肺腺癌中PTEN和6KDMB的表达与临床病理特征的关系

目的观察PTEN和6KDMB在肺浸润性腺癌中的表达,分析两者与多个临床病理参数的关系及相关性,加深对肺腺癌发病机制的认识。方法利用生物信息学分析手段评估PTEN和6KDMB mRNA在肺腺癌及正常肺组织中的表达情况。用免疫组织化学SP法检测74例肺浸润性腺癌组织及相应的正常肺组织中PTEN和6KDMB蛋白的表达情况,分析其与肺浸润性腺癌多个临床病理参数的关系,用Spearman法分析两者的相关性。结果PTEN和6KDMB mRNA在肺浸润性腺癌组织中的表达水平均较正常肺组织下调;59例配对肺腺癌及正常肺组织分析结果显示6KDMB mRNA在肺腺癌组织中表达水平较正常肺组织下调(P<0.05)。免疫组化结果显示浸润性肺腺癌中PTEN蛋白表达率(33.78%,25/74)显著低于正常肺组织(54.05%,40/74),6KDMB蛋白的表达率(72.97%,54/74)显著高于正常肺组织(21.62%,16/74)(P<0.05)。在74例浸润性肺腺癌中,PTEN在高分化、无气道播撒及TNM分期Ⅰ+Ⅱ表达率较高(均P<0.05)。6KDMB在淋巴结有转移和TNM分期Ⅲ+Ⅳ表达率较高(P<0.05)。74例肺浸润性腺癌中PTEN表达越低,6KDMB的表达越高,Spearman相关分析结果显示两者呈显著负相关(R_(s)=0.53,P<0.001)。结论肺浸润性腺癌中PTEN和6KDMB蛋白与侵袭和转移相关,两者呈显著负相关性,对PTEN和6KDMB在肺浸润性腺癌中的表达规律及相关性的研究,将为分子生物机制进一步研究提供一定的理论依据。

PTEN基因突变Cowden综合征相关单侧多中心乳腺癌及同时性、异时性双侧乳腺癌3例

10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin-homolog deleted on chromosome 10,PTEN)是重要的抑癌基因,其突变可引发PTEN错构瘤肿瘤综合征(PTEN hamartoma tumor syndrome,PHTS),常被称为Cowden综合征,是较为罕见的遗传性肿瘤综合征,其与早发性、多发性乳腺癌高度相关。本文报道3例PTEN基因突变相关单侧多中心乳腺癌及同时性、异时性双侧乳腺癌患者,并总结其临床表现、病理特征、诊治经验及随访情况,旨在为临床医生更好地诊治PTEN基因突变相关乳腺癌及Cowden综合征人群提供借鉴。

