利用家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统在BmN细胞中可溶性表达PRG-1蛋白(英文)

杆状病毒Bac-to-Bac表达系统由于操作简便等优点,被广泛应用于外源蛋白的表达。利用新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac系统可溶性表达一个大分子质量的融合蛋白———piwi相关基因编码蛋白PRG-1。为了提高目的蛋白的表达量,对重组病毒感染剂量及产物收获时间进行优化,并利用GST亲和层析纯化融合蛋白。结果表明在家蚕卵巢培养细胞BmN中表达的重组GST-PRG-1是可溶性蛋白;最佳的感染条件是病毒粒子对BmN细胞的感染复数(MOI)=1,并在感染后96 h收获细胞。试验结果表明,新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统可用于大分子蛋白的可溶性表达。

线虫prg-1基因对小RNA表达的影响

以秀丽隐杆线虫为材料发现,prg-1基因突变不仅影响piRNA的表达,还影响部分miRNA的表达,同时还发现ncRNA-like型小RNA,对ncRNA-like序列比较,认为ncRNA-like与piRNA或miRNA序列极为相似;对ncRNA-like与miRNA或piRNA的基因座比较,发现ncRNA-like与miRNA或piRNA基因座完全相同.推测这些ncRNA-like型小RNA可能与miRNA或piRNA有着相同的RNA前体来源.

线虫体内新piRNA研究

PIWI-interacting RNAs(piRNA)是一类內源性小RNA,负责抵御转座子和转基因对基因组的入侵.已发现1.6万多种piRNA,在piRNA上游存在保守序列,根据上游序列特征可以预测新的piRNA.将线虫同步化培养至L4时期,分别提取野生和prg-1突变样本中的小RNA,并对其进行高通量测序.基于piRNA上游保守序列特征,在野生线虫L4时期中,发现了967种新piRNA,这些新piRNA在prg-1突变后表达消失.新piRNA的基因座集中分布在四号染色体的2个piRNA簇内,首位碱基以U为主.与已发表的成虫发育时期的PRG-1免疫共沉淀数据比对,发现有153种piRNA存在于与PRG-1免疫沉淀的数据中.同时还发现一些只在野生线虫中表达的non-21nt小RNA,它们与已知piRNA的基因座相同,推测这些non-21nt小RNA可能是其piRNA前体加工的产物.总之,通过小RNA测序,在线虫中发现了一些新的piRNA.

氦氖激光对退变颞下颌关节髁突软骨基质与基质调节因子表达的影响

目的:研究氦氖激光对退变颞下颌关节髁突软骨细胞外基质和基质调节因子表达的影响。方法:将40只健康成年雄性新西兰大白兔随机分为正常组、假模型组、模型组和治疗组(n=10),对治疗组兔采用氦氖激光治疗,组内又分为造模后第1、11天2个取材时间点(n=5)。于不同时间点取出颞下颌关节组织,HE染色观察组织学形态,Western Blot方法检测细胞外基质Col-2、PRG-4和基质调节因子MMP-13、TIMP-1、BMP-2的表达。结果:经过氦氖激光治疗后的髁突软骨纤维层轻度松解和部分胶原纤维合成增强。造模后第1天模型组与治疗组MMP-13表达均明显升高,Col-2、PRG-4、TIMP-1、BMP-2表达均明显降低(P<0.05);治疗组第11天与第1天比较,MMP-13表达降低(P<0.05),Col-2、PRG-4、TIMP-1、BMP-2表达升高(P<0.05)。结论:氦氖激光治疗可上调退变颞下颌关节软骨细胞外基质Col-2、PRG-4和基质调节因子TIMP-1、BMP-2蛋白表达,下调MMP-13蛋白表达。

泡泡浴水疗对新生期大鼠反复惊厥性脑损伤保护作用的探讨

目的探讨泡泡浴水疗对新生期大鼠反复惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法出生6d（P6）的健康SD大鼠随机分为4组各15只，惊厥组（RS组）和惊厥水疗组（HRS组）在P6吸入三氟乙醚诱导惊厥发作，持续30min，连续6d，对照组（CON组）和对照水疗组（HCON组）同样操作但不吸入三氟乙醚。于末次惊厥后第2天对HCON及HRS组采用泡泡浴进行干预，连续28d。观测各组大鼠体格发育及神经行为表现，PS0时通过免疫印迹技术检测大脑皮质可塑性相关基因-1（Plasticity relatedgene1，PRG-1）、抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表达。结果1-惊厥后RS组大鼠各日龄体质量较CON组显著降低（P〈0．05）；水疗后HRS组体质量较RS组显著增高（P〈0．05）。各组生理发育现象（竖耳、门齿萌出、睁眼）出现时间无显著差异。2．旷场行为实验：RS组旷场得分较CON组明显降低（P〈0．05），HRS组旷场得分较Rs组明显升高（P〈0．05）。泡泡浴可增强反复惊厥大鼠的兴奋性和探索能力[P26开场得分：CON组为（45．78±18．31）分，HCON组为（59．78±25．61）分，RS组为（27．78±16．83）分，HRS组为（53．15±22．43）分，P〈0．01]。3．4组大鼠大脑皮质PRG-1、Bcl-2蛋白表达存在显著差异（F=3．477／7．36，P〈0．05）。其中RS组PRG．1（1．149±0．191）表达升高、Bel-2（1．040±0．116）表达降低，与CON组（PRG-1为0．910±0．162，Bcl-2为1．259±0．157）比较均差异有显著性（P〈0．05）；HRS组Bcl-2（1．57±0．333）表达水平较RS组明显升高（P〈0．05）。结论新生期大鼠反复惊厥导致生长发育延迟、神经行为损伤，惊厥后早期进行泡泡浴干预对神经损伤有修复作用，大脑皮质PRG-1、Bcl-2参与发育期惊厥性脑损伤病理生理机制。