沉默LncRNA PROX1-AS1通过NLRP3/Caspase-1炎症通路抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭及诱导细胞凋亡的实验研究

目的:研究LncRNA PROX1-AS1对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:将si-con、si-LncRNA PROX1-AS1、mimic-con、PROX1-AS1 mimic转染至Huh7中,分别记为si-con组、si-LncRNA PROX1-AS1组、mimic-con组、PROX1-AS1 mimic组;正常培养的细胞作为对照(NC)组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LncRNA PROX1-AS1表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;蛋白质印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体含热蛋白结构域3(NLRP3)、前体Caspase-1(pro-Caspase-1)、Caspase-1 p20蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:与正常肝细胞THLE-3相比,肝癌细胞Hep3B、Huh7、MHCC97L中LncRNA PROX1-AS1高表达(P<0.05)。沉默LncRNA PROX1-AS1,细胞活性显著降低,MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞迁移和侵袭数显著降低,Cleaved caspase-3表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1 p20表达水平显著降低,IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05)。结论:沉默LncRNA PROX1-AS1可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭及诱导细胞凋亡,其机制可能与NLRP3/Caspase-1炎症通路有关。

lncRNA PROX1-AS1负调控miR-206对鼻咽癌细胞SUNE1增殖、迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)PROX1反义RNA1(PROX1-AS1)是否靶向miR-206影响鼻咽癌细胞SUNE1的增殖、迁移和侵袭。方法采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测鼻咽癌组织和癌旁组织中PROX1-AS1和miR-206表达。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR分析PROX1-AS1和miR-206靶向关系。细胞计数试剂盒(CCK-8)法、克隆形成实验、Transwell实验检测PROX1-AS1和miR-206表达对SUNE1细胞增殖活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数的影响。蛋白质印迹法(Western blot)分析上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)、和神经钙黏素(N-cadherin)蛋白表达。结果鼻咽癌组织中PROX1-AS1表达较癌旁组织显著升高,miR-206表达较癌旁组织显著降低(P<0.05)。PROX1-AS1直接靶向miR-206并负调控其表达。干扰PROX1-AS1表达后SUNE1细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、N-cadherin蛋白表达量显著降低,E-cadherin蛋白表达量显著升高(P<0.05)。与抑制PROX1-AS1比较,同时抑制PROX1-AS1和miR-206后SUNE1细胞活力、克隆形成数、迁移和侵袭细胞数、N-cadherin蛋白表达量显著升高,E-cadherin蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论鼻咽癌中PROX1-AS1呈高表达,干扰PROX1-AS1通过负调控miR-206可抑制鼻咽癌细胞SUNE1的增殖、迁移和侵袭。

大黄素对K562细胞长链非编码RNA表达谱的影响

目的研究大黄素作用K562细胞后长链非编码RNA(lnc RNA)表达谱的变化,筛选并验证差异lnc RNA。方法利用lnc RNA芯片技术检测大黄素作用K562细胞后长链非编码RNA(lnc RNA)表达谱,通过对原始数据进行处理,筛选出差异表达lnc RNA并进行分析,挑选差异较大的4个lnc RNA进行荧光定量PCR验证。结果与DMSO对照组作用K562细胞后lnc RNA表达谱相比,大黄素作用K562细胞后变化4倍以上lnc RNA共11条。经过荧光定量PCR检测,大黄素作用K562细胞后CDR1AS和PROX1-AS1表达上调与芯片结果一致。结论大黄素作用K562细胞后CDR1AS和PROX1-AS1等lnc RNA表达的上调,为进一步深入研究大黄素抑制K562细胞增殖和促进K562细胞红细分化的分子机制打下基础。