脓毒症心肌抑制大鼠PTEN-PI3K-Akt信号通路的激活对心肌组织损伤及凋亡的影响

目的探讨脓毒症心肌抑制大鼠心肌组织PTEN-PI3K-Akt信号通路的激活对大鼠心肌组织损伤及细胞凋亡的影响.方法采用盲肠结扎穿孔术构建脓毒症心肌抑制大鼠模型,并分成对照组、模型组及BPV干预组,每组10只.采用RT-PCR及Western blot检测心肌组织PTEN-PI3K-Akt信号通路关键因子磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、Akt-1、Cyclin D1 mRNA及蛋白的表达,采用TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡情况,采用HE染色观察不同组大鼠心肌组织结构.结果BPV干预组PTEN基因的mRNA及蛋白表达量较模型组下降(P<0.05),同时PI3K-Akt信号通路PI3K、Akt、Akt-1、Cyclin D1的mRNA及蛋白表达量上升(P<0.05);BPV干预组心肌组织细胞的凋亡率低于模型组(P<0.05).正常组大鼠心肌细胞结构整齐,无病理迹象;模型组大鼠心肌细胞呈现脓毒症心肌抑制的典型损伤特征;BPV干预组心肌损伤有所改善.结论激活PTEN-PI3K-Akt信号通路有助于减少细胞凋亡,改善心肌损伤.

葛根素介导PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制绝经后骨质疏松症的机制研究

目的观察葛根素对去卵巢骨质疏松症小鼠骨组织形态的影响以及PTEN-PI3K-AKT信号通路的变化情况,并探讨其分子机制。方法选取10~12周龄,体重约20~25 g的C57BL/6雌性小鼠24只,随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(Ovx)、葛根素组(Pue)。术后8周,鉴定为骨质疏松模型后开始给药干预,连续给药12周,每组随机取6只小鼠采取颈椎脱臼法处死。取左侧股骨进行Micro-CT扫描并通过real-time PCR法检测骨组织内PTEN、Foxo1、catalase基因的相对表达量。取右侧股骨制成石蜡切片观察其形态结构并采用免疫组化方法观察骨组织中PTEN、P-AKT、catalase蛋白的表达情况。结果术后8周Ovx组,小鼠子宫萎缩变小、骨组织HE染色骨小梁明显稀疏、Micro-CT骨小梁断裂明显。给药后,Pue组骨小梁增多、骨髓腔缩小,骨连接增多;PCR结果表明,葛根素干预后PTEN、Foxo1、catalase基因表达上调(P<0.05,差异有统计学意义);免疫组化结果表明,PTEN、catalase蛋白表达上调,P-AKT蛋白下调,但变化差异不明显。结论葛根素可能通过介导PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制绝经后骨质疏松症。

肉苁蓉总苷经PI3K-Akt信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制研究

目的探究肉苁蓉总苷通过激活PI3K-Akt信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemiareperfusion injury,CIRI)的保护作用及机制。方法60只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、肉苁蓉总苷组、尼莫地平组。采用改良线栓法构建大鼠CIRI模型。采用Zea-Longa神经功能评分评估各组大鼠中枢神经系统缺损状况,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色计算各组模型大鼠脑梗死面积,原位末端转移酶标记法染色检测细胞凋亡率,免疫荧光染色分析凋亡相关因子的表达情况,蛋白免疫印迹以及荧光定量PCR检测各组大鼠凋亡相关因子及PI3K-Akt信号通路相关分子表达水平。结果与假手术组相比,CIRI模型大鼠神经系统缺损症状严重,神经功能评分升高(P<0.05),运动能力减退,脑梗死面积增大,凋亡细胞增多,促凋亡因子B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2 as sociated X,Bax)和细胞色素C(cytochrome C,CytC)表达增加(P<0.05),Bcl-2、Bcl-2/Bax、磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-Akt)、p-Akt/Akt表达降低(P<0.05)。与模型组相比,肉苁蓉总苷能够促进CIRI模型大鼠运动功能的恢复,减小脑梗死面积,调控神经细胞凋亡,抑制Bax、CytC的表达(P<0.05),促进Bcl-2、Bcl-2/Bax、PI 3K、p-Akt、p-Akt/Akt的表达。结论肉苁蓉总苷可能通过激活PI3K-Akt信号通路,抑制神经细胞凋亡,对CIRI模型大鼠发挥神经保护作用。

