蓝萼甲素调节PINK1/Parkin信号通路对IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨蓝萼甲素(GLA)调节PTEN诱导的激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的关节软骨细胞自噬和凋亡的影响。方法:将关节软骨细胞分为Control组、IL-1β组、L-GLA组、M-GLA组、H-GLA组、Suramin组;细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测关节软骨细胞增殖;TEM检测关节软骨细胞自噬;流式细胞仪检测关节软骨细胞凋亡;ELISA检测关节软骨细胞中炎性因子(MMP3、TNF-α、MMP13)和活性氧(ROS)水平;蛋白印迹法检测关节软骨细胞中裂解的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)I、LC3Ⅱ、P62、PINK1、Parkin蛋白表达。结果:与Control组相比,IL-1β组存活率、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1、Parkin降低,自噬空泡数、凋亡率、MMP3、TNF-α、MMP13、ROS、cleaved caspase-3、P62升高(P<0.05);L-GLA组、M-GLA组、H-GLA组存活率、自噬空泡数、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1、Parkin高于IL-1β组,凋亡率、MMP3、TNF-α、MMP13、ROS、cleaved caspase-3、P62低于IL-1β组(P<0.05);Suramin组存活率、自噬空泡数、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1、Par-kin低于H-GLA组,凋亡率、MMP3、TNF-α、MMP13、ROS、cleaved caspase-3、P62高于H-GLA组(P<0.05)。结论:GLA通过激活IL-1β诱导的关节软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡,进而抑制OA的进展,其机制可能是通过激活PINK1/Parkin信号通路实现的。

鼠尾草酸调节PINK1/Parkin信号通路对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的影响

目的探究鼠尾草酸调节磷酸酶基因(PTEN)诱导假定激酶(PINK)1/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)的影响。方法将HBZY-1细胞分为对照组(含糖量5.8 mmol/L),高糖组(含糖量26 mmol/L),低剂量鼠尾草酸组(含50 mg/kg鼠尾草酸),高剂量鼠尾草酸组(含100 mg/kg鼠尾草酸)。采用透射电镜、流式细胞仪观察高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞自噬、凋亡变化状况,Western印迹检测PINK1/Parkin信号通路蛋白的表达量。结果与对照组相比,高糖组、低剂量鼠尾草酸组、高剂量鼠尾草酸组HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、超氧化物歧化酶(SOD)表达显著降低,细胞凋亡率、白细胞介素(IL)-1β、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平显著升高(P<0.05);与高糖组对比,低剂量鼠尾草酸组、高剂量鼠尾草酸组HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β表达显著下降(P<0.05);与低剂量鼠尾草酸组相比,高剂量鼠尾草酸组的HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、SOD表达上升,细胞凋亡率、TNF-α、MDA、IL-1β表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论鼠尾草酸可加强高糖诱导的肾小球系膜细胞自噬率,抑制HBZY-1的凋亡,可能与其调节PINK1/Parkin信号通路有一定的关联性。

右美托咪定预处理调控PINK1/Parkin通路对H9C2细胞缺氧/复氧损伤线粒体自噬的影响

目的 研究右美托咪定对缺氧/复氧(H/R)条件下心肌细胞PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)通路介导的线粒体自噬的影响,以明确右美托咪定保护心肌细胞的相关作用机制。方法 体外培养H9C2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、右美托咪定低剂量组(0.1μmol/L右美托咪定+H/R)、右美托咪定中剂量组(1.0μmol/L右美托咪定+H/R)、右美托咪定高剂量组(10.0μmol/L右美托咪定+H/R)。采用3-2(4,5-二甲基噻唑-2)-2-四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测各组H9C2细胞增殖能力;检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、活性氧簇(ROS)水平;透射电镜下观察线粒体自噬情况;JC-1法检测线粒体膜电位(MMP);免疫印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)、家蚕隔离体蛋白1(p62)、PINK1/Parkin通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,H/R组H9C2细胞增殖抑制率、自噬小体数量、MDA含量、ROS水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PINK1、Parkin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),MMP水平、SOD活性及p62蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与H/R组比较,右美托咪定低、中、高剂量组H9C2细胞增殖抑制率、自噬小体体数量、MDA含量、ROS水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PINK1、Parkin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),MMP水平、SOD活性及p62蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 右美托咪定可能通过抑制H/R条件下PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬,保护H9C2细胞免受氧化应激损伤。