基于PTEN/mTOR/STAT3通路探讨夹脊电针对脊髓损伤大鼠自噬的影响

目的观察夹脊电针对脊髓损伤(spinal and injury,SCI)大鼠第10号染色体上缺失的磷酸酶与同源张力蛋白(phosphatase and tensinhomolog,PTEN)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/信号转导和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路相关因子(p-PTEN、p-mTOR、p-STAT3)、自噬相关因子(LC3-Ⅱ、p62、Atg5)以及星形胶质细胞中星形胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)共定位信号的表达情况,探讨夹脊电针调控SCI细胞自噬促进神经功能恢复的可能机制,为临床运用夹脊电针治疗SCI提供新的思路和分子生物学理论依据。方法将72只雄性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、夹脊电针(EA)组、抑制剂+夹脊电针(bpV)组,每组按照造模后3、7和14 d治疗时间点分为3个亚组,每个亚组6只大鼠。采用Allen’s法建立SCI大鼠模型。EA组予双侧胸(T)9、T11夹脊穴,电针30 min,强度1 mA,密波(100 Hz),1次/d,分别连续治疗3、7、14 d。bpV组在电针治疗前10 min注射PTEN通路抑制剂bpV(HOpic),200μL/kg,1次/d,分别连续治疗3、7、14 d。采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分观察并比较各组大鼠后肢运动功能;HE染色观察各组大鼠脊髓组织的病理形态学变化;Nissl染色观察各组大鼠脊髓组织前角运动神经元的形态和数量;IHC检测各组大鼠脊髓组织p-PTEN、p-mTOR、p-STAT3、LC3-Ⅱ、p62、Atg5的免疫组化染色累积光密度值(imaging object definition,IOD)值;WB检测各组大鼠p-PTEN、p-mTOR、p-STAT3蛋白相对表达量;IF检测脊髓组织星形胶质细胞GFAP、LC3共定位情况。结果大鼠行为学检测结果示:与Model组比,在3、7、14 d时,EA组、bpV组BBB评分均增高(P<0.05);HE结果示:Model组脊髓组织出现大量内含片状出血以及坏死组织的空腔,神经细胞松散排列,3 d后EA组脊髓组织结构逐渐规整、空泡逐渐减少、神经元数量增加;Nissl染色结果示:与Sham组比,Model组神经元染色较浅,数量明显降低,EA组神经元染色较深,数量增多;IHC结果示:与Model组比,EA组p-PTEN、p-mTOR、p-STAT3的IOD值在3 d时明显降低(P<0.01),在7、14 d时明显增高(P<0.01);与Model组比,EA组在3 d时LC3-Ⅱ和Atg5显著升高,p62显著降低(P<0.01),在7、14 d时,LC3-Ⅱ和Atg5显著降低,p62显著增高(P<0.01);与Model组比,bpV组在3、7、14 d时LC3-Ⅱ、Atg5和p62的IOD值均降低(P<0.05);与EA组比,在3、7 d时,bpV组LC3-Ⅱ和Atg5表达均降低,p62增高(P<0.01),在14 d时,LC3-Ⅱ和Atg5降低,p62增高(P<0.05);WB结果示:与Model组相比,3 d时,EA组LC3-Ⅱ和Atg5表达显著升高,p62显著降低(P<0.01);在7、14 d时,LC3-Ⅱ和Atg5显著降低,p62显著增高(P<0.01);与Model组相比,在3、7、14 d时,bpV组LC3-Ⅱ、Atg5表达均降低,p62表达增高(P<0.05);与EA组比,在3、7 d时,bpV组LC3-Ⅱ表达较低,p62表达较高(P<0.01);在14 d时,LC3-Ⅱ明显增高(P<0.05)、Atg5明显增高,p62明显降低(P<0.01)。IF结果示:在3、7、14 d时,Model组有明显共定位信号,阳性细胞数与时间成正比。EA组的共定位阳性细胞数较Model组减少。bpV组阳性细胞数较EA组减少。结论夹脊电针能明显促进SCI大鼠后肢运动功能恢复,其机制与调控PTEN/mTOR/STAT3通路介导的自噬和星形胶质细胞生长有关。

山竹子素通过调控PTEN在宫颈癌中发挥抑癌作用

目的:探讨山竹子素是否通过调控PTEN在宫颈癌中发挥抑癌作用。方法:Immunoblotting检测PTEN表达水平。利用CRISPR/Cas9技术建立PTEN敲除的宫颈癌细胞模型。CCK-8和EdU染色方法检测细胞生长和增殖。流式细胞术检测细胞凋亡水平。划痕实验检测细胞迁移。Transwell实验检测细胞侵袭。利用PTEN敲除宫颈癌细胞来构建荷瘤小鼠模型,检测山竹子素对肿瘤形成和生长的影响。免疫组化检测移植瘤组织中PTEN表达和Ki-67增殖水平。结果:山竹子素可以显著上调宫颈癌细胞中PTEN的蛋白表达水平(P<0.01)。转染Cas9-PTEN质粒至宫颈癌细胞中可以显著下调PTEN表达(P<0.01)。在野生型宫颈癌细胞中,山竹子素可以显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,同时诱导细胞凋亡(P<0.01)。在PTEN敲除的宫颈癌细胞中,山竹子素则对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,无明显影响(P>0.05)。PTEN敲除可阻断山竹子素对裸鼠体内异种移植瘤生长的抑制作用。结论:山竹子素通过调控PTEN在宫颈癌中发挥抑癌作用。

