加味柴胡桂姜汤介导乳腺癌细胞黏附分子PSGL-1改善炎症-黏附-转移作用研究

目的研究炎症微环境下黏附分子PSGL-1异常表达对乳腺癌细胞增殖、黏附、侵袭及迁移能力的影响及加味柴胡桂姜汤干预作用机制。方法制备加味柴胡桂姜汤含药血清,选择高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞株,筛选药物最佳浓度;运用脂多糖刺激乳腺癌细胞形成炎症微环境模型,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、顺铂组、PSGL-1中和抗体组、加味柴胡桂姜汤组、加味柴胡桂姜汤与PSGL-1中和抗体联合组,采用CCK-8法、明胶黏附、Transwell及细胞划痕实验检测细胞增殖、黏附、侵袭和迁移能力;qRT-PCR和Western blot实验检测PSGL-1与其受体及Vimentin等EMT相关基因表达。结果LPS刺激乳腺癌细胞后细胞生物学行为改变,黏附分子及EMT基因表达增加,加味柴胡桂姜汤、PSGL-1中和抗体均能抑制LPS诱导的增强作用,联合组较加味柴胡桂姜汤组抑制作用降低。结论炎症微环境下肿瘤细胞侵袭及迁移能力增强,加味柴胡桂姜汤能够靶向调控PSGL-1抑制乳腺癌细胞侵袭及迁移。

PS/PSGL-1在冠心病合并颈动脉粥样斑块痰瘀互阻证中的作用

目的:检测颈动脉内-中膜厚度(IMT)、斑块指数(Crouse积分)以及血清P-选择素(PS)、血清P-选择素糖蛋白配体1(PSGL-1)水平,探讨血小板-白细胞相互反应在冠心病合并颈动脉斑块痰瘀互阻证中的临床意义。方法:冠心病合并颈动脉粥样硬化患者80例(观察组),按照中医辨证分型分为痰瘀互阻证组、非痰瘀互阻证组,健康人30例(对照组),分别检测3组血清PS、PSGL-1水平与IMT、Crouse积分。结果:(1)观察组IMT、Crouse积分、PS、PSGL-1均明显高对照组(P<0.01);痰瘀互阻证组IMT、Crouse积分、PS、PSGL-1明显高于非痰瘀互阻证组(P<0.01)。(2)PS和PSGL-1的表达呈正相关性(r=0.714,P<0.01)。血清PS与IMT、Crouse积分呈正相关(P<0.01)。血清PSGL-1含量与IMT、Crouse积分亦呈正相关(P<0.05,P<0.01)。(3)冠脉造影结果中病变分支越多,PS、PSGL-1的水平越高(P<0.01,P<0.05)。结论:(1)颈动脉IMT及斑块积分可反映冠状动脉粥样硬化的程度。(2)PS、PSGL-1在冠心病合并颈动脉斑块发病过程中具有重要意义,可能与痰瘀互阻的实质存在一定关系。

PSGL-1——一种介导白细胞粘附的重要分子

PSGL - 1是 90年代初期发现的一种粘附分子 ,具有同源二聚体的结构 ,为一种跨膜的糖蛋白 ,表达于白细胞的表面 .成熟PSGL - 1分子上具有很多O -连接的糖基化位点 ,岩藻糖基化、唾液酸化和NH2 末端酪氨酸的硫酸化对于PSGL - 1的功能十分重要 .PSGL - 1是选择素P的配体 ,与选择素P具有特殊的亲和性 .PSGL - 1同时也是选择素L和选择素E的配体 .PSGL - 1与选择素分子的相互作用在白细胞粘附的起始阶段发挥着重要作用 .PSGL - 1在介导白细胞粘附的同时可以转导胞外信号 ,促进白细胞活化并使其稳定粘附 .白细胞粘附具有重要的生理意义 .

