猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-la株糖蛋白基因的遗传变异分析

新近发现的猪生殖 -呼吸道综合征病毒 (PRRSV)是单股RNA病毒 ,属于不久前成立的动脉炎病毒科。为了比较国内分离的CH la株与国外毒株的分子遗传学关系 ,扩增并克隆了PRRSVCH la株糖蛋白基因ORF2～ 5 ,测定了其核苷酸序列。用序列分析软件分析了其编码产物的分子量、等电点、疏水性、抗原性和有关位点 ,并与国外毒株进行了序列比较和系统发育进化分析。结果表明 :CH la株与VR 2 332株尽管密切相关 ,但二者之间也有较大的变异 ,且ORF3和ORF4重叠区存在一个高变区。这提示CH la株和VR 2 332株可能是北美洲型中的两个不同亚型。

猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫场与非免疫场血清抗体监测分析与比较

为掌握猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体消长规律,分别对PRRSV免疫A场和PRRSV非免疫B场近2年的PRRSV抗体监测数据进行分析。结果显示:免疫A场稳定的重要指标是S/P平均值约为2.0、离散度≤40%和≥2.5比例为0;非免疫B场稳定的重要指标是逐渐降低的抗体阳性率和≥2.5比例为0。结合生产情况,追溯猪场出现抗体大波动的时间点,发现每当从外场引种就会造成猪群不稳定,说明外来后备猪驯化是防控PRRS的重点。本研究为调查猪场调整PRRS防控措施提供科学依据,为临床上解读猪场PRRSV抗体监测数据提供参考。

2008-2010年中国华东地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析

【目的】对来自2008-2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。【方法】利用RT-PCR方法对采集的样品进行PRRSV检测,并对PRRSV检测呈阳性的36份病料进行ORF5基因的序列测定和分析。【结果】260份病料中共检测到118份PRRSV阳性样品,阳性率为45.4%。ORF5序列分析和系统进化树分析结果表明,本试验所获得的36株PRRSV毒株序列均属于北美型,与GenBank中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)参考毒株的氨基酸同源性为94.6%-100%,并可分为5个亚群,亚群III与HP-PRRSV同源性最高,几乎所有的亚群中和表位(primary neutralizing epitope,PNE)都存在变异,亚群III和IV相对于其它亚群具有更多的糖基化位点。由于36个毒株是于2008-2010年间采集自安徽、江苏、上海等7省,进化树分析结果表明,病毒的分型并没有呈现明显的地域性。【结论】2008-2010年间中国华东地区普遍存在PRRSV感染,PRRSV流行株为HP-PRRSV,其遗传演化相对稳定,但也具有不同的遗传特征。来源于不同省市的PRRSV毒株的遗传关系存在交叉,虽然亚群IV和V只出现在部分省市,但PRRSV的分布没有呈现明显的地域特征。

竞争ELISA检测猪呼吸与繁殖综合征病毒抗体研究

应用抗PRRSN蛋的单克隆抗体建立了竞争ELISA检测技术,与美国IDEXX公司的间接ELISA检测试剂盒对比检测了30份SPF猪血清,29头SPF猪人工接种呼吸与繁殖综合征病毒后于5d、12d、29d采集的猪血清共87份,临床血清95份,以及其他相关病毒的阳性血清。实验证明,竞争ELISA的检测阴阳性限值为30%,检测特异性为100%,在人工攻PRRSV病毒第五天的猪血清中,可检测到抗PRRSVN蛋白抗体,12dpi,阳性检出率为93%,29dpi,阳性检出率为100%,与IDEXXPRRSVELISA试剂盒进行比对,结果表明,二种检测方法检测美洲株PRRSV抗体的符合率为90%以上,但检测欧洲株抗体符合率较低。建立的竞争ELISA检测技术对于PRRSV美洲株抗体的早期诊断有非常重要的意义。

