miR-186-5p调控PRKAA2促进肺腺癌细胞铁死亡的机制研究

背景与目的肺腺癌是最常见的非小细胞肺癌组织学类型,miRNAs作为基因表达的调控分子调控细胞增殖、凋亡和分化,从而影响细胞内稳态。本研究通过实验验证miR-186-5p通过调控其下游靶蛋白PRKAA2影响铁死亡途径从而抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。方法前期研究获得肺癌中表达显著下调的miRNA,即miR-186-5p;生物信息学方法预测其下游铁死亡相关靶蛋白并查询其在肺腺癌中的表达水平及对患者生存预后的影响;双荧光素酶验证两者结合位点;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot检测过表达miR-186-5p后PRKAA2的基因和蛋白表达情况;EdU、Transwell、划痕实验验证miR-186-5p在A549、H1299细胞中的增殖、侵袭迁移能力的影响以及miR-186-5p对Fer-1抑制铁死亡敏感性的作用机制;活性氧(reactive oxygen species,ROS)实验检测miR-186-5p对肺腺癌细胞ROS含量的影响;丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)实验检测miR-186-5p、PRKAA2对肺腺癌细胞铁死亡指标变化的影响;脂质ROS(lipid ROS,L-ROS)实验检测miR-186-5p、PRKAA2对肺腺癌细胞L-ROS含量的影响。结果PRKAA2在肺腺癌中表达上调;过表达miR-186-5p使PRKAA2的基因和蛋白表达量下降;过表达miR-186-5p通过调控PRA2促进铁死亡抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭迁移能力;miR-186-5p能够增加A549细胞ROS含量;过表达miR-186-5p和敲低PRKAA2上调肺腺癌细胞MDA含量,下调还原型GSH含量;miR-186-5p通过靶向PRKAA2增加肺腺癌细胞L-ROS含量,促进肺腺癌细胞铁死亡敏感性。结论miR-186-5p通过靶向调控PRA2促进肺腺癌A549、H1299细胞铁死亡,从而抑制肺腺癌增殖、侵袭和迁移能力。

牛PRKAA2基因SNP检测及与其生长和肉质性状的关联分析

【目的】研究秦川牛、南阳牛、鲁西牛和安格斯牛共630头个体的单磷酸腺苷激活的蛋白激酶α2亚基(AMPKα2)基因PRKAA2的多态性,并分析其多态性与200头秦川牛生长及肉质性状的关联性。【方法】利用PCRSSCP、DNA测序、飞行质谱(MALDI-TOF)等技术,分析检测4个品种牛PRKAA2基因6个外显子的单核酸多态性(SNPs);采用生物信息学方法结合统计分析软件,分析秦川牛各多态位点的遗传变异特性与体尺及肉质性状的关联性。【结果】PRKAA2基因第2、4、6、7、8、9外显子中,只检测到第4外显子27G>C和60T>C 2个突变位点;关联分析表明,27G>C位点与秦川牛背膘厚和眼肌面积显著关联(P<0.05);60T>C位点与秦川牛体斜长极显著相关(P<0.01),与体高、尻长、腰角宽、坐骨端宽、眼肌面积显著相关(P<0.05)。【结论】PRKAA2基因对秦川牛部分体尺及肉质性状有极显著或显著影响,可作为秦川肉牛新品种早期选择的候选基因和分子辅助标记。

PRKAA2基因多态性与二甲双胍疗效的相关性研究

目的研究腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated pro-tein kinase,AMPK)α2亚基基因PRKAA2的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)rs2051040和rs17848595与二甲双胍疗效的关系。方法 2型糖尿病(T2DM)患者32名,服用二甲双胍干预1周(剂量为2000mg·d-1)。治疗前后分别检测空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)。利用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术检测PRKAA2基因rs2051040和rs17848595位点的基因型,比较不同基因型患者二甲双胍疗效的差异。结果基因型为野生型患者经过二甲双胍干预之后FPG、TG、TC、LDL-C与治疗前比较差异均有显著性(P<0.05)。基因型为突变型患者经过二甲双胍治疗之后各项生化指标变化无统计学意义(P>0.05)。结论 PRKAA2基因多态性位点rs2051040和rs17848595可以影响二甲双胍的疗效。