circBFAR调控hsa-miR-424-5p及PI3K-Akt信号通路基因促进胰腺癌进展的机制研究

目的探讨circBFAR在胰腺癌中的差异表达及其作用分子机制。方法在GSE69362数据集中分析circBFAR在胰腺癌和对照组织中的差异表达。利用TCGA数据库鉴定了胰腺癌和对照组织间的差异表达miRNAs(DEmiRs),并与circBFAR的靶标miRNAs进行交集分析。在GSE62452和GSE28735数据集中鉴定了胰腺癌和对照组织间的差异表达mRNAs(DEmRs),并与靶标DEmiRs的靶向调控mRNAs进行交集分析。对circBFAR靶标DEmiRs调控的DEmRs进行富集分析,筛选出参与PI3K-Akt信号通路的基因并绘制生存曲线。收集10例胰腺癌组织及相应的癌旁对照组织样本,进行RT-qPCR和Western blot检测PI3K-Akt信号通路基因的表达。在胰腺癌细胞系PANC-1中敲降circBFAR或hsa-miR-424-5p,将细胞分为五组进行实验:对照组;si-circNC组;si-circBFAR组;si-circBFAR+inhibitor NC组;si-circBFAR+hsa-miR-424-5p inhibitor组。利用CCK-8检测细胞活性,通过划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,利用RT-qPCR和Western blot检测信号通路基因的表达。结果circBFAR在胰腺癌组织中的表达显著高于对照组(P<0.001)。在鉴定的靶标DEmiRs中,hsa-miR-424-5p在胰腺癌中低表达(P<0.01)。hsa-miR-424-5p调控的靶标DEmRs中,LAMA3、ITGA3、MET和AREG参与PI3K-Akt信号通路,在胰腺癌中高表达时患者预后不良(P<0.001)。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,circBFAR、LAMA3、ITGA3、MET和AREG在胰腺癌患者中高表达,而hsa-miR-424-5p则低表达。在PANC-1细胞中转染si-circBFAR显著抑制了细胞增殖、迁移和侵袭,以及LAMA3、ITGA3、MET和AREG的表达。转染hsa-miR-424-5p inhibitor抑制了si-circBFAR对细胞的影响(P<0.01)。结论circBFAR通过调控hsa-miR-424-5p及其靶向基因LAMA3、ITGA3、MET和AREG的表达,参与PI3K-Akt信号通路,促进了胰腺癌的进展。抑制circBFAR可能成为胰腺癌治疗的潜在策略。

PI3K-Akt信号通路在大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及白黎芦醇的干预研究

目的:研究白藜芦醇(Res)通过PI3K-Akt信号通路减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的作用。方法:健康雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、Res组、Res+LY294002(Res+LY)组,除假手术组外均进行肾缺血再灌注建模,再灌注前舌下静脉注射Res(20 mg/kg)、LY294002(5 mg/kg)。再灌注24 h后检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN),肾脏病理改变及Paller评分,血清及肾脏中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,肾脏中p-PI3K、p-Akt表达水平。结果:模型组大鼠的Scr、BUN、Paller评分、MDA含量均高于假手术组,SOD含量及p-PI3K、p-Akt表达水平均低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);Res组大鼠的Scr、BUN、Paller评分、MDA含量均低于模型组,SOD含量及p-PI3K、p-Akt表达水平均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);Res+LY大鼠的Scr、BUN、Paller评分、MDA含量均高于Res组,SOD含量及p-PI3K、p-Akt表达水平均低于Res组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Res减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的作用与激活PI3K-Akt信号通路有关。

从PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨补肾疏肝方含药血清抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移的机制