氟暴露对大鼠肾脏损伤及SIRT3-FOXO3a-PINK1/PARKIN通路的影响

目的探讨氟暴露对大鼠肾脏损伤及沉默信息调节因子3(SIRT3)-叉头蛋白O3a(FOXO3a)-张力蛋白同源物诱导的假定激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(PARKIN)通路的影响。方法选取4周龄SD大鼠(清洁级,体质量100~150 g)24只,按随机数字表法分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组8只(雌雄各半)。对照组自由饮用自来水(氟离子浓度<0.5 mg/L),低、高氟组分别自由饮用自来水和氟化钠配制的溶液(氟离子浓度分别为5.0、50.0 mg/L),周期为180 d。实验结束后,观察并记录大鼠氟斑牙形成情况,采集大鼠股骨、尿液、血液,检测骨氟、尿氟、血氟含量,并检测肾脏功能相关指标(血清尿酸、肌酐、尿素氮含量);光镜下观察苏木素-伊红(HE)染色肾组织形态学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法和蛋白质印迹法分别检测肾脏SIRT3、FOXO3a、PINK1、PARKIN、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬受体蛋白(P62)mRNA和蛋白表达水平。结果低、高氟组大鼠分别有7、1只检出Ⅰ度氟斑牙,0、7只检出Ⅱ度氟斑牙。与对照组比较,低、高氟组大鼠骨氟(μg/g:1.18±0.06、2.16±0.07比0.52±0.05)、尿氟(mg/L:4.43±0.11、7.46±0.09比2.58±0.14)、血氟含量(μg/ml:0.77±0.06、1.68±0.10比0.52±0.08),血清尿酸(μg/ml:61.01±4.17、103.92±5.43比28.68±2.91)、肌酐(μg/ml:74.82±9.61、132.05±5.35比22.38±4.11)、尿素氮含量(μg/ml:13.36±1.27、14.55±0.34比0.29±0.07)均较高(均P<0.05)。光镜下,对照组肾组织表现为肾小管和肾小球细胞排列紧密且整齐,细胞形态规则,轮廓完整清晰;低氟组与对照组相似,未见明显异常;高氟组可见肾小球结构异常,出现萎缩现象,部分区域肾小管表现为上皮细胞水肿和细胞间界限不清。qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,低、高氟组SIRT3(0.82±0.03、0.58±0.02比1.00±0.08)和P62 mRNA表达水平(0.75±0.07、0.28±0.09比1.00±0.07)均较低(均P<0.05);FOXO3a(1.35±0.04、3.01±0.23比1.00±0.08),PINK1(1.58±0.09、3.28±0.09比1.00±0.07),PARKIN(1.51±0.04、1.67±0.10比1.00±0.05)和LC3 mRNA表达水平(1.74±0.07、2.38±0.18比1.00±0.08)均较高(均P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组比较,低、高氟组SIRT3(0.91±0.01、0.55±0.03比1.00±0.01)和P62蛋白表达水平(0.94±0.27、0.66±0.38比1.00±0.19)均较低(均P<0.05);FOXO3a(1.14±0.03、1.22±0.05比1.00±0.02),PINK1(1.46±0.03、1.56±0.03比1.00±0.05),PARKIN(1.98±0.02、2.33±0.11比1.00±0.06)和LC3蛋白表达水平(4.10±0.58、4.93±0.33比1.00±0.13)均较高(均P<0.05)。结论氟暴露可致大鼠肾组织损伤,SIRT3、P62表达水平下调,FOXO3a、PINK1、PARKIN及LC3表达水平上调。