肉鸭PRKAA1和PRKAA2基因表达水平及其与剩余采食量性状的相关性分析

[目的]本试验旨在探讨AMP激活蛋白激酶α1和α2基因(PRKAA1、PRKAA2)在高、低饲料效率组肉鸭胸大肌、腿肌和肝脏中表达水平及其与剩余采食量(RFI)性状的相关性。[方法]选取体质量相近的H系肉公鸭1 000只,测定21~42日龄时的采食量和体增重,计算RFI。挑选高、低RFI组肉鸭各8只,采用定量PCR检测PRKAA1和PRKAA2在2组肉鸭胸大肌、腿肌和肝脏中表达水平。[结果]PRKAA1 mRNA在低RFI组肉鸭胸大肌中表达量极显著高于高RFI组(P<0.01),腿肌中表达量显著高于高RFI组(P<0.05)。低RFI组胸大肌和腿肌中PRKAA2 mRNA表达量显著高于高RFI组(P<0.05)。相关性分析表明,肉鸭胸大肌中PRKAA1 mRNA相对表达量与日采食量、饲料转化率和RFI显著负相关(P<0.05),腿肌中相对表达量与日采食量和RFI显著负相关(P<0.05)。另外,胸大肌中PRKAA2 mRNA相对表达量与日采食量和RFI显著负相关(P<0.05),腿肌中相对表达量与RFI呈显著负相关关系(P<0.05)。[结论]PRKAA1和PRKAA2基因在高、低RFI组肉鸭胸大肌和腿肌中表达量存在显著差异且与剩余采食量性状显著相关。

PRKAA2基因单核苷酸多态性与骨科术后深静脉血栓的相关性研究

背景:腺苷酸活化蛋白激酶α2亚基(AMPKα2)被证实参与调控血小板的活化过程,并可能通过调控肌细胞形态与功能影响血栓的发生、发展。目的:探索AMPKα2的编码基因PRKAA2单核苷酸多态性(rs2143749)与骨科术后深静脉血栓(DVT)的相关性。方法:共收集828例骨科手术患者,其中DVT组255例,术后发生DVT;非DVT组573例,术后未发生DVT。分析828例患者rs2143749的基因型和等位基因频率,比较DVT组与非DVT组基因型和等位基因频率的差异。结果:DVT组与非DVT组患者中rs2143749的基因型和等位基因频率无显著性差异(P>0.05)。结论:PRKAA2单核苷酸多态性(rs2143749)与骨科术后DVT无相关性。

摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因SNPs检测及遗传多样性分析

为研究水牛蛋白激酶AMP活化的催化亚基α2(protein kinase AMP-activated catalytic subunit alpha 2,PRKAA2)基因多态性,本试验以摩拉水牛和尼里-拉菲水牛基因组DNA为模板,扩增PRKAA2基因外显子4及内含子3部分序列,通过常规测序法检测其SNP并进行遗传多样性分析。结果发现,PRKAA2基因外显子4内存在1个SNP位点(c.462G>A),PRKAA2基因内含子3部分序列存在3个SNPs位点(IVS3.557T>C、IVS3.560C>T和IVS3.565G>A)。经遗传多样性分析表明,在c.462G>A位点的野生纯合型和杂合型比突变纯合型更有优势,IVS3.557T>C和IVS3.560C>T位点的突变纯合型为非优势基因型,IVS3.565G>A位点杂合型为优势基因型。IVS3.565G>A位点在摩拉水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态;c.462G>A位点在尼里-拉菲水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态。4个SNPs位点在摩拉水牛群体中均为中度多态;c.462G>A、IVS3.557T>C位点在尼里-拉菲水牛群体中为低度多态,IVS3.560C>T、IVS3.565G>A位点为中度多态。IVS3.557T>C位点在两个水牛群体中杂合度较低。说明摩拉水牛IVS3.565G>A位点和尼里-拉菲水牛c.462G>A位点的基因型频率和基因频率遗传状态不平衡,尼里-拉菲水牛群体中IVS3.557T>C位点遗传变异小,选择潜力不高。4个多态位点可以构建5种单倍型,其中T-C-G-G是摩拉水牛群体和尼里-拉菲水牛群体的优势单倍型。综上,本研究检测的摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因上4个SNPs位点可为水牛标记辅助选择育种提供参考。