目的:通过研究补肾疏肝方含药血清对PTEN-PI3K-AKT信号通路的影响,探讨补肾疏肝方抑制肺腺癌细胞增殖和转移作用机制。方法:大鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为生理盐水组(NS为2 m L),顺铂组(8 mg·kg-1),补肾疏肝方低剂量组(15 g·kg-1),补肾疏肝方高剂量组(30 g·kg-1),联合顺铂低剂量组(15 g·kg-1+8 mg·kg-1),联合顺铂高剂量组(30 g·kg-1+8 mg·kg-1),每只大鼠ig,2 m L,每天2次,共5 d。制备药物血清:经药物作用后的大鼠,经腹主动取血,分离血清,灭活,过滤,冻存。MTT法检测补肾疏肝方含药血清对A549细胞增殖的影响。三维细胞培养观察并计数各组细胞形成管状结构数量。RT-PCR检测含药血清对A549肺腺癌细胞AKT-1,Cyclin D1,NF-κB mRNA水平的表达,Western blot检测含药血清对PTEN,p-PI3K,p-AKT蛋白水平的表达。结果:低剂量补肾疏肝方含药血清对A549细胞有抑制作用,低剂量中药与顺铂联用有协同作用且以时间依赖方式,即补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组在48,72,96 h的抑制率均高于其他组(P<0.05,P<0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组拟态血管数目均低于其他组(P<0.05,P<0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组PTEN蛋白表达均高于其他组(P<0.05,P<0.01),补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组p-PI3K,p-AKT蛋白,Akt1,Cyclin D1,NF-κB的mRNA表达均低于其他组(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾疏肝方含药血清可通过PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移。

大黄糖络丸通过调控PI3K-Akt/NF-κB信号通路减轻糖尿病大鼠大血管炎症反应

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(PKB/Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路,探讨大黄糖络丸(RSP)防治Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠大血管炎症反应的作用机制。方法:15只雄性ZDF(fa/+)大鼠作为对照组;高脂饲料诱导成模的75只雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组,高、中、低剂量RSP组,以及二甲双胍组,每组15只。药物干预12周后,处死大鼠,分离血清,检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平;ELISA法检测大鼠血清CD4、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色观察大鼠腹主动脉组织病理改变;免疫组化染色检测腹主动脉中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA表达;Western blot观察腹主动脉组织中PI3K、Akt、p-Akt、p-IκB和NF-κB p65蛋白水平。结果:与模型组相比,RSP显著降低糖尿病大鼠空腹血糖及LDL-C、TG和TC水平(P<0.05),升高HDL-C水平(P<0.05或P<0.01),显著降低血清炎症介质表达,IL-6、TNF-α和CD4水平显著下降(P<0.05或P<0.01),腹主动脉组织病理学损伤程度显著减轻,腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA及蛋白水平,以及MCP-1、p-Akt和p-IκB蛋白水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:RSP可降糖调脂并减轻糖尿病大鼠大血管炎症损伤,其机制可能与抑制PI3K-Akt/NF-κB信号通路活化、减轻炎症反应有关。

基于人脐静脉内皮细胞的OGD/R模型研究当归-川芎药对中7个活性成分对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路的影响

目的探讨当归-川芎药对中7个活性成分(绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、丁烯基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、藁本内酯)对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白及其上下游血管活性物质、黏附因子和炎症因子的调控作用。方法构建人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,采用细胞增殖试剂盒(CCK-8法)检测细胞活力,探索7个成分的最佳造模时间;通过检测乳酸脱氢酶(LDH)释放探索最佳给药浓度;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测7个成分对VEGF、VCAM-1、PAI-1、NF-κB、IL-1和IL-6表达的影响;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测7个成分对VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白mRNA表达的影响。结果HUVEC氧糖剥夺6 h再复氧为最佳造模时间。高剂量绿原酸组、阿魏酸组、洋川芎内酯H组,低、中剂量丁烯基苯酞组,中、高剂量洋川芎内酯A、藁本内酯组显著降低LDH漏出率(P<0.05,P<0.01);绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯H部分剂量组细胞中VEGF、ICAM-1、VCAM-1的表达显著降低,绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯H、藁本内酯部分剂量组细胞NF-κB的表达显著下降,绿原酸、咖啡酸、丁烯基苯酞、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A部分剂量组细胞中IL-6的表达显著增加,绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯A部分剂量组细胞IL-1表达显著减少,阿魏酸、洋川芎内酯H部分剂量组细胞中PAI-1的表达量显著下降(P<0.05,P<0.01);绿原酸、阿魏酸、咖啡酸、丁烯基苯酞和洋川芎内酯A部分剂量组细胞中ERK、VEGF、NF-κB、VEGFR2和MMP9的mRNA相对表达量显著下调,洋川芎内酯H和洋川芎内酯A部分剂量组细胞中AKT的mRNA相对表达量均显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论当归-川芎中的药效成分可能通过抑制黏附因子、炎症因子和VEGF-PI3K-AKT/NF-κB信号通路关键蛋白mRNA的表达,从而发挥抗缺血性中风的作用。

