真核载体pcDNA3.1/PSD95-PDZ2的构建、表达及功能鉴定

目的构建含突触后密度蛋白-95(PSD95)的第2个盘状同源区域(PDZ2)的真核载体pcDNA3.1/PSD95-PDZ2,并检测其在鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)中的表达和功能。方法采用RT-PCR法从小鼠神经元细胞的cDNA中,扩增出约309 bp的PSD95-PDZ2基因片段。用EcoRⅠ、BamH I将片段和载体pcDNA3.1双酶切后,酶切产物加入T4 DNA连接酶16℃连接过夜,构建真核表达载体pcDNA3.1/PSD95-PDZ2。用双酶切、DNA序列分析鉴定正确后,采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将其转染PC12细胞,IP法检测目的片段在细胞中的表达与功能。结果阳性克隆经双酶切法鉴定含有PSD95-PDZ2基因片段,基因测序结果与GenBank中序列相同。IP检测出11 ku大小的蛋白,证明目的基因在PC12细胞中可以正常表达并与神经元性一氧化氮合酶(nNOS)结合。结论真核载体pcDNA3.1/PSD95-PDZ2构建成功,目的片段PSD95-PDZ2在PC12细胞中可正常表达并与nNOS结合,为进一步研究其作用奠定了基础。

人参养荣汤改善阿尔兹海默症小鼠学习记忆损伤的作用

目的探究人参养荣汤对阿尔兹海默症小鼠学习记忆损伤的改善作用及其机制。方法72只小鼠随机分为空白组,模型组,多奈哌齐组(0.1 mg/kg),人参养荣汤低、中、高剂量组(1.56、3.12、6.24 g/kg),每组12只。除空白组外,其余各组小鼠每天腹腔注射100 mg/kg D-半乳糖,灌胃10 mg/kg AlCl_(3),2 h后灌胃给予治疗药物。造模后90 d,行为学实验检测小鼠学习记忆能力,采用试剂盒检测小鼠血清、脑组织生化指标,HE染色评估海马组织损伤情况,蛋白免疫印迹法检测海马组织PSD95/NR2B通路蛋白的表达。结果人参养荣汤及多奈哌齐均对小鼠空间学习记忆有明显改善作用,可以缓解小鼠体内氧化应激,升高脑组织乙酰胆碱(Ach)水平,降低乙酰胆碱酯酶(AchE)活性,减轻海马组织损伤,同时上调PSD95、NR2B的蛋白表达。结论人参养荣汤可明显改善阿尔兹海默症小鼠的学习记忆损伤,缓解氧化应激,恢复小鼠脑组织乙酰胆碱系统,其机制可能与调节PSD95/NR2B信号通路有关。

PP2对大鼠面神经缺血损伤的保护作用

目的:探讨PP2(4-amino-5-(4-chlorophenyl)-7-(t-butyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine)在大鼠面神经缺血损伤模型中的保护作用,为进一步探索面神经缺血损伤的治疗方法提供实验依据。方法:实验选取40只雄性SD大鼠,分为四组:假手术组,损伤组,DMSO溶剂对照组和PP2干预组。手术组沿耳廓外上缘行弧形切口,分离暴露出岩动脉,双极电凝灼断。假手术组暴露出岩动脉但不予灼断。PP2干预组和DMSO溶剂对照组于术前30 min分别脑室注射15 μg(总体积10 μL)PP2或相同体积DMSO。于3 d后观察各组大鼠的行为学变化,同时运用免疫共沉淀和免疫印迹的技术分析其中分子机制。结果:(1)PP2干预组的大鼠相对于手术组和DMSO溶剂对照组,瞬目反射和触须动度明显好转(2)大鼠面神经缺血损伤时,损伤组相对于假手术组,NMDAR-PSD95-Src的结合明显增加(P<0.05)(3)PP2干预组NR2A-PSD95-Src的结合相对于手术组和DMSO溶剂对照组明显降低(P<0.05)。结论:大鼠面神经缺血损伤时,存在NMDAR-PSD95-Src形成的信号通路,PP2可以有效的抑制NMDARPSD95-Src信号通路的形成,从而起到面神经保护作用。