PRKAA2基因多态性与2型糖尿病患者血脂的关系

目的研究PRKAA2基因多态性与2型糖尿病患者血脂水平的关系。方法采用变性高效液相色谱仪(DHPLC)检测PRKAA2基因标签SNP rs2796495在104例2型糖尿病。结果TT型者血清低密度脂蛋白胆固醇水平高于CC型者(P<0.05)。结论rs2796495多态性位点与2型糖尿病患者血清胆固醇水平相关。

PRKAA2基因在肿瘤细胞与血细胞中表达差异研究

目的研究常见肿瘤细胞与白细胞(WBC)中的脂代谢相关基因PRKAA2的表达差异,为PRKAA2用于循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的鉴定提供理论基础。方法根据THPA(The human protein atlas)数据库的RNA测序数据,分析WBC的PRKAA2基因表达丰度,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)比较多种肿瘤细胞与WBC中PRKAA2基因的差异表达。采用原位锁式探针杂交技术在细胞原位可视化检测HepG2、U87、Hela、PC-3和健康人外周血WBC的分子表达。最后,掺入实验模拟临床真实样本验证PRKAA2用于鉴定肿瘤细胞的准确性。结果与健康人外周血WBC比较,HepG2、U87、Hela和PC-3的PRAKK2的表达显著上调,差异有统计学意义(均P<0.05)。原位锁式探针杂交实验结果显示HepG2、U87、Hela、PC-3(均为PRKAA2+)和WBC(PRKAA2-)的分子表达有显著区别。掺入实验表明,利用PRKAA2 mRNA荧光信号能准确识别肿瘤细胞。结论PRKAA2在HepG2、U87、Hela、PC-3肿瘤细胞系中的表达量显著高于WBC,且通过检测PRKAA2 mRNA的荧光信号可从大量的WBC背景细胞中准确识别肿瘤细胞。

PRKAA2基因多态性与恩必普对脑梗死患者疗效的关系

目的研究PRKAA2基因多态性与恩必普对脑梗死患者疗效的关系。方法选取235例脑梗死患者为研究对象,全部服用恩必普胶囊30 d后予NIHSS评分观察恢复情况。应用直接基因测序方法,研究AMPKa2基因7个单倍型标记单核苷酸多态性(tag-SNPs)与脑梗死患者疗效的关系。结果 (1)SNP rs1124900基因型分布频率有显著差异,失效组GG基因型患者分布频率较高,但等位基因频率比较无显著差异,且显效组GG基因型检出率较低。rs17848595位点基因型分布频率有显著差异,失效组AA基因型分布频率较显效组高,但等位基因频率比较无显著差异。rs1418442基因型及等位基因分布频率有显著差异,显效组C等位基因频率显著高于失效组,该位点多态性与恩必普治疗的LAA患者预后有相关获益趋势。结论 AMPK的活化可能是脑缺血缺氧后康复的重要因素。