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用研究

目的探讨多囊卵巢综合征患者(polycystic ovary syndrome,PCOS)卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用。方法选取2020年10月至2022年3月在淮安市妇幼保健院生殖医学科行IVF/ICSI治疗的20例PCOS患者作为研究对象即为PCOS组,选取行IVF/ICSI治疗的输卵管因素或男方因素患者20例作为对照组。收集两组患者颗粒细胞,并分析颗粒细胞miR-144-3p的表达情况。利用Tar-getScan数据库预测miR-144-3p的靶基因,并采用双荧光素酶活性检测验证靶基因。复苏人卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,KGN),转染并建立miR-144-3p模拟物组、模拟物阴性对照组、miR-144-3p抑制物组、抑制物阴性对照组、si-PTEN和siRNA-NC组。采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡情况,RT-PCR及蛋白质印迹技术检测颗粒细胞中miR-144-3p、PTEN mRNA及蛋白的表达情况。结果RT-PCR结果显示P-COS组miR-144-3p表达水平显著低于对照组(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示miR-144-3p mimic组的颗粒细胞凋亡百分比显著低于mimic-NC组(P<0.05),miR-144-3p inhibitor组颗粒细胞凋亡水平显著高于inhibitor-NC组(P<0.05)。生物信息学预测miR-144-3p的靶基因为PTEN,荧光素酶结合实验证实miR-144-3p能特异结合PTEN-3′UTR并下调PTEN基因表达。RT-PCR测定结果显示PCOS组PTEN mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),且与miR-144-3p表达水平呈负相关(r=-0.91,P<0.001)。qRT-PCR及蛋白质印迹检测结果显示与mimic NC组相比,miR-144-3p mimic组中PTEN mRNA及蛋白表达量显著低于mimic NC组(P<0.05)。miR-144-3p inhibitor组PTEN mRNA及蛋白表达量显著高于inhibitor NC组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示si-PTEN组颗粒细胞凋亡水平显著低于siRNA-NC组(P<0.05),而miR-144-3p inhibitor+si-PTEN组的颗粒细胞凋亡比例显著低于miR-144-3p inhibitor组(P<0.05)。结论PCOS患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p表达水平显著降低,而PTEN基因表达水平显著增高,进而促进PCOS患者卵巢颗粒细胞凋亡。

PTEN调控Nrf2/HO-1通路介导的自噬在主动脉中层退行性变中的作用

目的探讨磷酸酶张力蛋白同源物(phosphatase and tension homolog,PTEN)在主动脉中层退行性变(aortic medial degeneration,AMD)中的作用机制。方法3周龄C57BL/6J小鼠随机数字表法分为对照组、AMD组、平滑肌细胞特异性敲除PTEN小鼠(smooth muscle cell specific deletion of PTEN,smPTEN)构建AMD模型组(smPTEN+AMD组),PTEN敲除+AMD+自噬抑制剂(3-Methyladenin,3-MA)组(smPTEN+AMD+3-MA组),PTEN敲除+AMD+Nrf2沉默组(smPTEN+AMD+shNrf2组)。苏木精-伊红染色观察血管壁结构,弹性纤维(elastica van gieson,EVG)染色检测弹性纤维,免疫荧光染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS),酶链免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测炎性细胞因子,Western blot法检测自噬蛋白及Nrf2/HO-1通路,电镜观察自噬小体。结果与对照组比较,AMD组血管壁增厚且瘤样扩张,ROS(活性氧,reactive oxygen species)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、自噬小体、PTEN增多,p62(SQSTM1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)降低(P<0.05);与AMD组比较,smPTEN+AMD组血管壁仅增厚,ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、自噬小体、PTEN降低,p62、Nrf2、HO-1增多(P<0.05);与smPTEN+AMD组比较,smPTEN+AMD+3-MA组血管壁结构较完整,ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、自噬小体减少,p62、Nrf2、HO-1增多(P<0.05),PTEN无显著变化(P>0.05);而smPTEN+AMD+shNrf2组血管壁增厚且假腔形成,ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、自噬小体增多,p62、Nrf2、HO-1降低(P<0.05),PTEN无显著变化(P>0.05)。结论PTEN通过抑制Nrf2/HO-1通路激活自噬、加重氧化应激和炎性反应促进AMD。

