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OsKAT3 RNAi转基因水稻植株的构建
被引量:
1
1
作者
王莉
黄亚楠
+1 位作者
郭满园
苏彦华
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期979-985,共7页
[目的]本研究以水稻‘日本晴’为遗传转化受体材料,利用RNAi技术对水稻气孔调控型钾吸收通道OsKAT3进行功能研究。[方法]通过将OsKAT3与拟南芥和水稻中的KAT类钾通道进行同源性比对,找到编码此蛋白基因C端的一段特异区域,并用于OsKAT3 R...
[目的]本研究以水稻‘日本晴’为遗传转化受体材料,利用RNAi技术对水稻气孔调控型钾吸收通道OsKAT3进行功能研究。[方法]通过将OsKAT3与拟南芥和水稻中的KAT类钾通道进行同源性比对,找到编码此蛋白基因C端的一段特异区域,并用于OsKAT3 RNAi表达载体的构建。设计含有相应酶切位点的引物扩增该特异片段,以OsKAT3作为模板进行RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段的PCR扩增。经菌落PCR鉴定挑选阳性克隆后送测序,测序结果表明:RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段均已正确连接到p MD19-T载体上,分别利用SacⅠ/SpeⅠ和Bam HⅠ/KpnⅠ酶切RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段,并将其连接到含有发夹结构的质粒p TCK303上,然后采用农杆菌介导的方法将经酶切验证正确的OsKAT3RNAi表达载体转化到水稻‘日本晴’中。[结果]以表达载体p TCK303多克隆位点两侧的通用引物进行转基因阳性植株鉴定,PCR结果显示OsKAT3顺式和反式特异片段已成功整合到再生水稻植株基因组中,定量PCR结果也证实RNAi转基因植株中OsKAT3基因表达被成功抑制。[结论]通过RNAi技术成功沉默了OsKAT3基因并获得T0代种子,为后续研究该基因功能奠定了一定基础。
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关键词
水稻
OsKAT3
RNAI
ptck303
载体
转基因植株
下载PDF
职称材料
甘蔗锌指蛋白基因ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的转化
被引量:
1
2
作者
李晓君
王俊刚
+1 位作者
武媛丽
张树珍
《热带作物学报》
CSCD
2011年第6期993-997,共5页
植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白参与了逆境应答,为研究甘蔗A20/AN1型锌指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育种方面的价值,本研究通过构建ShSAP1基因的RNAi载体并进行甘蔗的遗传转化,以期通过反向遗传学进行ShSAP1的功能分析。将Sh...
植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白参与了逆境应答,为研究甘蔗A20/AN1型锌指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育种方面的价值,本研究通过构建ShSAP1基因的RNAi载体并进行甘蔗的遗传转化,以期通过反向遗传学进行ShSAP1的功能分析。将ShSAP1锌指编码区片段分别以正向和反向插入到中间载体pTCK303内含子的两侧,构建中间载体pTCK-iShSAP1,而后把干扰片段连入pCAMBIA-GUS中,获得RNAi表达载体pCAMBIA-iShSAP1,将该载体转导根癌农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法侵染甘蔗胚性愈伤组织,并对部分转化幼苗进行了初步的PCR鉴定。经过限制性内切酶分析和测序验证,RNAi载体pCAMBIA-iShSAP1构建成功;转化幼苗经PPT抗性筛选后,获得了58株抗性植株,对抗性幼苗进行了Bar基因的PCR检测,得到6株PCR阳性植株。本研究完成了ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的遗传转化,为ShSAP1的功能研究打下了一定的基础。
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关键词
ShSAP1
ptck303
载体
RNA干扰
基因功能
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职称材料
亲环素AtCYP1 RNA干涉载体的构建及对拟南芥发育的影响
3
作者
范继业
张静
+2 位作者
翟少华
武明明
张滨
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期85-89,共5页
根据拟南芥AtCYP1基因序列设计特异引物,以拟南芥总DNA为模板,扩增AtCYP1基因中344 bp转录本,插入表达载体PTCK303,构建目的基因RNA干扰载体Ubi::AtCYP1i。利用改良的农杆菌浸染技术获得拟南芥RNAi转基因株系,RT-PCR分析结果表明转基因...