miR-27b调控PINK1/parkin通路参与大鼠癫痫发作的机制

目的探究微小RNA 27b(miR-27b)调控PTEN诱导性激酶蛋白1(PINK1)/E3泛素连接酶(parkin)通路参与大鼠癫痫发作的机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-27b NC组、miR-27b拮抗剂组、miR-27b拮抗剂+H89(PINK1上游因子PKA抑制剂)组,每组12只。除对照组外,其他组大鼠均构建癫痫大鼠模型。实验结束后观察大鼠行为学变化。qRT-PCR检测miR-27b表达。HE染色观察大鼠海马组织病理学变化。透射电镜观察海马CA1区线粒体超微结构。免疫组化法检测DRP1蛋白表达情况。Western blot检测各组海马组织中PINK1/parkin通路及自噬相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,模型组和miR-27b NC组大鼠精神萎靡、饮食不佳、体形消瘦、皮毛光泽暗淡脏乱,神经细胞、线粒体损伤严重。与模型组相比,miR-27b拮抗剂组大鼠精神、饮食、皮毛状态、神经细胞及线粒体损伤程度有所改善。与miR-27b拮抗剂组相比,miR-27b拮抗剂+H89组大鼠精神、饮食、皮毛状态不佳、神经细胞及线粒体损伤程度加重。与对照组相比,模型组miR-27b表达水平、DRP1阳性细胞数显著增加,而PINK1、parkin、Beclin-1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平显著降低(均P<0.05)。与模型组相比,miR-27b拮抗剂组发作次数、miR-27b表达水平、DRP1阳性细胞数显著降低,而发作潜伏期、PINK1、parkin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平显著增加(P<0.05)。与miR-27b拮抗剂组相比,miR-27b拮抗剂+H89组发作次数、DRP1阳性细胞数显著增加,而发作潜伏期、PINK1、parkin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达水平显著降低(均P<0.05)。结论miR-27b表达沉默可通过促进PINK1/parkin信号通路改善大鼠癫痫程度。

灵芝孢子干预糖尿病大鼠睾丸组织线粒体自噬及细胞的凋亡

背景:男性生殖障碍作为糖尿病的常见并发症近年来受到越来越多的关注。灵芝孢子具有降糖、抗氧化、抗炎等功效,但其对于糖尿病睾丸组织的调控机制尚未完全阐明。目的:探讨灵芝孢子对糖尿病大鼠睾丸组织PTEN诱导激酶1/E3泛素蛋白连接酶通路及细胞凋亡的影响。方法:采用随机数字表法将40只雄性SD大鼠分为正常组、高脂高糖组、糖尿病组、灵芝孢子干预组,每组10只:高脂高糖组、糖尿病组、灵芝孢子干预组给予高脂高糖饮食至实验结束;高脂高糖饮食1个月后,糖尿病组、灵芝孢子干预组腹腔注射链脲佐菌素30 mg/kg建立2型糖尿病模型;造模成功后,灵芝孢子干预组灌胃给予灵芝孢子300 mg/(kg·d),其余3组灌胃给予等量生理盐水,持续给药12周。给药结束后,检测大鼠精子数量和形态、睾丸组织形态结构、血清睾酮和睾丸组织氧化应激水平,免疫组化分析PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、抗核孔蛋白表达,Western blotting检测睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、抗核孔蛋白、程序性死亡受体1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达。结果与结论:①与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组大鼠精子数量减少(P<0.01),精子畸形率增加(P<0.01),血清睾酮浓度降低(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠精子数量增加(P<0.05),畸形率降低(P<0.01),血清睾酮浓度升高(P<0.01);②与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组大鼠睾丸组织中丙二醛水平升高(P<0.01),谷胱甘肽还氧化物酶和超氧化物歧化酶水平降低(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠睾丸组织中丙二醛水平降低(P<0.01),谷胱甘肽还氧化物酶和超氧化物歧化酶水平升高(P<0.01);③免疫组化染色显示,与正常组和高脂高糖组对比,糖尿病组大鼠睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶阳性表达减少,抗核孔蛋白阳性表达增加;与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组大鼠睾丸组织中PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶阳性表达增加,抗核孔蛋白阳性表达减少;④Western blotting检测显示,与正常组和高脂高糖组相比,糖尿病组PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、程序性死亡受体1蛋白表达及微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值降低(P<0.05或P<0.01),抗核孔蛋白、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达升高(P<0.01);与糖尿病组相比,灵芝孢子干预组PTEN诱导激酶1、E3泛素蛋白连接酶、程序性死亡受体1蛋白表达及微管相关蛋白轻链3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值升高(P<0.05或P<0.01),抗核孔蛋白、caspase3、剪切caspase3的蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);⑤结果显示,灵芝孢子可能通过激活PTEN诱导激酶1/E3泛素蛋白连接酶信号通路增强睾丸组织自噬水平,减少组织细胞的凋亡,以此保护睾丸组织。

