水牛NONO和PSPC1基因对成纤维细胞抗衰老的作用研究

旁粒相关基因NONO和PSPC1在DNA损伤修复、转录调控、细胞增殖等方面发挥重要作用.该研究旨在克隆水牛NONO,PSPC1基因并对其进行序列分析,探讨其对水牛胎儿成纤维细胞增殖及衰老的影响.首先扩增水牛NONO,PSPC1编码区序列并构建其过表达载体,对不同代数水牛胎儿成纤维细胞中旁粒相关基因的表达进行检测.构建细胞衰老模型,将过表达NONO,PSPC1载体转染第10代成纤维细胞,培养至15代进行细胞增殖、 β-半乳糖苷酶、细胞衰老和凋亡相关基因表达分析.分别得到1 424 bp和1 574 bp的水牛NONO和PSPC1编码区序列,生物信息学分析发现水牛NONO基因与黄牛和人的序列相似度分别为98.9%和91.2%;水牛PSPC1基因与黄牛、绵羊、山羊和人序列相似度分别为99.5%,86.0%,98.8%,89.3%.随着细胞培养代数增加,旁粒相关基因表达降低.过表达转染试验结果发现:与空白组和阴性对照组相比,2个试验组细胞增殖速度变快,β-Gal细胞阳性率和P21,P16,Bax表达均显著下降(p<0.05);2个试验组间相比,上调PSPC1表达后细胞增殖速度更快,β-Gal细胞阳性率和P21,P16,Bax表达均显著降低(p<0.05).上调NONO和PSPC1基因表达能够促进细胞增殖,降低凋亡相关基因的表达进而延缓细胞衰老.