根据拟南芥AtCYP1基因序列设计特异引物,以拟南芥总DNA为模板,扩增AtCYP1基因中344 bp转录本,插入表达载体PTCK303,构建目的基因RNA干扰载体Ubi::AtCYP1i。利用改良的农杆菌浸染技术获得拟南芥RNAi转基因株系,RT-PCR分析结果表明转基因株系中AtCYP1基因的表达量低于野生型,表型观察结果表明RNAi转基因纯合株系抽苔时间比野生型晚3.32 d,抽苔叶片数较野生型多2.49片,其开花时间、结出第一个种荚的时间、株高等方面也与野生型存在明显差异。此结果说明AtCYP1可能参与了拟南芥的早花发育过程,为进一步研究其在植物生长发育中的功能奠定了基础。
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关键词
AtCYP1
RNA干扰
ptck303
早花
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职称材料
题名
OsKAT3 RNAi转基因水稻植株的构建
被引量:
1
1
作者
王莉
黄亚楠
郭满园
苏彦华
机构
中国科学院大学
中国科学院南京土壤研究所土壤与农业可持续发展国家重点实验室
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期979-985,共7页
基金
中国科学院战略性先导科技专项(B类)(XDB15030202)
文摘
[目的]本研究以水稻‘日本晴’为遗传转化受体材料,利用RNAi技术对水稻气孔调控型钾吸收通道OsKAT3进行功能研究。[方法]通过将OsKAT3与拟南芥和水稻中的KAT类钾通道进行同源性比对,找到编码此蛋白基因C端的一段特异区域,并用于OsKAT3 RNAi表达载体的构建。设计含有相应酶切位点的引物扩增该特异片段,以OsKAT3作为模板进行RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段的PCR扩增。经菌落PCR鉴定挑选阳性克隆后送测序,测序结果表明:RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段均已正确连接到p MD19-T载体上,分别利用SacⅠ/SpeⅠ和Bam HⅠ/KpnⅠ酶切RNAi-OsKAT3顺式和反式目的片段,并将其连接到含有发夹结构的质粒p TCK303上,然后采用农杆菌介导的方法将经酶切验证正确的OsKAT3RNAi表达载体转化到水稻‘日本晴’中。[结果]以表达载体p TCK303多克隆位点两侧的通用引物进行转基因阳性植株鉴定,PCR结果显示OsKAT3顺式和反式特异片段已成功整合到再生水稻植株基因组中,定量PCR结果也证实RNAi转基因植株中OsKAT3基因表达被成功抑制。[结论]通过RNAi技术成功沉默了OsKAT3基因并获得T0代种子,为后续研究该基因功能奠定了一定基础。
关键词
水稻
OsKAT3
RNAI
ptck303
载体
转基因植株
Keywords
rice
OsKAT3
RNAi
ptck303
vector
transgenic plants
分类号
S336 [农业科学—作物遗传育种]
下载PDF
职称材料
题名
甘蔗锌指蛋白基因ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的转化
被引量:
1
2
作者
李晓君
王俊刚
武媛丽
张树珍
机构
海南大学农学院
中国热带农业科学院热带生物技术研究所:甘蔗研究中心
出处
《热带作物学报》
CSCD
2011年第6期993-997,共5页
基金
现代农业产业技术体系建设专项基金项目(No.nycytx-24)
中央级公益科研院所基本科研业务费专项资金项目(No.ITBBZD1023)
文摘
植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白参与了逆境应答,为研究甘蔗A20/AN1型锌指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育种方面的价值,本研究通过构建ShSAP1基因的RNAi载体并进行甘蔗的遗传转化,以期通过反向遗传学进行ShSAP1的功能分析。将ShSAP1锌指编码区片段分别以正向和反向插入到中间载体pTCK303内含子的两侧,构建中间载体pTCK-iShSAP1,而后把干扰片段连入pCAMBIA-GUS中,获得RNAi表达载体pCAMBIA-iShSAP1,将该载体转导根癌农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法侵染甘蔗胚性愈伤组织,并对部分转化幼苗进行了初步的PCR鉴定。经过限制性内切酶分析和测序验证,RNAi载体pCAMBIA-iShSAP1构建成功;转化幼苗经PPT抗性筛选后,获得了58株抗性植株,对抗性幼苗进行了Bar基因的PCR检测,得到6株PCR阳性植株。本研究完成了ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的遗传转化,为ShSAP1的功能研究打下了一定的基础。
关键词
ShSAP1
ptck303
载体
RNA干扰
基因功能
Keywords
ShSAP1
ptck303
Vector, RNA
Gene function
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
S566.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
亲环素AtCYP1 RNA干涉载体的构建及对拟南芥发育的影响
3
作者
范继业
张静
翟少华
武明明
张滨
机构
河北化工医药职业技术学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期85-89,共5页
基金
河北省自然科学基金项目(C2008000171)
文摘
根据拟南芥AtCYP1基因序列设计特异引物,以拟南芥总DNA为模板,扩增AtCYP1基因中344 bp转录本,插入表达载体PTCK303,构建目的基因RNA干扰载体Ubi::AtCYP1i。利用改良的农杆菌浸染技术获得拟南芥RNAi转基因株系,RT-PCR分析结果表明转基因株系中AtCYP1基因的表达量低于野生型,表型观察结果表明RNAi转基因纯合株系抽苔时间比野生型晚3.32 d,抽苔叶片数较野生型多2.49片,其开花时间、结出第一个种荚的时间、株高等方面也与野生型存在明显差异。此结果说明AtCYP1可能参与了拟南芥的早花发育过程,为进一步研究其在植物生长发育中的功能奠定了基础。
关键词
AtCYP1
RNA干扰
ptck303
早花
Keywords
AtCYP1 RNAi
ptck303
Early flowering
分类号
Q943 [生物学—植物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
OsKAT3 RNAi转基因水稻植株的构建
王莉
黄亚楠
郭满园
苏彦华
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
下载PDF
职称材料
2
甘蔗锌指蛋白基因ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的转化
李晓君
王俊刚
武媛丽
张树珍
《热带作物学报》
CSCD
2011
1
下载PDF
职称材料
3
亲环素AtCYP1 RNA干涉载体的构建及对拟南芥发育的影响
范继业
张静
翟少华
武明明
张滨
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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