川芎嗪改善缺血再灌注诱导的大鼠急性肾损伤

目的探讨川芎嗪对缺血再灌注(I/R)诱导的大鼠急性肾损伤的保护作用及其与线粒体自噬的相关性。方法48只Wistar大鼠分为正常对照组、模型组、模型+TMP(10,15和20 mg·kg^-1)组和正常+TMP(15 mg·kg^-1)组。通过夹闭双侧肾动脉45 min再灌注30 min制备大鼠急性肾损伤模型;模型+TMP(10,15和20 mg·kg^-1)组大鼠于夹闭双侧肾动脉45 min再灌注30 min后一次性ip给予不同剂量的TMP;正常+TMP(15 mg·kg^-1)组于开腹刺激75 min后一次性ip给予TMP 15 mg·kg^-1。给予TMP 24 h后,肌氨酸氧化酶法检测血清中肌酐(Cr)含量;尿素酶-谷氨酸脱氢酶法检测血清中尿素氮(BUN)含量;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;WST-1法检测肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性;TBA法检测肾组织匀浆中丙二醛(MDA)含量。HE染色检测肾组织病理变化,免疫组织化学法检测大鼠肾组织中磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的激酶1(PINK1)和E3泛素连接酶(Parkin)蛋白的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠血清中Cr,BUN及TNF-α含量明显升高(P<0.01);肾组织匀浆中SOD活性明显降低(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.01);肾组织中PINK1和Parkin蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与正常对照组相比,正常+TMP组大鼠血清中Cr,BUN及TNF-α含量未见明显变化;肾组织匀浆中SOD活性和MDA含量无明显变化;肾组织中PINK1和Parkin蛋白表达水平未见明显变化。与模型组相比,模型+TMP组大鼠血清中Cr,BUN和TNF-α含量明显降低(P<0.01,P<0.05);肾组织匀浆中SOD活性明显升高(P<0.01),MDA含量明显降低(P<0.01);肾组织中PINK1和Parkin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。HE染色结果显示,TMP可明显改善I/R引起的大鼠肾小管细胞肿胀、排列紊乱和蛋白管型等,细胞形态明显好转。结论TMP对I/R诱导的大鼠急性肾损伤具有保护作用,其机制可能与改善氧化应激损伤、促进线粒体自噬有关。