2014—2016年广东省规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的流行病学调查

【目的】研究广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况。【方法】2014—2016年共采集广东省各规模化猪场猪组织样品1 137份进行抗原检测,血清样品9 432份进行抗体检测。对不同年份、不同季度、不同区域的PRRSV抗原抗体检测情况进行比较分析,对分离的病毒进行遗传进化分析。【结果】2014、2015和2016年的PRRSV抗原阳性率分别为30.86%、34.35%、37.50%;抗体阳性率为82.86%、68.87%、74.56%。从季度分析来看,第1季度抗原阳性率最高,为40.27%;第2季度抗原阳性率最低,为28.66%;各季度抗体水平均在70%以上。不同区域间的PRRSV感染率差异明显,粤东粤西感染率显著低于珠三角和粤北;在抗体水平上,粤东地区较低,抗体阳性率为69.51%,其他3个区域均高于75%。抗原检测阳性的样品中共分离到69株PRRSV毒株,其中有39株位于Subgenotype I亚群。【结论】广东地区PRRSV抗原阳性率呈逐年上升趋势,抗体水平较高但并不稳定,从病毒分离结果看,Subgenotype Ⅰ亚群为省内主要流行亚群。

新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及其Nsp2和ORF5基因遗传变异分析

为探索新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的变异特征,利用RT-PCR、ORF5和部分NSP2基因序列进行分析,鉴定从新疆某猪场疑似猪高热病死亡猪肺脏分离出的一株病毒.分离的病毒株被鉴定为PRRSV美洲型,命名为XJ-Q株.该株病毒与香港分离株HK13亲缘关系最近,与国内变异株（HUB1和JXA1）同源性较为亲近.与美洲型标准毒株VR-2332相比,该分离株在481位和532～560位共有30个氨基酸缺失;与国内分离的PRRSV变异株相比,在487～489位有3个氨基酸的独特缺失.结果表明,新疆分离株为PRRSV美洲型,属于新缺失的PRRSV毒株.

调控CD163基因表达的miRNA鉴定及其在PRRSV感染中的作用分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种危害大、控制难的猪传染性疾病。PRRSV必须通过特异性受体诱导才能入侵宿主细胞,而CD163就是其中一个关键受体。在获得靶向作用CD163基因miRNA的基础上,进一步研究发现过表达miR-181c、miR-4262可极显著抑制细胞内CD163 mRNA的表达(P<0.01);且在Marc-145细胞中证实miR-181c、miR-23b、miR-4262均具有极显著抑制PRRSV增殖的功能(P<0.01),其中miR-4262抑制效果最佳。3个miRNA抗PRRSV增殖的分子机制比较复杂,miR-181c、miR-4262可通过靶向抑制受体CD163发挥抗PRRSV增殖作用,而miR-23b是通过其他途径发挥作用。并首次发现miR-4262具有抑制PRRSV增殖的作用,但其具体的分子作用机制还有待进一步深入研究。

猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF_7基因的克隆及鉴定

本研究利用对应于ＡＴＣＣＶＲ－２３３２及ＬＶＯＲＦ７基因保守序列的１对均为２８个碱基的引物１００１１ＰＣＳ、１０１０ＰＣＲ对ＰＲＲＳＶ中国分离株Ｂ１３进行ＲＴ－ＰＣＲ，结果扩增出了１条包括完整ＯＲＦ７基因的５１０ｂｐ的ＤＮＡ片段。纯化此扩增产物，并对其进行ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ双酶切，与用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔＩ双酶切及碱性磷酸酶处理的ＰＵＣ１８载体连接。转化大肠杆菌。结果得到了１个Ｂ１３ＯＲＦ７基因与ＰＵＣ１８载体的重组质粒ＰＵＣ１８Ｂ１３ＯＲＦ７１０。通过ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ及ＰＣＲ证明此重组质粒即为Ｂ１３ＯＲＦ７基因与ＰＵＣ１８载体的重组质粒。从而为ＯＲＦ７基因及所表达的核衣壳蛋白进一步研究奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(CH-1R株)工厂化生产培养条件的研究