基于PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨非小细胞肺癌Treg细胞上调的分子机制

目的:通过观察肺癌患者Treg细胞PTEN-PI3K-AKT信号通路分子的表达变化,探讨肺癌患者Treg细胞上调的作用机制。方法:选择30例非小细胞肺癌为研究组,30例健康人作为对照组,采用流式细胞术检测各组人群外周血Treg细胞表达变化;运用免疫磁珠法分选外周血单个核细胞中Treg细胞,Western-blot、Real-time PCR技术检测Treg细胞PI3K、AKT、PTEN蛋白及PTEN mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA的表达情况。结果:研究组外周血Treg细胞占CD+4T细胞的比例(Treg/CD4=4.53%±1.85%)明显高于对照组(Treg/CD4=1.87%±0.93%),差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,研究组PI3K、AKT蛋白表达明显升高,PTEN表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,研究组PI3K mRNA、AKT mRNA表达明显升高,PTEN mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肺癌患者外周血Treg细胞水平明显升高,其机制可能与PTEN表达下调进而激活PI3K-AKT信号通路相关。

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证小鼠PTEN-PI3K-Akt-FoxO凋亡信号通路的影响

目的观察灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证小鼠胃组织中PTEN、PI3K、p-Akt、Akt、FoxO3a蛋白及mRNA表达的影响,探讨灭幽汤治疗脾胃湿热证可能的作用机制。方法将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、灭幽汤低剂量组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组、胃四联组,每组10只。除对照组外,其余组均采用复合病因方法造模。造模成功后,对照组和模型组小鼠给予蒸馏水灌胃,1次/d;灭幽汤低、中、高剂量组小鼠分别给予灭幽汤6.2 g/kg、12.4 g/kg、24.8 g/kg灌胃,1次/d;胃四联组小鼠给予泮托拉唑肠溶胶囊+枸橼酸铋钾片+替硝唑片+克拉霉素片280.6 mg/kg灌胃,早晚各1次。各组均连续灌胃14 d,观察各组小鼠一般情况。灌胃结束后,HE染色观察胃黏膜组织病理学表现,TUNEL法检测胃黏膜细胞凋亡情况,采用Western blot法检测胃组织中PTEN、PI3K、p-Akt、FoxO3a蛋白表达情况,采用RT-PCR法检测胃组织中PTEN、PI3K、Akt、FoxO3a mRNA表达情况。结果模型组小鼠出现懒动、食欲下降、皮毛松弛无光泽、体质量减轻、肛温升高,胃黏膜组织HE染色表现为慢性浅表性胃炎;胃四联组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠给予相应药物灌胃后各种临床表现均好转,体质量较模型组稍有增加,胃黏膜组织病理改变明显好转;灭幽汤低剂量组小鼠灌胃后症状、病理改变较之模型组没有显著变化。模型组胃黏膜细胞大量凋亡,除灭幽汤低剂量组外,其余药物干预组细胞凋亡情况较模型组显著减少。模型组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于对照组(P均<0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显低于对照组(P均<0.01);胃四联组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显高于模型组(P均<0.01);灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于胃四联组(P均<0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显低于胃四联组(P均<0.01),灭幽汤中剂量组与灭幽汤高剂量组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论灭幽汤可能通过PTEN-PI3K-Akt-FoxO信号通路抗幽门螺杆菌诱导的胃黏膜细胞凋亡而发挥治疗幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证的作用。