基于PINK1/Parkin介导的线粒体自噬与细胞凋亡探讨伸曲助育汤改善精索静脉曲张大鼠生精功能机制

目的基于PTEN诱导假定激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)通路观察伸曲助育汤对精索静脉曲张(VC)大鼠左侧睾丸组织中线粒体自噬及细胞凋亡的影响,并探讨作用机制。方法将36只大鼠随机分为假手术组、模型组和伸曲助育汤组,每组12只,模型组和伸曲助育汤组采用左肾静脉部分结扎制备VC大鼠模型。造模成功48天后,伸曲助育汤组给予伸曲助育汤(0.7 g/100 g)灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,每天2次,连续干预60天。取各组大鼠左侧睾丸,采用HE染色观察大鼠睾丸组织形态学变化;电镜观察睾丸组织线粒体超微结构及线粒体自噬小体;Western Blot检测睾丸组织PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ/Ⅰ、选择性自噬接头蛋白(p62)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解凋亡蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)的表达;采用免疫组织化学染色检测睾丸组织PINK1、Parkin的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠睾丸组织病理损伤严重,电镜下线粒体肿胀、形状不规则、伴有空泡化和嵴破裂,线粒体自噬小体形成增多,睾丸组织自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3BⅡ/Ⅰ表达升高(P<0.01),p62表达降低(P<0.01),凋亡相关蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表达升高(P<0.01,P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.05)。与模型组比较,伸曲助育汤组大鼠睾丸病理组织结构有明显改善,线粒体结构有所恢复,线粒体自噬小体减少,睾丸组织自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3BⅡ/Ⅰ表达降低(P<0.01,P<0.05),p62蛋白表达升高(P<0.01),凋亡相关蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论伸曲助育汤通过调控睾丸组织中PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬,减少生精细胞凋亡而改善VC大鼠睾丸生精功能。

基于线粒体自噬及Pink1/Parkin信号通路探讨柴胡疏肝散治疗功能性消化不良大鼠的作用机制

目的:基于线粒体自噬及PTEN诱导激酶1(Pink1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路探讨柴胡疏肝散治疗功能性消化不良大鼠的作用机制。方法:将40只SD大鼠按照随机分组原则分为正常组、模型组、柴胡疏肝散组、阳性药物组(多潘立酮),每组10只。正常组大鼠不予造模,其他各组采用夹尾刺激法制备功能性消化不良大鼠模型,每次造模结束后,正常组及模型组灌胃生理盐水,柴胡疏肝散组和多潘立酮组则分别用柴胡疏肝散(4.8 g·kg^(-1))及多潘立酮(4.5 mg·kg^(-1))灌胃。造模用药28 d后取材,检测每组大鼠胃排空率及小肠推进率;苏木素-伊红(HE)染色观察胃窦组织损伤情况;透射电子显微镜(TEM)观察胃间质细胞(ICCs)超微结构;免疫荧光共定位法观察细胞色素C氧化酶(COXⅣ)与Parkin的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、线粒体自噬相关蛋白PHB2、Pink1、Parkin、USP30的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃排空率及小肠推进率均明显下降(P<0.05);与模型组比较,柴胡疏肝散组胃排空率及小肠推进率均明显提高(P<0.05)。透射电镜结果显示,柴胡疏肝散可减轻胃窦组织线粒体肿胀程度。免疫荧光结果显示,与正常组比较,Parkin在线粒体的荧光表达显著提高(P<0.01);与模型组比较,Parkin在线粒体的荧光表达显著减少(P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,LC3、Pink1、Parkin及PHB2蛋白表达均明显提高(P<0.05,P<0.01),USP30蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,LC3、Pink1、Parkin及PHB2蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),USP30蛋白表达显著提高(P<0.01)。结论:柴胡疏肝散治疗功能性消化不良的作用机制可能与抑制Pink1/Parkin信号通路的激活,从而抑制ICCs线粒体过度自噬有关。