肝细胞癌超声特征与病情严重程度及抑癌基因PTEN和Tg737表达的关系探究

目的探讨肝细胞癌(HCC)超声特征与病情严重程度及抑癌基因PTEN和Tg737表达的关系。方法选取2022年1月至2023年1月于我院确诊为HCC的患者102例作为HCC组,本院体检健康的70例志愿者作为健康组。对比两组超声造影参数[达峰时间(TIP)、峰值强度(PI)水平],采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肝细胞癌患者组织中PTEN、Tg737基因的表达,探讨HCC患者超声特征与病情严重程度、超声特征与抑癌基因PTEN、Tg737的关系。结果HCC组患者TTP小于健康组(P<0.05),PI水平大于健康组(P<0.05)。102例HCC患者中早期组42例,晚期组60例。早期组患者TTP大于晚期组(P<0.05),PI水平小于晚期组(P<0.05)。对比两组超声征象,结果显示:肿瘤最大直径、肿瘤边缘、肿瘤内部液化情况、肿瘤门脉内癌栓情况、肿瘤血供及淋巴结转移均与HCC患者病情严重程度密切相关(P<0.05),肿瘤的不同回声类型与HCC患者病情严重程度无明显关联(P>0.05)。早期组患者PTEN、Tg737均高于晚期组(P<0.05)。肿瘤最大直径≤3 cm、肿瘤边缘清晰、肿瘤内部液化坏死、肿瘤血供丰富HCC患者抑癌基因PTEN、Tg737表达水平均较高(P<0.05),肿瘤门脉内有癌栓、淋巴结转移患者抑癌基因PTEN、Tg737表达水平均低于肿瘤门脉内无癌栓、淋巴结未转移患者(P<0.05),不同肿瘤回声类型HCC患者抑癌基因PTEN、Tg737表达水平无显著差异(P>0.05)。结论超声特征与HCC患者病情严重程度、抑癌基因PTEN、Tg737表达水平之间有一定的关系,检测超声造影参数对诊断和评估HCC患者病情有一定的临床价值。

基于PTEN/PI3K/Akt信号通路探讨糖通饮对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨糖通饮对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞损伤的保护作用。方法高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)多次注射建立DN大鼠模型,并随机分为模型组、厄贝沙坦组(13.5mg/kg)和糖通饮低、中、高剂量组(930、1860、3720mg/kg),另设置正常组,各组灌胃给予相应剂量药物,每天1次,连续8周。检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、24h尿蛋白(24-hUP)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平,HE染色观察各组大鼠肾组织病理形态学改变,透射电子显微镜观察肾足细胞超微结构变化,RT-qPCR法检测肾组织PTEN、PI3K、Akt、nephrin、podocin、CD2APmRNA表达,Westernblot法检测肾组织PTEN、PI3K、Akt、p-Akt、nephrin、podocin、CD2AP蛋白表达。结果与模型组比较,糖通饮各剂量组FBG、24-hUP、Scr、BUN水平降低(P<0.05,P<0.01),肾组织病理形态和足细胞超微结构得到改善,PTEN、nephrin、podocin、CD2APmRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),p-Akt蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);糖通饮中、高剂量组PI3K、AktmRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论糖通饮对DN大鼠肾组织足细胞有保护作用,其机制可能与调节PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

