PRRSV CH-1R疫苗株N蛋白的克隆及原核表达

为了区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原是来自疫苗株还是野毒株,试验采用RTPCR和PCR方法从PRRSV CH-1R株中扩增出ORF7基因,通过T4连接酶将ORF7基因与p ET-28a(+)载体连接,导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,并以20%IPTG进行诱导表达。结果表明:重组菌可表达分子质量为16.0 ku的融合蛋白,且20%IPTG诱导3 h的表达效果最好;表达产物纯化后可得到纯度较高的目的蛋白,经Western-bolt分析可确认该蛋白为PRRSV CH-1R株N蛋白。说明在原核表达系统中可表达出PRRSV CH-1R株N蛋白,并且能够使其携带上多聚组氨酸(6×His-tag)标签,形成N-His融合蛋白,使该蛋白与其他PRRSV经典株的N蛋白形成差异化。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫效力及安全性试验报告

笔者检验了国药集团扬州威克生物工程有限公司制备的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫效力,对SY-007批苗、国内市售某同类疫苗和进口苗进行比较,包括外观、溶解性、病毒含量和安全性和攻毒保护率。结果显示,国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗与市售某国产苗和进口苗在外观上稍有颜色差异,但溶解性无明显差异;国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗与市售某国产苗病毒含量相同,均高于进口苗;3种疫苗对裸鼠和仔猪均具有较好的安全性;国药集团扬州威克生物工程有限公司疫苗的免疫效力与进口苗效果基本一致,且明显好于市售某国产苗。系列试验结果表明,国药集团扬州威克生物工程有限公司生产的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)产品质量与进口苗相当,优于市售某国产苗。

短肽佐剂增强PRRSV弱毒疫苗免疫保护力的研究

分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R株单独(单独免疫组)、CH-1R株与短肽佐剂共同(共同免疫组)及生理盐水(对照组)接种仔猪,接种后4周以高致病性PRRSV(HP-PRRSV)TJ-F5攻毒,利用ELISA方法测定攻毒前后外周血IL-4、IL-18、IFN-γ、IL-12/IL-23P40浓度。免疫后共同免疫组更多猪(80%)产生更高浓度的IFN-γ、更早(第3天)产生更高浓度的IL-18,于第7天都显著高于其他组(P<0.01),同时IL-4含量升高至6.2ng/L;单独免疫组、对照组仅有40%、0%的猪产生了IFN-γ,但IL-4始终为0ng/L。攻毒后共同免疫组IFN-γ、IL-18更早(于21d)降为0ng/L,临床症状和各组织器官病理变化轻微;单独免疫组于28dIL-18降为0ng/L而IFN-γ仍很高(63.8ng/L),临床症状和各组织器官病理变化比共同免疫组严重,但比对照组明显减轻;单独免疫组、共同免疫组及对照组的攻毒保护率分别为40%、80%、0%。结果表明,短肽佐剂配合CH-1R弱毒疫苗免疫可增强IFN-γ、IL-18介导的细胞免疫及IL-4介导的体液免疫、减轻攻毒后IFN-γ、IL-18介导的炎症反应和组织损伤,提高免疫保护力;在抵抗HP-PRRSV TJ-F5攻毒时,共同免疫组的免疫保护力明显高于单独免疫组。