含P_RP_L启动子的原核高效表达载体的组建及其应用

我们组建了一个含P_RP_L自动子的原核高效表达载体,它同时含有cI调控基因、多酶切点和两个强的转录终止序列。带起始密码子ATG的外源基因可以插入启动子下游的多酶切点,表达非融合蛋白,产品可供临床使用。我们实验室已用它成功地表达了人γ干扰素、人白细胞介素-2和人肿瘤坏死因子等,表达量均占菌体总蛋白的20％以上。

应用P_RP_L串联启动子表达HIV-2gag蛋白

目的 :探讨HIV 2gag非融合蛋白的表达。方法 :应用DNA重组技术 ,将HIVgag基因全序列 (gag)和部分 (gag’)cDNA片段克隆到pBV2 2 0载体PRPL 串联启动子下游 ,构建成HIV 2gag重组表达载体pBV gag和pBV gag’ ,在大肠杆菌中表达。结果 :SDS PAGE显示pBV gag’在 2 1kD处可见一明显的额外蛋白带 ,经薄层扫描分析占菌体总蛋白的 6 .1% ,蛋白印迹结果证明 ,表达出的特异蛋白分子量pBV gag为 5 7kD和 47kD ;pBV gag’为 47kD和 2 1kD。经提取包涵体证明 ,表达的蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。结论 :HIV

TNFHis-IL-11温度诱导融合表达载体的构建

目的构建TNFHis IL 11温度诱导融合表达载体。方法用EcoRI和PstI消化pGEMIL 11质粒后 ,回收IL 11基因片段 ,以同样的酶切位点克隆入TNFHis表达载体。将重组质粒转入大肠杆菌DH5α菌株 ,经 4 2℃温度诱导 4 .5h后做SDS PAGE和免疫活性鉴定。结果融合蛋白获得了表达 ,其分子量为 37kD ,其表达量占菌体总蛋白的 2 5 %。免疫印迹反应结果显示 ,表达的融合蛋白可与抗IL 11多克隆抗体产生阳性反应。该融合蛋白经盐酸羟胺裂解后可获得IL 11单体。结论TNFHis IL 11温度诱导融合表达载体构建成功。