靶向调控PTEN和PI3K对肾母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨靶向调控张力蛋白同源物(PTEN)和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)对肾母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法选取15例肾母细胞瘤患儿的术后肿瘤组织及癌旁正常组织,采用免疫印迹实验及实时荧光定量PCR方法检测组织中PTEN和PI3K蛋白及mRNA的表达水平;将肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞分为对照组(A组,转染NC siRNA及Flag空载体)、PTEN过表达组(B组,转染NC siRNA及Flag-PTEN表达载体)、PI3K敲低组(C组,转染siPI3K及Flag空载体)、联合靶向组(D组,转染siPI3K及Flag-PTEN)。采用免疫印迹实验检测各组转染24 h后SK-NEP-1细胞中PI3K、蛋白激酶A(AKT)及磷酸化蛋白激酶A(p-AKT)的表达水平;采用CCK-8实验检测干预第24、48、72小时时SK-NEP-1细胞增殖情况;采用流式细胞术分析各组SK-NEP-1细胞转染24 h后细胞凋亡率及细胞周期。结果与癌旁正常组织相比,肾母细胞瘤肿瘤组织中PI3K蛋白及mRNA表达水平均显著升高(t=22.862、7.098,P<0.05),PTEN蛋白及mRNA表达水平均显著降低(t=25.634、8.379,P<0.05);体外细胞实验结果显示,B、C、D组SK-NEP-1细胞中p-AKT蛋白水平明显低于A组(t=8.386~11.900,P<0.05);CCK-8实验显示,干预第48、72小时时,B、C、D组SK-NEP-1细胞吸光度值明显低于A组(t=5.163~8.647,P<0.05),干预第72小时时,D组SK-NEP-1细胞吸光度值明显低于B、C组(t=3.982、4.021,P<0.05);B、C、D组SK-NEP-1细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于A组(t=4.673~9.563,P<0.05),D组SK-NEP-1细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显高于B、C组(t=5.829~8.075,P<0.05);B、C、D组SK-NEP-1细胞G 1期细胞比例明显高于A组(t=7.518~14.747,P<0.05),S期细胞比例明显低于A组(t=8.029~13.451,P<0.05),D组SK-NEP-1细胞G 1期细胞比例明显高于B、C组(t=9.930、9.732,P<0.05),S期细胞比例明显低于B、C组(t=10.281、9.927,P<0.05)。结论相比于单一靶向PTEN或PI3K,联合靶向调控PTEN和PI3K可更显著抑制肾母细胞瘤细胞生长,促进肾母细胞瘤细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路、阻断细胞周期有关。

基于PTEN与JAK对PI3K/Akt信号通路的影响探讨加味小蓟饮子治疗急性放射性膀胱炎的作用机制

目的:探讨加味小蓟饮子治疗急性放射性膀胱炎的作用机制。方法:50只ICR小鼠随机分为空白组12只和造模组38只。采用X射线辐照仪造模,造模后随机取2只小鼠处死鉴定模型是否成功。将剩余造模组小鼠随机分为模型组、小蓟饮子组和加味小蓟饮子组各12只。空白组、模型组、小蓟饮子组、加味小蓟饮子组分别予0.9%氯化钠、0.9%氯化钠、小蓟饮子药液,加味小蓟饮子药液灌胃处理,每日1次,连续7 d。末次灌胃后24 h处死取材,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)含量。Western Blot法检测小鼠膀胱丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)、E钙粘着蛋白(E-Cadherin)、内皮素-1(ET-1)、JAK激酶(JAK)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)、Smad蛋白2(Smad2)、Smad蛋白3(Smad3)、转化生长因子β1(TGF-β1)、尿斑蛋白3(Upk3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白相对表达水平;实时荧光免疫定量-聚合酶链式反应法(RT-PCR)法检测小鼠膀胱微RNA-21(MicroRNA-21,miR-21)、PTEN、JAK、PI3K、AKT、Nrf2信使核糖核酸(mRNA)相对表达水平。结果:相较模型组,加味小蓟饮子组小鼠体内SOD、GSH-Px、T-AOC、AKT、E-Cadherin、JAK、Nrf2、PI3K、Upk3含量升高(P<0.05),MDA、ET-1、PTEN、Smad2、Smad3、TGF-β1、VEGF含量下降(P<0.05);与模型组和小蓟饮子组比较,加味小蓟饮子miR-21 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:加味小蓟饮子组可能通过上调miR-21表达,同调PTEN、JAK蛋白以激活下游PI3K/AKT/Nrf2信号通路治疗急性放射性膀胱炎。