丹参饮提取物A通过PI3K-Akt信号通路抗细胞凋亡机制的研究

目的探讨丹参饮提取物A(Danshen Yin's extracts A,DSYEA)抗心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的作用机制。方法采用大鼠冠脉结扎手术制备心肌缺血大鼠模型。取70只大鼠随机分为正常组、模型组、复方丹参滴丸组(含生药量78.7 g·kg^(-1))、尼可地尔组(含生药量2.91 g·kg^(-1))及丹参饮提取物A(DSYEA)低、中、高剂量组(含生药量3.88,7.76,15.52 g·kg^(-1)),正常组和模型组灌胃等量蒸馏水。给药30 d后,TUNEL法测定细胞凋亡指数;免疫组化法检测Bax/Bcl-2蛋白的表达;Westen Blot法检测Caspase-3、P-AKT、p-GSK-3β蛋白的表达。结果与模型组比较,DSYEA中、高剂量组可下调心肌细胞凋亡指数及Bax蛋白、Caspase-3蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),促进Bcl-2蛋白、P-GSK-3β、P-Akt蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论DSYEA可降低心肌缺血大鼠心肌细胞的凋亡,其机制可能与通过PI3K-AKt信号通路调控凋亡蛋白有关。

17β-雌二醇通过PI3K-Akt信号通路抑制丙泊酚诱导皮层神经元凋亡

目的:探讨17β-雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法:原代培养7d的大鼠皮层神经元,给予不同浓度丙泊酚和或17β-雌二醇处理12 h,用MTT法检测神经元存活率变化,Hoechst33258核染色法检测神经元调亡,Western blot法测定神经元p-Akt蛋白的变化。结果:与溶剂对照组比较,丙泊酚呈剂量依赖性降低神经元存活率(P<0.05);与丙泊酚组比较,17β-雌二醇呈剂量依赖性提高神经元存活率(P<0.05),PI3K/Akt激动剂IGF组神经元存活率显著增加(P<0.01)。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元凋亡率显著增加(P<0.01),丙泊酚+17β-雌二醇组神经元凋亡率较丙泊酚组显著下降(P<0.01),LY294002预处理可阻断17β-雌二醇的作用,使细胞凋亡率增加(P<0.01)。与溶剂对照组比较,丙泊酚呈剂量依赖性降低神经元p-Akt蛋白水平(P<0.05);与丙泊酚组比较,17β-雌二醇呈剂量依赖性提高神经元p-Akt蛋白水平(P<0.05);与丙泊酚+17β-雌二醇组比较,LY294002预处理组p-Akt蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论:17β-雌二醇可抑制丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与激活PI3K-Akt信号通路有关。

