原位滚环扩增技术在肝组织HBVcccDNA表达的检测中的应用

目的运用原位滚环扩增和原位PCR方法检测HBVcccDNA在肝组织中的表达。方法收集20例乙肝表面抗原携带者、慢性乙型肝炎、慢性乙型肝炎后肝硬化及肝细胞性肝癌患者的石蜡包埋肝组织切片,采用PSAD酶消化、原位滚环扩增方法及使用根据HBVcccDNA与HBVrcDNA结构上的差异而设计的地高辛标记的原位跨缺口引物进行原位PCR,然后用免疫组织化学方法进行显色,显微镜下观察HBVcccDNA在肝组织中表达分布,并对结果进行评价分析。结果：20例标本中有15例可见HBVcccDNA阳性信号,组织切片阳性表达率为平均40-85%,以核型为主,呈蓝色、紫色或紫蓝色,呈颗粒状、弧形或圆形团块状,主要在核及核膜上表达。结论原位滚环扩增方法用于检测肝组织中HBVcccDNA的表达,具有敏感性高、特异性强的特点。