血必净注射液通过PTEN/PI3K/Akt/mTOR信号通路对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨血必净注射液对肺缺血再灌注损伤的保护作用及其相关机制。方法:选择18只健康成年雄性大鼠,随机分为正常对照组(Sham组)、肺缺血再灌注组(LIR组)、血必净注射液组(XBJ组),采用开胸夹闭左肺门构建肺缺血再灌注损伤大鼠模型,苏木素—伊红染色观察各组大鼠肺组织病理学改变,检测各组大鼠肺组织湿/干重比(W/D)及肺组织炎症因子IL-1β、TNF-α水平,Western Blot检测各组肺组织PTEN、PI3K、Akt、mTOR、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62蛋白表达,qRT-PCR检测各组肺组织PTEN、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达。结果:血必净注射液可显著减轻肺缺血再灌注大鼠肺组织损伤,降低缺血再灌注大鼠肺组织W/D及IL-1β、TNF-α含量(P<0.05)。与Sham组相比,LIR组、XBJ组PTEN、PI3K、Akt、mTOR、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62表达均升高(P<0.05);与LIR组相比,XBJ组PTEN、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62表达降低(P<0.05),PI3K、Akt、mTOR表达升高(P<0.05)。与Sham组相比,LIR组、XBJ组PTEN、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达升高(P<0.05);与LIR组相比,XBJ组PTEN mRNA表达降低(P<0.05),PI3K、Akt、mTOR mRNA表达升高(P<0.05)。结论:血必净注射液可能通过抑制PTEN,激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制肺缺血再灌注损伤自噬水平,从而改善肺缺血再灌注损伤,达到保护肺组织的作用。

黄芪甲苷靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR通路激活肺泡细胞自噬治疗肺纤维化

目的探究黄芪甲苷-IV(Astragaloside IV,AS-IV)靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活自噬,抑制特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)发展进程的作用机制。方法通过气管注射10 mg·kg^(-1)博莱霉素造模小鼠IPF,分别以10、20、40 mg·kg^(-1) AS-IV及5 mg·kg^(-1)醋酸泼尼松连续治疗28 d。对肺样本进行伊红美蓝,马松染色,及透射电镜观察。实时荧光定量法(qRT-PCR)或蛋白免疫印迹法(Western blot)检测样本中miR-21、P62、Beclin^(-1)、LC3B、PTEN、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR等的表达。结果醋酸泼尼松及40 mg·kg^(-1) AS-IV可显著减少肺纤维组织增生与炎性细胞浸润,抑制嗜锇性板层小体变性,促进肺泡上皮细胞中自噬体的形成,显著上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例与Beclin^(-1)、PTEN蛋白表达,下调P62、miR-21表达,并抑制mTOR与AKT的磷酸化。但AS-IV治疗对PI3K表达无明显影响。结论AS-IV通过靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活,从而激活肺泡细胞自噬逆转IPF。

miR-21、PTEN与前列腺癌临床病理特征的相关性及其临床价值研究

前列腺癌发病机制主要与遗传因素有关,各种诱因导致的基因表达异常为其主要致病原因,且与前列腺癌临床病理特征及生存期密切相关,对前列腺癌诊疗的临床价值高于传统的前列腺特异性抗原(PSA)及影像学检查等[1-2]。miR-21可通过多种作用机制调控恶性肿瘤细胞迁移侵袭及上皮间质转化(EMT)等多种恶性生物学行为,在前列腺癌中表达显著增高,与临床病理特征存在关联[3]。磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)为具有调控细胞增殖、凋亡、侵袭及EMT功能的抑癌基因,与多种恶性肿瘤发病机制相关[4]。研究显示,PTEN基因在前列腺癌中的表达显著下调,可能在前列腺癌病情及预后评估中具有一定临床价值[5]。本研究旨在分析miR-21、PTEN表达与前列腺癌临床病理特征的相关性,并分析其临床应用价值,现报道如下。

非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜神经组织中miR-26a-5p/PTEN表达的影响

目的:研究非诺贝特对糖尿病小鼠视网膜神经损伤的保护作用并观察其对miR-26a-5p及其靶基因PTEN的影响。方法:构建糖尿病小鼠模型,并进行非诺贝特灌胃,H&E及透射电镜观察视网膜神经损伤情况,Real-time PCR检测视网膜组织中miR-26a-5p的表达,Western blotting检测同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在视网膜组织中的表达,并观察NF-κB及IL-1β的水平及视网膜神经上皮的结构变化。结果:与糖尿病组相比,非诺贝特治疗组糖尿病小鼠视网膜神经节细胞损伤及神经纤维层萎缩明显减轻,视网膜中miR-26a-5p表达升高,PTEN mRNA和蛋白表达下降,炎性介质NF-κB及IL-1βmRNA表达水平下降(P<0.05)。结论:非诺贝特通过上调miR-26a-5p抑制PTEN的表达,降低炎症因子水平,减轻视网膜细胞损伤,发挥糖尿病视网膜神经保护作用。