IGF1-PI3K-Akt信号通路相关基因在黄羽肉鸡肌肉和肝脏中的表达

【目的】IGF1-PI3K-Akt信号通路是调控生长发育的关键通路,选择慢速型的广西麻鸡和中速型的花山麻鸡作为研究对象,探究IGF1-PI3K-AKT信号通路相关基因胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factors, IGF1)、胰岛素样生长因子1受体(Insulin-like growth factor receptor, IGF1R)和胰岛素受体底物1 (Insulin receptor substrate1, IRS1)在骨骼肌和肝脏中的发育性表达规律,为阐明黄羽肉鸡生长发育调控机理提供参考。【方法】采用SPSS20.0比较广西麻鸡和花山麻鸡在胚胎期至出生后早期的生长发育差异,采用实时荧光定量PCR方法检测上述3个基因在两个品种鸡胚胎期(9、12、16胚龄)和出生后(0、7、21、35、49和63日龄)胸肌、腿肌和肝脏中的表达差异,并将其与体重和组织重进行相关性分析。【结果】鸡生长发育早期体重、骨骼肌重和肝脏重变化呈现显著的品种和时间特异性,经过选育的花山麻鸡体重和组织重的增长在胚胎发育后期已经远远超过广西麻鸡。IGF1、IGF1R和IRS1基因表达存在显著的品种、组织和发育时段特异性,总体上,在胚胎期肌肉中的表达量高于肝脏组织,出生后则为肝脏中的表达量高于肌肉组织,广西麻鸡肌肉中的表达量高于花山麻鸡,而花山麻鸡肝脏中的表达量要高于广西麻鸡。IGF1基因在两个品种胸腿肌中均在9胚龄即可检测到表达,腿肌中表达量均是9胚龄时最高,除与12胚龄差异不显著外,与其他各阶段差异显著,表达量最低点出现在出雏0日龄时;胸肌中则是12胚龄时表达量最高,63日龄时最低;肝脏中则出现品种差异,广西麻鸡胚胎期未检测到表达,从出雏0日龄开始表达,表达高峰出现在21日龄时,而在花山麻鸡中虽然胚胎期检测到表达但表达量极低,49日龄时达到表达高峰。两品种鸡肌肉和肝脏各个阶段均检测到IGF1R mRNA的表达,在胸肌和腿肌中的表达量均表现为9胚龄最高,广西麻鸡9胚龄与其他各阶段差异显著,花山麻鸡9胚龄除与12胚龄差异不显著外,与其他各阶段均差异显著;肝脏中,广西麻鸡表达高峰出现在21日龄,且与9、12、16胚龄和0日龄差异显著,花山麻鸡则是63日龄时最高,与其他各阶段差异显著。两品种鸡肌肉和肝脏各个阶段均能检测到IRS1 mRNA的表达,在两品种肌肉中的表达量均表现为9胚龄或者12胚龄最高,与其他各阶段差异显著,随后下降,并在出雏后维持在较低水平;肝脏中IRS1的表达模式与IGF1R一致。IGF1、IGF1R和IRS1基因的表达两两之间均表现出显著或极显著的正相关关系,同时,肌肉中3个基因的表达与体重、胸(腿)肌重存在显著的负相关,而肝脏中3个基因的表达与体重、胸(腿)肌重、肝脏重均存在显著的正相关。【结论】IGF1-PI3K-AKT信号通路相关基因之间存在一致性趋势,品种间和组织间表达量的差异可能正是不同类型黄羽肉鸡生长发育差异的主要原因之一。

PI3K-AKT信号通路及其在类风湿性关节炎滑膜细胞增殖和凋亡中的作用

PI3K-AKT信号通路是重要的细胞内信号转导通路,与类风湿性关节炎(RA)的发生发展密切相关。该信号通路的活化状态受到严密调控:包括负调控因子PTEN、SHIP和正调控因子TNF-α、TGF-β、TRAIL等。RA患者滑膜细胞中此信号通路处于异常激活状态,导致下游抗凋亡基因高表达并且影响下游多种效应分子,在RA患者关节滑膜细胞增殖和凋亡失衡中发挥关键作用。过度增生的滑膜细胞向关节软骨和骨组织浸润生长,导致患者关节畸形和功能障碍。因此,使用PI3K-AKT信号通路抑制剂或上调该信号通路中的内源性负性调节蛋白的表达可逆转RA滑膜细胞的过度增殖,为治疗此疾病提供新靶点。

MAPK及PI3K-AKT信号通路活化在小鼠胃缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及PI3K-AKT信号通路在小鼠胃缺血再灌注损伤中的作用。方法实验鼠随机分为假手术组和再灌注0.5、1、2、4、6、12 h组,夹闭小鼠腹腔动脉30 min后松开动脉夹再灌注建立模型。分析计算胃黏膜出血面积百分比,Western blot法检测胃组织中磷酸化p38、JNK、ERK、AKT以及总AKT蛋白。结果再灌注组再灌注后各时间点胃黏膜出血面积明显大于假手术组(P均<0.01)。与假手术组相比,再灌注组再灌注后30 min^2 h,胃组织p38、JNK、ERK明显活化(P<0.01);12 h及24 h再灌注组ERK活化明显高于假手术组(P<0.01);再灌注组再灌注后各时间点AKT的磷酸化均明显高于假手术组(P均<0.01)。结论MAPK信号通路活化可能参与了小鼠胃缺血再灌注损伤过程;促修复的PI3K-AKT通路持续活化,可能参与了缺血再灌注后胃黏膜损伤的修复。