为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活疫苗CH-1R株的产量和疫苗的质量,本实验探索了PRRSV活疫苗CH-1R株在MARC-145细胞中大规模生产培养的最佳条件。将CH-1R株分别在3L和10L转瓶培养的MARC-145细胞中进行增殖试验,分析CH-1R株在不同接种病毒量和不同接种病毒时间的TCID50变化规律。结果表明,在3L和10L转瓶中,病毒的TCID50最高可达到107.0TCID50/mL以上。CH-1R株通过转瓶在MARC-145细胞中大规模增殖,为PRRSVCH-1R株的工厂化生产奠定了基础。

广西种猪场CSF、PRRS、PCV2与PR监控效果研究

采用PCR和RT-PCR对2004～2008年广西种猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病(PR)进行监控。结果表明,2004～2008年广西种猪场CSF、PRRS、PR、PCV2均有不同程度的发生,其中2004年阳性率最高,2008年阳性率最低(全部为阴性)。从2004～2008年,组织样品的PRRSV阳性率呈逐年下降趋势;CSFV和PRV的阳性率变化趋势相似,即2004年较高、2005年有所下降、2006年有所反弹、2007～2008年呈下降趋势;PCV2阳性率变化趋势则是在2005～2006年出现一个峰值。在公猪精液方面,PRRSV、PRV、PCV2阳性检出率呈逐年下降趋势。不同年份内不同疫病对种猪场的影响程度也存在差异。可见,以PCR和RT-PCR来监控种猪场疫病具有较高的可行性。

Ssc-miR-27b-3p在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染中的作用分析

在发现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后ssc-miR-27b-3p显著下调表达的基础上,进一步分析其在PRRSV感染中的作用。通过在Marc-145和猪肺泡巨噬细胞(PAM)中超表达和抑制表达sscmiR-27b-3p,再用PRRSV感染细胞,利用荧光定量PCR和Western blot技术检测细胞内PRRSV RNA和蛋白表达差异,证实ssc-miR-27b-3p能显著抑制PRRSV在宿主细胞中的增殖。

上海PMWS并发PRRS自然病例的病理组织学观察

对上海5例5～13周龄断奶仔猪多器官衰竭综合征（PMWS）并发猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）自然病例进行了病理组织学观察。结果：5例病猪均出现坏死性淋巴结炎、间质性肺炎以及不同程度的坏死性脾炎、间质性肾炎和肝炎。2例病猪出现心肌炎，表现为心肌纤维断裂、溶解和心肌间质中淋巴细胞局灶性浸润。2例病猪出现脑炎，在大脑白质区出现神经胶质细胞结节。

2008-2010年中国华东地区PRRSV ORF5基因遗传变异分析(英文)

[目的]对来自2008～2010年中国华东地区7个不同省市的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场送检的病料进行PRRSV检测,并对其ORF5基因进行测序,确定当前PRRSV在中国华东地区的分子流行病学特征,并分析PRRSV在中国的遗传演化规律。[方法]利用RT-PCR方法对采集的样品进行PRRSV检测,并对PRRSV检测呈阳性的36份病料进行ORF5基因的序列测定和分析。[结果]260份病料中共检测到118份PRRSV阳性样品,阳性率为45.4%。ORF5序列分析和系统进化树分析结果表明,本试验所获得的36株PRRSV毒株序列均属于北美型,与GenBank中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)参考毒株的氨基酸同源性为94.6%～100%,并可分为5个亚群,亚群III与HP-PRRSV同源性最高,几乎所有的亚群中和表位(primaryn eutralizing epitope,PNE)都存在变异,亚群III和IV相对于其它亚群具有更多的糖基化位点。由于36个毒株是于2008～2010年间采集自安徽、江苏、上海等7省,进化树分析结果表明,病毒的分型并没有呈现明显的地域性。[结论]2008-2010年间中国华东地区普遍存在PRRSV感染,PRRSV流行株为HP-PRRSV,其遗传演化相对稳定,但也具有不同的遗传特征。来源于不同省市的PRRSV毒株的遗传关系存在交叉,虽然亚群IV和V只出现在部分省市,但PRRSV的分布没有呈现明显的地域特征。