应用光阱技术测量P-selectin/PSGL-1键解离的断裂力

选择素(selectin)与配体相互作用在诸如炎症反应、肿瘤转移等生物学过程中具有重要作用;作用力影响受体-配体键解离。本文发展了基于光阱技术的新实验方法,用于考察P-选择素(P-selectin)与P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin Glycoprotein Ligand1,PSGL-1)相互作用的解离过程。采用黏滞力法对光阱刚度系数进行标定,并通过分子在玻璃小球表面的功能化表征,研究力作用下P-selectin/PSGL-1键的解离,得到了在较低加载率(<25pN/s)下键解离的断裂力分布,发现键的最可几断裂力随加载率而增加。实验结果在较低加载率下补充和验证了已有的结论。

力经PSGL-1介导ERM蛋白ITAM-like序列上磷酸化位点的暴露

炎症反应阶段,P-选择素糖蛋白配体1(PSGL-1)与埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ERM)的结合在招募脾酪氨酸激酶(Syk)并促进白细胞激活中发挥了重要作用.文中通过晶体结构分析发现,位于ERM蛋白非传统的免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM-like)上的两个磷酸化位点(Y191和Y205)周围存在较大的空间位阻,这将阻碍其被Src家族激酶酪氨酸磷酸化继而招募Syk的过程.文中用拉伸分子动力学模拟的方法模拟力学环境下PSGL-1与根蛋白FERM结构域的相互作用,构象分析和残基溶剂可及表面积的变化都表明,经由PSGL-1传导的力学信号可以介导根蛋白ITAM-like序列上磷酸化位点Y205的暴露.文中结果揭示了一条经由PSGL-1胞内域激活Syk的力学信号通路,并且在原子层面上对PSGL-1/ERM/Syk之间的相互作用给予了阐释.

PSGL-1基因敲除小鼠血中MIP-1γ和TNF-α的表达

目的研究PSGL-1缺失对遗传基因工程小鼠外周血血常规的影响,并检测外周血中炎症因子IGFBP-6、TNF-α和MIP-1γmRNA表达水平。方法用血常规检测方法检测正常C57/BL/6小鼠和PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠(PSGL-1-/-小鼠)的外周血中血常规的差异;其次,提取两种鼠的血液的mRNA,逆转录为cDNA,采用real-time PCR方法,检测C57小鼠与PSGL-1-/-小鼠外周血中炎症因子TNF-α和MIP-1γmRNA的差异。结果与对照组C57小鼠相比,PSGL-1-/-基因工程小鼠在12周龄时外周血中中性粒细胞(*P<0.05)、淋巴细胞(**P<0.01)和白细胞细胞(***P<0.001)总数显著增加炎症因子TNF-α以及MIP-1γ表达增加(P<0.05)。结论 PSGL-1的缺失改变了小鼠细胞因子并影响了外周血的血细胞组成,MIP-1γ和TNF-α炎症因子上调,有可能影响了小鼠的免疫功能。

氟西汀结合眼针干预急性脑梗死患者急性期神经功能、血糖及PSGL-1水平的临床观察分析

目的:探讨采用氟西汀结合眼针干预对急性脑梗死患者神经功能、血糖及PSGL-1水平的影响,分析患者神经功能、血糖及PSGL-1缓解程度间相互关系。方法:病例均来自我院治疗的急性脑梗死患者153例,按随机对照原则分组,对照组72例采用在常规治疗的基础上,采用氟西汀干预治疗,研究组81例在采用在常规治疗的基础上,用氟西汀结合眼针干预治疗,根据脑血管病学术会议制定临床疗效评定标准评价临床效果,对比患者治疗前后PSGL-1、FPG、HbA1c水平及NIHSS评分,采用pearson相关分析治疗前后PSGL-1、FPG、HbA1c及NIHSS评分改善程度间的相关性。结果:虽然对照组治疗有效率84.72%低于研究组治疗有效率91.36%,但无差异(P>0.05);2组治疗前后PSGL-1、FPG、HbA1c水平及NIHSS评分均显著降低(P<0.01),2组治疗后PSGL-1、FPG、HbA1c水平及NIHSS评分无差异(P>0.05);所有患者治疗前后PSGL-1、FPG、HbA1c及NIHSS评分改善程度两两间均存在显著正相关(P<0.01);2组患者不良反应上无差异(P>0.05)。结论:急性脑梗死患者神经功能、血糖及PSGL-1水平关系密切,在氟西汀基础上采用眼针干预治疗,在降低血糖水平及缓解神经功能上效果不显著。

