PSP94-TNFαD11a质粒DNA注射体内表达规律

将带有目的基因PSP94 TNFαD11a的 pcDNA3 0质粒DNA ,以 5 0 μg/只剂量注射到 39只雄性昆明小鼠的股四头肌内 ,第 2、3、4、5、10、15、2 0、2 5天分别摘眼球取血收集血清 ,每组 3只动物血清混合。同时取注射部位骨骼肌 ,研磨后离心取上清。用ELSIA方法检测血清和骨骼肌上清中融合蛋白的表达 ,观察不同时间的蛋白表达水平。提取 14天骨骼肌组织的总RNA ,进行RT PCR分析目的基因mRNA的表达水平。结果 ,在裸质粒注射后 9天可检出目的蛋白的表达 ,第 14天出现表达高峰 ,观察至 2 5天仍可检察到蛋白表达。

人PSP94全长cDNA的获得及PSP94-TNF~Δ融合蛋白的构建

利用ＲＴ－ＰＣＲ从人肥大前列腺组织钓取９４个氨基酸的人前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）全长ｃＤＮＡ，序列分析结果与文献报道的完全一致．将ＰＳＰ９４成熟肽与人ＴＮＦα衍生物（ＴＮＦΔ）通过Ｌｉｎｋｅｒ－ＳＡＰＧＴＰ在基因水平上融合成５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ，融合基因ＤＮＡ序列分析结果与设计的相符合．５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ在大肠杆菌中表达产物分子量约为３１ｋＤ，表达量约占菌体总蛋白量的３５％．以Ｌ９２９细胞和人前列腺癌细胞株ＰＣ－３为靶细胞进行细胞毒分析结果表明，５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ融合蛋白既具有ＴＮＦ的细胞毒活性。

PSP94-TNFα D11a融合基因直接注射的抗肿瘤作用

目的 探讨人PSP94和肿瘤坏死因子α衍生物 11a(TNFαD11a)融合基因 (PSP94 TNFαD11a)直接注射的抗肿瘤作用。 方法 人前列腺癌裸鼠模型肌肉注射含PSP94 TNFαD11a融合基因的pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA ,剂量为 5 0 μg/只 ,同时设 pcDNA PSP94、pcDNA3 .0空载体、生理盐水和环磷酰胺对照组。注射后第 2 0d处死动物 ,称瘤重计算抑瘤率。 结果 pcD NA PSP94 TNFαD11a组抑瘤率为 2 3% ,为 pcDNA PSP94组的 1.4倍。以同样方式给药 ,pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA对小鼠Lewis肺癌的抑制率为 31% ,为pcDNA TNFαD11a组的 2 .1倍。结论 pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA的直接注射具有抗肿瘤作用。