猪PRRS抗性筛选单核细胞来源巨噬细胞模型的建立

采用密度梯度离心法分离猪外周血单核细胞(PBMCs),通过添加GM-CSF刺激使PBMCs转化为外周血单核细胞来源巨噬细胞(MDMs);比较了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染MDMs和肺泡巨噬细胞(PAMs)不同时间的病毒载量及病毒TCID50,研究了PRRSV体外感染猪MDMs后复制和滴度的变化规律。结果表明:PBMCs转化的MDMs具有很好的墨汁吞噬能力,MAC387标记阳性;GM-CSF刺激PBMCs转化为MDMs的最适质量浓度为20 ng.mL-1,刺激时间为72 h时MDMs转化率最高;PRRSV体外感染12 h时MDMs中病毒载量达到最高值,随后迅速下降;细胞上清液的病毒滴度在12～24 h进入平台期,然后转入衰亡期,与PRRSV在PAMs中增殖趋势相似。本试验建立的PRRS抗性筛选MDM模型,具有受检猪只损伤小、简便易行的特点,可代替PAM细胞模型用于评价猪对PRRS的抗性。

RNA干扰技术及其在猪繁殖与呼吸综合征治疗中的应用

RNA干扰(RNAi)技术是近年来发现的由双链小RNA(siRNA)介导的以序列特异性方式诱导同源mRNA降解的新技术。由于其特异性和有效性,已被认为是一种重要的特异性基因阻断技术。将RNA干扰技术应用于猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)治疗中能明显抑制病毒复制,为猪繁殖与呼吸综合征的预防和治疗开辟了一条新途径。文章就RNA干扰(RNAi)技术和其在猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)治疗上的应用进行了综述。

2019年夏季成都市病死猪繁殖与呼吸综合征感染情况分析

为评估2019年夏季成都市病死猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病)的感染情况,2019年6~9月,笔者对采集自成都市三个无害化处理厂的237份组织病料样本进行了PRRSV荧光定量PCR检测,结果显示:有10份样品呈PRRSV阳性,阳性率达4.22%,表明成都市各区(市)县养殖场户中仍散在蓝耳病毒。

扶正解毒散对CSF、PRRS、PR与FMD免疫效果试验

为了评估扶正解毒散对猪主要疫病免疫效果,本试验采取对比试验猪群口蹄疫、猪瘟、猪伪狂犬病与猪蓝耳病免疫抗体比较进行了评估,结果表明:饲喂河南洛阳兽药厂生产扶正解毒散试验能显著提高免疫水平,尤其是能显著提高猪群猪伪狂犬病及猪蓝耳病免疫抗体合格率,方案为每袋1kg扶正解毒散拌料1500kg,连用15天,每间2个月用1次。

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒IgY的制备

利用猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗超量免疫母鸡,用水稀释法和硫酸铵沉淀法分离纯化IgY抗体,并用间接ELISA方法测抗体效价。结果表明:母鸡初次免疫后10d即有抗体产生,初次免疫75d后IgY效价可达1:10000,最高可达1:12800并能持续7～10d。IgY蛋白含量为10.64mg/mL蛋黄。IgY纯度达90%以上。

猪生殖和呼吸综合征的检疫与诊断

猪生殖和呼吸综合征(PRRS)俗称蓝耳病,它以妊娠母猪的流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍为主,并且基于PRRS病毒所引发的各年龄段仔猪呼吸道疾病。目前,PRRS已经成为规模化养猪场的主要疫病之一,严重时会给地方养猪行业带来巨大经济损失。介绍猪生殖和呼吸综合征的发病状况、发病症状及诊断方法。

猪繁殖与呼吸综合征的诊断及防制

猪的繁殖与呼吸综合征(PRRS)又称猪蓝耳病,是一种高度接触性传染病,以母猪繁殖障碍、流产、产死胎和木乃伊胎,幼龄仔猪发生呼吸系统疾病和大量死亡为主要特征,给养猪生产带来了巨大的经济损失。该病目前尚无特别有效的预防和治疗方法。就猪蓝耳病的病原、流行病学、临床症状、病理变化及其综合防制措施进行了简要概述,以期为临床诊断预防该病提供参考。