心痛方对冠心病合并颈动脉斑块痰瘀互结气郁证患者PS/PSGL-1等的影响

目的:通过观察心痛方对冠心病合并颈动脉斑块痰瘀互结气郁证患者PS、PSGL-1、CD40、CD40L及临床疗效的影响,探讨心痛方的的作用机制。方法:60例患者随机分入治疗组和对照组,每组30例。治疗组服用心痛方,对照组服用拜阿司匹灵、阿托伐他汀钙,疗程3个月。分别检测治疗前后患者血浆PS、PSGL-1、CD40、CD40L的表达,记录IMT、颈动脉Crouse积分、中医证候积分、ECG、综合临床疗效。结果:治疗组和对照组均能明显抑制PS、PSGL-1、CD40、CD40L的表达,降低IMT、Crouse积分和中医证候积分,改善心电图,提高综合临床疗效(P<0.01);治疗组在抑制CD40、CD40L的表达、降低Crouse积分与中医证候积分、提高综合疗效方面均明显优于对照组(P<0.01,P<0.05)。结论:心痛方能明显降低PS、PSGL-1、CD40、CD40L的表达,可能是通过抑制血小板-白细胞相互反应相关因子,从而取得良好的临床疗效。

心痛方对急性心肌缺血大鼠CD40/CD40L、PS/PSGL-1的影响

目的:观察心痛方对急性心肌缺血大鼠血浆中CD40/CD40L、PS/PSGL-1表达及大鼠心肌梗死面积的影响。方法:40只SD大鼠,随机分成假手术组、模型组、心痛方组、欣康对照组,采用结扎法制备心肌缺血模型,NBT染色法测定心肌梗死面积,酶联免疫法检测血浆中CD40/CD40L、PS/PSGL-1的表达。结果:与模型组相比,心痛方和欣康均缩小心肌梗死面积(P<0.01),且心痛方组较欣康组更有优势(P<0.01)。心痛方组、欣康组及模型组造模后分别与假手术组相比,血浆中CD40/CD40L、PS/PSGL-1均明显增高(P<0.01);用药后心痛方组、欣康组分别与模型组相比,CD40/CD40L、PS/PSGL-1的表达均明显降低(P<0.05);心痛方与欣康在抑制CD40/CD40L、PS/PSGL-1表达方面作用相近。结论:心痛方能抑制急性心肌缺血大鼠血浆CD40/CD40L及PS/PSGL-1的表达、缩小大鼠心肌梗死面积。

PSGL-1在Apc^(Min/+)小鼠肠道肿瘤发生中的作用

目的研究P-选凝素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)在ApcMin/+小鼠肠道肿瘤中的作用。方法PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠和肠道肿瘤模型ApcMin/+小鼠杂交后,统计ApcMin/+小鼠与(ApcMin/+;PSGL-1-/-)杂交小鼠小肠及大肠肿瘤的数目和总负荷,观测其肠道肿瘤的发生变化。结果相比ApcMin/+小鼠,(ApcMin/+;PSGL-1-/-)杂交小鼠在18周龄时肠道肿瘤数目与总负荷有明显增加。结论 PSGL-1的缺失促进了ApcMin/+小鼠肠道肿瘤的发生,PSGL-1在人类肠道肿瘤中可能发挥着抑制肿瘤形成的作用。