四磨汤口服液改善功能性消化不良模型大鼠的作用机制

目的 探讨四磨汤口服液调控PTEN诱导假定激酶1(Pink1)/E_(3)泛素连接酶(Parkin)轴对功能性消化不良(FD)模型大鼠的改善作用及机制。方法 取SD雄性大鼠,利用不可预知的慢性应激法建立FD模型,然后随机分为模型组、阳性对照组(多潘立酮片,3.5 mg/kg)、四磨汤组(四磨汤口服液,5.4 mL/kg),另设不造模的空白组,每组20只。各给药组大鼠灌胃相应药物,空白组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,每天1次,持续14 d。末次给药结束后,检测大鼠胃排空率和小肠推进率;检测大鼠血清中胃肠激素[胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、胆囊收缩素(CCK)]含量;观察大鼠胃窦组织中卡哈尔间质细胞(ICC)线粒体结构;观察大鼠胃窦组织中细胞色素C氧化酶Ⅳ(COXⅣ)和Parkin在线粒体中的共定位表达;检测大鼠胃窦组织中微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62、Pink1、Parkin蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠胃排空率、小肠推进率和血清中MTL、GAS含量以及p62蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),血清中CCK含量和胃窦组织线粒体中COXⅣ、Parkin的共定位表达以及LC3、Pink1、Parkin蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);胃窦组织中ICC线粒体数量减少,线粒体空泡化,线粒体嵴模糊,自噬溶酶体较多。与模型组比较,阳性对照组和四磨汤组大鼠上述指标水平均显著逆转(P<0.05);ICC线粒体结构逐渐恢复,线粒体嵴清晰,自噬溶酶体减少。结论 四磨汤口服液可改善FD模型大鼠的胃肠动力和胃肠激素水平,其作用机制可能与抑制Pink1/Parkin轴、阻断自噬有关。

基于Pink1/Parkin通路探讨肝豆汤对Wilson病TX模型小鼠的线粒体自噬的影响

目的:观察肝豆汤(GDD)对Wilson病毒奶小鼠(TX)模型海马神经元细胞的线粒体自噬影响,并通过研究PTEN诱导激酶1(Pink1)/E3泛素连接酶(Parkin)介导的线粒体自噬通路,探讨肝豆汤对神经元细胞损伤的保护机制。方法:60只小鼠分为空白组、模型组、肝豆汤低、中、高剂量组(5.5、11、22 g·kg^(-1))和青霉胺组(0.09 g·kg^(-1)),予以相应灌胃8周。采用Morris水迷宫、悬挂实验及爬杆实验检测行为学;苏木素-伊红(HE)染色结合透射电镜观测细胞凋亡、超微结构、细胞自噬及线粒体结构。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测神经元细胞Pink1、Parkin、自噬标记蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、p62的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠定位巡航时间延长,穿越平台次数减少,悬挂得分降低,爬杆时间显著延长(P<0.01);与模型组比较,肝豆汤中、高剂量及青霉胺组小鼠定位巡航时间缩短,穿越平台次数增多,悬挂得分上升,爬杆时间缩短(P<0.01)。与空白组比较,模型组神经元细胞损伤显著,自噬体增多;与模型组比较,肝豆汤中、高剂量组及青霉胺组神经元细胞损伤改善显著,自噬体减少。与空白组比较,模型组MDA、ROS水平升高,SOD水平下降(P<0.01);与模型组比较,肝豆汤低、中、高剂量组MDA、ROS下降,SOD水平显著上升(P<0.01)。与空白组比较,模型组Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1的蛋白及mRNA表达水平上升,p62表达水平下降(P<0.05);与模型组比较,肝豆汤中、高剂量组Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白及mRNA表达水平下降,p62明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:肝豆汤显著的抑制TX小鼠海马神经元线粒体过度自噬,保护神经元细胞的损伤,其机制考虑可能为通过调控Pink1/Parkin通路而实现。

