善和补充乙肝病毒血清标志物的检测。

乙型肝炎病毒表面抗原S和前S1融合基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究

构建了 pCHBSSIG质粒 ,其特点是CMV立即早期启动子调控乙型肝炎 (乙肝 )表面抗原S +前S1融合基因在前 ,SV40早期启动子调控GS扩增基因在后 ,此质粒转化到CHO dhfr-细胞中 ,经克隆加MSX及MTX筛选、扩增 ,建立了 7个高效表达乙肝表面抗原S及前S1融合蛋白细胞系GdSS1,并检测了其中GdSS1 18细胞系的生物学特性 ,结果表明 :未发现微生物污染 ,无致瘤性 ,遗传稳定 ,电镜下可观察到 2 2nm的颗粒 ,纯化后的蛋白在SDS PAGE及Westernblot中显示出特异性的 2 7kD、30kD乙肝表面抗原S和前S1的融合蛋白带。主蛋白的反向被动血凝(RPHA)滴度为 1∶2 5 6～ 1∶5 12 ,前S1蛋白的ELISA滴度为 1∶12 8。

乙型肝炎患者622例前S1抗原与乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒-DNA的相关性探讨

前S1蛋白（PreS1）是组成乙肝病毒（HBV）外膜蛋白的重要成分之一，其含有肝细胞膜受体，对HBV附着于肝细胞和诱导特异性免疫应答具有重要作用[1-3]。近年来，作为一种新的HBV检测指标，PreS1的临床价值越来越受到人们的关注[4]。HBV血清标志物（HBV-M），即“乙肝三系”中的“e系统”作为临床上观察HBV存在及动态变化情况的常规检查项目，被得到广泛的应用。近年来随着HBV变异导致乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）检测阴性比率的增高，为了寻求新的更能反应乙肝病毒动态变化的免疫学指标，了解PreS1蛋白在HBV患者中的表达及与HBV-M以及HBV-DNA之间的关系，本研究对622例乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性的乙型肝炎携带者及患者的血清样本进行检测分析，并对HBeAg检测结果和PreS1检测结果不一致的样本，进一步进行HBV-DNA检测。结果报告如下。

e抗原阴性慢性乙肝患者血清中乙肝表面抗原大蛋白的表达

目的探讨血清乙肝表面抗原大蛋白(LHBs)在HBeAg阴性慢性乙型肝炎中的诊断价值。方法以乙肝恢复期血清标本20例为对照,检测119例HBeAg阴性血清标本LHBs,PreS1和HBV DNA表达情况,并进行对比分析。结果该研究中HBeAg阴性乙肝血清标本,LHBs,PreS1和HBV DNA均有较高的阳性率,三者差异无显著性:64.4%的乙肝“小三阳”患者血清LHBs与HBV阴阳性一致,高于PreS1的56.4%。LHBs可检出84.3%的HBeAg阴性慢性乙肝患者,高于PreS1的56.9%,但约40%的LHBs阳性血清标本HBV DNA为阴性。结论尽管LHBs在乙肝急性期可能存在较大的临床意义,但并非HBeAg阴性慢性乙型肝炎诊断的理想指标。