CD44增强E-选择素与PSGL-1配体互作的结构基础

目的选择素-体相互作用在炎症级联反应过程中起重要作用。E-选择素由于具有多种配体,而且不同配体间存在协同作用,从而导致其在炎症级联反应过程中的作用更为复杂。PSGL-1、CD44作为E-选择素的典型配体,二者间存在协同作用,但机制尚不清楚,且E-选择素-D44相互作用的微观结构特征也尚无报道。

P选择子和PSGL-1之弯曲刚度的热分析方法

在炎症和凝血过程中,白细胞在血管壁各处是否顺利滚过或受阻停滞,受到P选择子和PSGL-1之间相互作用的调制.在应力环境之中,P选择子和PSGL-1分子均将承受环境荷载的作用而变形,进而可能影响其功能与其相互作用.因而,研究这些分子的刚度及其隐含着的功能信息,具有重要意义.本文中,我们通过建立了蛋白分子在环境分子布朗运动所引起之热激励条件下的动力学模型,分析电子显微镜图像所显示的P选择子与其配体(PSGL-1)的几何形态特征,从而提取了P选择蛋白和PSGL-1分子弯曲刚度的信息.

PSGL-1通过炎症反应在小鼠盐敏感性高血压中的作用机制研究

目的探讨PSGL-1在小鼠盐敏感性高血压发生发展中的作用及分子机制。方法通过对PSGL-1基因敲除(PSGL-1^(-/-))小鼠及其野生型(PSGL-1+/+)对照小鼠,分别给予高盐(6%Na Cl)和正常盐(0.4%Na Cl)喂养3个月,麻醉状态下颈总动脉插管测量小鼠血压,利用流式细胞术、免疫组化和免疫印迹方法检测小鼠组织中炎症反应和肾脏损伤情况。结果与正常盐饮食小鼠比较,PSGL-1+/+小鼠高盐饮食3个月后血压明显升高,同时伴有皮肤和主动脉组织炎症细胞的浸润及肾脏炎症因子(IL-6,IL-1β,TNF-α)的表达增加,以及肾脏损伤的标示蛋白结缔组织生长因子(CTGF)表达量增加。而PSGL-1^(-/-)小鼠高盐饮食后血压无明显变化,肾脏组织也没有出现明显的炎症细胞浸润以及炎症因子和CTGF表达的增加。结论 PSGL-1通过调节机体炎症反应在高盐诱导的小鼠血压升高和肾脏损伤发生发展过程中具有重要作用。

PSGL-1缺失导致MDSCs上调

目的 P-选凝素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)主要特异性表达在白细胞上,我们的研究PSGL-1缺失在小鼠体内脾脏、骨髓中MDSCs的变化。方法利用我们实验室现有的PSGL-1-/-小鼠进行试验,经过鉴定后,PSGL-1-/-后代小鼠;利用流式细胞术检测C57和PSGL-1-/-小鼠脾脏、骨髓中Gr-1和CD11b阳性细胞的变化。结果与对照组C57小鼠相比,PSGL-1-/-基因工程小鼠MDSCs在脾脏、骨髓中显著上调(P<0.001),结论 PSGL-1的缺失导致小鼠脾脏、骨髓中MDSCs升高。

Rip1-Tag2;PSGL-1^(-/-)小鼠模型的构建

目的构建Rip1-Tag2;PSGL-1-/-小鼠模型。方法将Rip1-Tag2小鼠与P-选择素糖蛋白配体敲除(PSGL-1 KO)小鼠杂交,剪尾提DNA后用PCR法检测小鼠的基因型。结果 Rip1-Tag2小鼠与PSGL-1KO小鼠杂交3代后,Rip1-Tag2;PSGL-1-/-小鼠模型构建成功。结论将Rip1-Tag2小鼠与PSGL-1 KO小鼠杂交3代后成功建立了Rip1-Tag2;PSGL-1-/-小鼠模型,并进行繁育。