强心汤对慢性心力衰竭模型大鼠梗死心肌区组织活性氧及PINK1/parkin介导的线粒体自噬的影响

目的探讨强心汤治疗慢性心力衰竭的可能作用机制。方法40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、强心汤组、卡托普利组、卡托普利+强心汤组,每组8只。除假手术组外其余各组大鼠均采用结扎左冠状动脉前降支方法建立慢性心力衰竭模型。造模成功后第2天开始,强心汤组大鼠给予12.25 g/(kg·d)强心汤混悬液灌胃;卡托普利组大鼠给予10.38 mg/(kg·d)卡托普利片混悬液灌胃;卡托普利+强心汤组给予强心汤和卡托普利片混悬液灌胃,剂量同上;假手术组和模型组大鼠给予2 ml生理盐水灌胃。各组大鼠均每天灌胃2次,连续28天。采用心脏彩超检测各组大鼠心功能指标[包括左室舒张末期内径(LVEDd)、左室收缩末期内径(LVEDs)、左室射血分数(LVEF)];荧光探针染色检测梗死心肌区组织活性氧(ROS)水平;HE染色观察梗死心肌区组织病理学变化;分别采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测大鼠梗死心肌区组织PTEN诱导激酶1(PINK1)、E3泛素连接酶(parkin)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA表达及PINK1、parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVEDd、LVEDs升高,LVEF下降,梗死心肌区组织ROS、LC3 mRNA及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ值升高,PINK1、parkin mRNA及蛋白表达下降(P<0.05),且心肌组织中大量弥漫性出血,出血灶周围心肌细胞核形态发生变化,部分细胞核发生核碎裂、核溶解,大量炎性细胞浸润。与模型组比较,各药物干预组大鼠上述指标均明显改善(P<0.05);与强心汤组、卡托普利组比较,卡托普利+强心汤组上述指标改善程度更佳(P<0.05);强心汤组与卡托普利组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论强心汤可能通过上调PINK1、parkin表达促进线粒体自噬而减少ROS和心肌细胞凋亡从而发挥改善心功能的作用,同时强心汤与卡托普利片联合使用可发挥协同作用。

温阳化浊通络方对硬皮病小鼠肺微血管损伤的影响

目的研究温阳化浊通络方基于线粒体自噬对硬皮病小鼠肺微血管损伤的影响。方法将50只小鼠随机分为空白对照组(0.9%NaCl,灌胃)、对照组(0.9%NaCl,灌胃)、模型组(0.9%NaCl,灌胃)、温阳化浊通络方组(47 mg·kg^(-1)·d^(-1)温阳化浊通络方,灌胃)、阳性对照组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)KC7F2溶解于磷酸盐缓冲液,腹腔注射),持续给药4周。以免疫组化法检测肺组织线粒体外膜易位酶20(TOMM20)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、B细胞淋巴瘤-2/腺病毒E1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)、PTEN诱导性肌酶蛋白1(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)的表达水平;以蛋白质印迹(Western blot,WB)法检测肺组织微血管内皮细胞线粒体自噬相关蛋白TOMM20、LC3B及HIF-1α/BNIP3/PINK1/Parkin通路蛋白表达水平。结果对照组、模型组、温阳化浊通络方组和阳性对照组小鼠肺组织微血管内皮细胞HIF-1α相对含量分别为0.17±0.02、0.98±0.01、0.66±0.03和0.48±0.01,BNIP3相对含量分别为0.40±0.02、0.74±0.01、0.56±0.01和0.60±0.02,PINK1相对含量分别为0.26±0.04、0.88±0.01、0.65±0.02和0.67±0.02,Parkin相对含量为分别为0.33±0.02、0.89±0.01、0.65±0.02和0.77±0.02,TOMM20相对含量分别为1.10±0.02、0.58±0.01、1.02±0.01和0.98±0.03,LC3B-Ⅰ/LC3B-Ⅱ相对含量分别为0.24±0.01、0.80±0.01、0.53±0.02和0.70±0.02。模型组中HIF-1α、BNIP3、PINK1、Parkin、LC3B-Ⅰ/LC3B-Ⅱ蛋白含量高于对照组,温阳化浊通络方可有效降低其含量;模型组中TOMM20含量低于对照组,温阳化浊通络方可有效提高其含量。结论温阳化浊通络方可能通过增加TOMM20和抑制LC3B及HIF-1α/BNIP3/PINK1/Parkin信号通路的蛋白表达,进而抑制线粒体自噬,改善SSc肺微血管损伤。