CD44v6和PTEN基因蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:探讨子宫内膜癌(endom etrial carcinom a,E C)组织中C D44v6和PTE N蛋白表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测50例E C组织C D44v6和PTE N蛋白表达。结果:在E C中C D44v6和PTE N表达阳性率分别为70.0%和38.0%,均与E C的组织学分级、临床分期和转移相关(P<0.05)。结论:C D44v6和PTE N表达对判断E C的恶性程度、预测肿瘤侵袭转移和评估预后的参考指标。

Hes1调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路的一种物理机制

基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究发状分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split 1,Hes1)调控蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)-鼠双微体2(Murine Double Minute2,MDM2)-抗癌基因p53(p53)-第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)通路的一种物理机制.研究发现,Hes1通过与PTEN结合抑制PTEN表达,并调控AKT信号.表明了Hes1蛋白的合成,以及Hes1与PTEN相互作用调控AKT-MDM2-p53-PTEN通路信号,将会有效地控制细胞结果.Hes1作为AKT-MDM2-p53-PTEN信号通路中上游调节的重要因素,还可以在一定程度上通过影响p53蛋白功能,改变p53对肿瘤的抑制性.理论结果可用于预测Notch通路信号异常诱导的致癌性,并进一步揭示了Notch信号通路影响细胞AKT-MDM2-p53-PTEN通路的激活机制.

PTEN基因致病性突变患儿51例病例系列报告

背景PTEN基因突变可引起多种综合征表型,目前在成人中的表型谱研究较多,在儿童中相关研究较少。目的总结PTEN基因突变患儿的基因型和临床表型及二者的相关性。设计病例系列报告。方法纳入2016年1月1日至2023年1月31日复旦大学附属儿科医院分子医学中心经高通量测序发现有PTEN基因突变,且致病性评级为致病/可能致病的患儿,采集其临床特征和基因检测结果。主要结局指标临床表型与PTEN基因突变的关联。结果纳入51例确诊为PTEN基因致病性突变的患儿,男33例,基因检测时中位年龄为2岁(1天至13岁),中位随访年龄为5.2(3.6,6.5)岁,主诉以“发育落后”或“沟通障碍”为主(24例,47.0%)。共检出PTEN基因的41个致病/可疑致病突变,包括错义突变28个(68.3%),无义突变5个,移码突变4个,经典剪切位点突变3个,起始密码子突变1个;位于磷酸酶结构域28个(68.3%),位于C2结构域11个(24.4%),位于PIP2结合模体(PBD)和C-tail(C端尾)结构域各1个。c.388C>T(p.R130X)(5例)和c.302T>C(p.I101T)(3例)为热点突变位点。12个突变位点未见报道。22例患儿验证了突变来源,17例(77.3%)为新发突变。48例(94.1%)有巨头畸形。42例(82.3%)诊断为神经发育障碍,其中语言发育迟缓36例(70%),大运动发育迟缓25例(49.0%),精细运动迟缓2例,平衡能力差3例,ASD 14例(27.4%),智力障碍13例(25.5%),注意力缺陷及多动障碍、学习困难各1例,3例(5.8%)有癫癎发作。11例(21.6%)发现肿瘤性疾病,发现时中位年龄为4.0(1.0~5.0)岁。8例(15.7%)有皮肤表现,包括阴茎雀斑、牛奶咖啡斑、黑痣、毛囊角化等。39例行头颅MR,35例(89.7%)发现异常,主要表现为脑血管周围间隙增宽(18例)、脑白质异常(6例)和脑室扩大(4例)。临床表型与PTEN基因的突变类型、突变位点的结构域分布均无明显关联。结论PTEN基因突变患儿以巨头畸形伴神经发育障碍(如发育迟缓、智力障碍和ASD)为主要表现,可有肿瘤发生、皮肤学表现、头颅MR异常等。