PRKAA2基因SNP与HIIT干预心肺耐力及糖脂代谢敏感性的关联性研究

目的:研究单磷酸腺苷激活的蛋白激酶α2亚基(PRKAA2)基因区的单核苷酸多态性(SNP)对高强度间歇训练(HIIT)干预后心肺耐力及糖脂代谢水平的影响,筛选HIIT干预效果敏感的候选基因标记。方法:对259名普通大学生进行为期12周的HIIT干预训练(3次/周),测定干预前后心肺功能以及糖脂代谢指标。提取受试者基因组DNA进行基因分型,Plink软件分析干预前后指标变化值与基因型之间的关联。对多位点相关联的表型,进行多基因遗传易感性评分(GPS),分析GPS与表型之间的相关性;分析多位点可能形成的单体型与指标变化量的关联性。全基因组关联分析(GWAS)平台检索有关联性多态位点的特征,3D SNP在线软件预测位点可能的生物学功能。结果:1)PRKAA2基因区rs706468与HIIT训练后最大摄氧量(VO2max)、肺通气量(VE)变化之间显著相关(P<0.05),AA纯合子为优势基因型;rs3738565与HIIT训练后低密度脂蛋白(LDL)变化之间显著相关(P<0.05),G等位基因为优势基因型;rs17848596与HIIT训练后肺通气量变化之间显著相关(P<0.05),T等位基因为优势基因型。2)rs706468、rs17848596两个位点的总基因分数与肺通气量变化之间显著相关(R^(2)=0.043,P<0.05),回归方程为:△VE=6.144+1.092×GPS_(W)。3)多位点可能形成的单体型与所有指标变化量无显著性关联。4)软件预测显示,rs706468位点具有较强的基因表达增强作用,rs3738565位点在物种间的保守性较强。结论:1)PRKAA2基因SNP位点rs706468-AA、rs3738565-G、rs17848596-T基因型与HIIT干预后训练效果相关联,可作为预测HIIT训练效果的遗传分子标记候选位点。2)多基因遗传易感性评分对HIIT训练后肺通气量指标训练敏感性的评价效果良好,可解释4.3%的肺通气量增加。3)多位点SNP之间未形成与训练敏感性相关的单体型,其生物学机制尚需进一步实验研究。

PRKAA2基因rs2051040多态性与东乡族2型糖尿病、脂代谢及体质指数关系的研究

目的探讨PRKAA2基因rs2051040多态性与东乡族T2DM发病风险及脂代谢的关系。方法运用高效变性液相色谱技术检测218名东乡族人群中PRKAA2基因rs2051040多态性,其中T2DM患者(T2DM组)104例,健康者(NC组)114名。分析该多态性位点基因型及等位基因频率与T2DM的关系,比较不同基因型间生化指标的差异。结果 rs2051040多态性位点的基因型和等位基因频率两组间差异无统计学意义,但T2DM组rs2051040多态性与HDL-C及BMI相关。结论 rs2051040多态性位点与东乡族T2DM发生无相关性,但与T2DM患者血脂和BMI相关。

甘肃地区PRKAA2基因单核苷酸多态性与2型糖尿病及脂联素、抵抗素关系的研究

目的探讨甘肃地区PRKAA2基因rs2746342(G/T)单核苷酸多态性与T2DM及血清脂联素(APN)、抵抗素(Resistin)的关系。方法甘肃地区T2DM患者163例和正常对照组86名,两组年龄、性别匹配,采用聚合酶链反应/DNA限制性片段长度多态性(PCR/RFLP)、酶联免疫分析(ELISA)检测其基因多态性、空腹C肽(FCP)、APN、Resistin,同时测身高、体重、血压、BMI、空腹血糖、血脂等。结果 (1)T2DM组与正常对照组的基因型和等位基因频度分布存在显著差异(P<0.05);(2)T2DM组各基因型T/T、G/T、G/G中Resistin、TG、TC、LDL-C、FC-P依次降低,APN、HDL-C依次增高(P<0.05);(3)APN水平在糖尿病超重组低于糖尿病正常体重组和对照组,Resistin水平在糖尿病超重组高于糖尿病正常体重组和对照组(P<0.05);(4)相关分析表明APN水平与BMI、血压负相关,与C肽正相关(P<0.05),Resistin水平与BMI、血压正相关,与C肽负相关(P<0.05);(5)T2DM超重组较T2DM正常体重组和正常对照组TG、LDL-C水平升高(P<0.05),HDLC水平降低(P<0.05)。结论甘肃地区PRKAA2基因rs2746342(G/T)单核苷酸基因多态性可能与T2DM及胰岛素抵抗、血清APN、Re-sistin水平关联。