流体条件下PSGL-1介导的白细胞β2整合素的激活

目的β2整合素的激活,是导致白细胞稳定黏附并启动后续炎症反应过程的关键事件。白细胞表面β2整合素活化过度或不足,对应地将引起白细胞炎症反应过激或导致白细胞免疫功能缺失。已报道的经由PSGL-1介导的白细胞表面β2整合素活化,需要90 s左右,与循环白细胞可以及时稳定黏附到血管损伤部位这一现象相悖。回答这一问题。

人体多组织器官EV 71病毒受体SCARB 2和PSGL-1的分布特点

目的探讨人体多组织器官中EV71病毒受体SCARB2和PSGL-1的分布特点及其意义。方法应用免疫组织化学法检测中枢神经、呼吸道、肠道、肝脏、脾脏、心脏组织EV71病毒受体SCARB2和PSGL-1的表达。结果 SCARB2在中枢神经的大脑、小脑、脑干,呼吸道的喉部、气管、支气管、细支气管、肺泡细胞、巨噬细胞以及肠道组织中呈阳性分布,肝脏呈弱阳性或阴性,脾脏、心脏则为阴性,SCARB2受体在中枢神经、呼吸道和肠道的分布明显高于肝脏、脾脏、心脏(P<0.05)。PSGL-1在中枢神经的大脑、小脑、脑干,呼吸道的喉部呈阳性分布,呼吸道的气管、支气管、肠道呈少量阳性分布,而肺泡细胞阴性,肝脏、脾脏、心脏为阴性或仅极少量表达阳性。PSGL-1受体在中枢神经系统的分布明显高于呼吸道、肠道、肝脏、脾脏、心脏(P<0.05),PSGL-1受体在呼吸道、肠道的分布明显高于肝脏、脾脏、心脏(P<0.05)。结论在中枢神经、呼吸道和肠道表达的EV71病毒受体SCARB2和/或PSGL-1,提示上述组织器官是EV71感染的主要部位。

利用光镊技术研究力作用下P-selectin/PSGL-1键的解离

采用光镊技术研究力作用下P-selectin/PSGL-1键的解离,得到了在较小的加载率(＜25 pN/s)下键解离的断裂力分布,发现键的最可几断裂力随加载率增加而增加;测量了较低的力范围(＜30 pN)内P-selectin/PSGL-1键解离的寿命,发现键的寿命随作用力增加而下降,呈现一个从"滑移键"到"逆锁键"的过渡相.研究结论深化了力作用下受体/配体键的认识.

PSGL-1^(+/-);IL-2^(-/-)小鼠模型的构建

目的构建PSGL-1+/-;IL-2-/-小鼠模型。方法将白介素2敲除(IL-2 KO)小鼠与P-选择素糖蛋白配体-1敲除(PSGL-1 KO)小鼠杂交,剪尾提DNA后用PCR法检测小鼠的基因型。结果 IL-2 KO小鼠与PSGL-1 KO小鼠杂交三代后,PSGL-1+/-;IL-2-/-小鼠模型构建成功。结论将IL-2 KO小鼠与PSGL-1 KO小鼠杂交三代后,成功建立了PSGL-1+/-;IL-2-/-小鼠模型。

PSGL-1缺失对动脉粥样硬化LDLR^(-/-)鼠巨噬细胞脂质吞噬及代谢组的影响

目的采用病理学及代谢组学方法研究PSGL-1缺失对巨噬细胞脂质吞噬能力及代谢组的影响。方法提取小鼠原代腹腔巨噬细胞,进行油红O染色,采集样本的~1H NMR谱并运用多变量分析方法进行代谢特征的分析。结果 PSGL-1^(-/-);LDLR^(-/-)小鼠的腹腔巨噬细胞中脂质面积减少;与LDLR^(-/-)鼠比较,PSGL-1^(-/-);LDLR^(-/-)小鼠巨噬细胞代谢物中牛磺酸和三甲胺的含量上调,而脂质、乳酸、丙氨酸和琥珀酸盐含量降低。结论 PSGL-1缺失影响腹腔巨噬细胞吞噬脂质的功能,而且能够调控LDLR^(-/-)小鼠巨噬细胞的代谢状态。