PTEN基因稳定敲除DF-1细胞系的构建及验证

10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)功能丧失导致AKT的活化与积累,在肿瘤发生过程中起着关键作用。为了研究PTEN在禽肿瘤及病毒感染中的作用,构建PTEN基因稳定敲除的细胞株。测定PTEN基因稳定敲除细胞系的增殖能力,细胞周期,氧化应激和对细胞凋亡及其对H9N2及NDV病毒复制的影响。结果表明PTEN基因稳定敲除后促进细胞的增殖和细胞ROS上升以及抑制细胞凋亡,并且敲除PTEN促进了NDV与H9N2病毒的复制,这为后续研究PTEN功能奠定了基础。

CDK6和PTEN在鸡不同组织、细胞中的表达规律及其与屠宰性状的相关性分析

为探究CDK6和PTEN在鸡脂肪沉积和肌肉发育中的作用,本研究以S3系(性连锁矮小鸡)、F系(快速型肉鸡)和H系(慢速型肉鸡)为研究对象,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CDK6和PTEN在0、2、5、10、15周龄肝脏、胸肌、腿肌、腹脂和皮脂组织、脂肪细胞和成肌细胞中的表达变化。结果表明:2个基因在不同品系鸡的肝脏、腹脂、胸肌、腿肌、皮脂组织及细胞中均有表达,呈现出明显的品系和组织差异性。在肝脏中,CDK6在H系的0、2、5、15周龄表达量显著高于S3系和F系,而PTEN在H系的0、2、10周龄表达量显著高于其他品系。在胸肌中,CDK6在S3系的各周龄表达量显著高于其他品系,PTEN在S3系的0、2、15周龄表达量显著高于其他品系。在腿肌中,CDK6和PTEN在S3系的0、2、5周龄表达量显著高于其他品系。在腹脂中,CDK6和PTEN在S3系的2、5、15周龄表达量显著低于其他品系。在皮脂中,CDK6和PTEN在F系的2、5、10周龄表达量最高,其中CDK6在5周龄、PTEN在2周龄和5周龄的表达量显著高于其他品系。2个基因在成肌细胞和肌内脂肪细胞增殖期的表达显著高于分化期;CDK6表达与H系的腿肌率显著正相关,PTEN表达与S3、H系的腿肌率显著正相关。综上,CDK6和PTEN的表达呈现显著的品系和组织差异性,2个基因可能在不同的发育时期不同程度地参与了肌肉发育和脂肪沉积的调控,可作为鸡肌肉发育和脂肪沉积新的候选基因。

HER-2、Ki-67、PTEN表达与乳腺癌患者临床特征、预后的关系

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(HER-2)、Ki-67、第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)表达与乳腺癌患者临床特征、预后的关系。方法:回顾性收集2019年8月—2020年11月宁夏医科大学总医院收治的85例乳腺癌患者的临床资料。收集所有患者乳腺癌组织及癌旁组织。收集所有患者临床特征。比较所有患者癌组织及癌旁组织HER-2、Ki-67、PTEN阳性率。比较不同临床特征患者癌组织HER-2、Ki-67、PTEN阳性率。比较存活组及死亡组癌组织HER-2、Ki-67、PTEN阳性率。结果:乳腺癌组织HER-2、Ki-67阳性率均高于癌旁组织,PTEN阳性率低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结侵袭、脉管侵袭的癌组织HER-2、Ki-67阳性率均高于无淋巴结侵袭、脉管侵袭的乳腺癌组织,PTEN阳性率低于无淋巴结侵袭、脉管侵袭的乳腺癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。存活组乳腺癌组织HER-2、Ki-67阳性率均低于死亡组,PTEN阳性率高于死亡组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HER-2、Ki-67在乳腺癌组织中阳性表达率较高,PTEN阳性表达率较低,且其表达水平与淋巴结侵袭、脉管侵袭密切相关,另外低表达的HER-2、Ki-67及高表达的PTEN可能意味着较高的存活率,或可作为临床理想的乳腺癌预后标志物与未来的肿瘤治疗靶点。