PI_3K-Akt信号通路阻抑对结肠癌细胞LS-174T顺铂耐药逆转机制的研究

目的:观察抑制磷脂酰肌醇3激酶和(或)蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路对顺铂耐药结肠癌细胞株LS-174T细胞核中Y-Box结合蛋白1(Y-Box binding protein-1,YB-1)的活性的影响及肿瘤细胞顺铂耐药性的改变.方法:采用顺铂(cisplatin,DDP)药物浓度递增法、间歇性作用的体外诱导法建立人结肠癌的顺铂耐药细胞系LS-174T/DDP,药物Ly294002阻断PI3K-Akt信号通路传导后,采用Western Blot方法检测耐药肿瘤细胞磷酸化Akt表达水平,电泳迁移改变分析(EMSA)方法检测其核中转录因子YB-1活性的改变,MTT法检测DDP对细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:阻断PI3K-Akt信号通路后,顺铂耐药细胞株中磷酸化Akt蛋白表达水平显著下降,同时其细胞核中YB-1的活性明显降低,且细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高(P<0.01).结论:阻断PI3K-Akt信号通路能够提高顺铂耐药细胞株对顺铂的敏感性,PI3K-Akt信号通路可能通过激活YB-1在肿瘤顺铂耐药机制中发挥重要作用.

骨唾液酸蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞PI3K-AKT信号通路的影响

目的:探讨骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞PI3K-AKT信号通路的影响。方法:BSP基因沉默的乳腺癌MDA-MB-231细胞(简称231BO-BSP27)经重组人BSP(recombinant human BSP,rhBSP)和PI3K-AKT抑制剂LY294002处理后,Western blotting检测磷酸化AKT水平的变化,实时定量PCR检测caspase-3、cyclin D1 mRNA表达水平,MTT法检测细胞增殖能力。结果:与BSP基因未沉默的对照组231BO-Scrambled细胞相比,BSP基因沉默的231BO-BSP27细胞BSP蛋白表达明显下调(74.32±2.18)%(P<0.01);AKT磷酸化水平明显下降(33.30±2.61)%(P<0.01),而caspase-3和cyclin D1 mRNA表达分别上升和下降(1.000±0.000 vs 1.733±0.039,1.000±0.000 vs 0.370±0.012;均P<0.01);231BO-BSP27细胞增殖能力显著下降(P<0.05)。外源添加rhBSP蛋白分别上调231BO-Scrambled和231BO-BSP27细胞AKT磷酸化水平(17.86±2.27)%和(33.78±1.51)%(均P<0.01),231BO-BSP27细胞caspase-3 mRNA表达降低(1.000±0.039 vs 0.541±0.091,P<0.01)、cyclin D1 mRNA表达升高(1.000±0.000 vs 2.921±0.032,P<0.01),促进231BO-Scrambled和231BO-BSP27细胞的增殖(均P<0.01)。LY294002则能逆转rhBSP对231BO-Scrambled和231BO-BSP27细胞AKT磷酸化激活作用(P<0.05),使231BO-BSP27细胞caspase-3 mRNA表达升高(P<0.01)、cyclin D1 mRNA表达降低(P<0.01),使该两种细胞增殖能力下降(均P<0.01)。结论:BSP通过PI3K-AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-3和cyclin D1的表达,并影响细胞的增殖。

miR-486对绵羊骨骼肌卫星细胞增殖及PI3k-Akt信号通路相关基因表达的影响

【目的】明确miR-486对绵羊骨骼肌卫星细胞增殖及PI3K-Akt信号通路相关基因表达的影响,为揭示miR-486对绵羊骨骼肌发育的调控机制打下基础。【方法】以巴什拜羊1日龄羔羊后肢骨骼肌卫星细胞为研究对象,通过转染miR-486 mimics和miR-486 inhibitor致使绵羊骨骼肌卫星细胞中miR-486水平上调或下调,探究miR-486对骨骼肌卫星细胞增殖速度及PI3K-Akt信号通路中PTEN、GSK3b、PRKCα、Raf-1、MAPK1、PKN1、Casp9和SGK1等8个相关基因表达变化的影响。【结果】空白对照及转染miR-486 mimics、miR-486 mimics negative control和miR-486 inhibitor negative control的绵羊骨骼肌卫星细胞均表现出典型的S形增殖曲线,但各处理间的细胞增殖速度存在明显差异。当绵羊骨骼肌卫星细胞中miR-486水平上调可促使细胞进入快速增殖状态,而miR-486水平下调可使细胞保持静止状态。实时荧光定量PCR检测结果表明,当绵羊骨骼肌卫星细胞中miR-486水平上调时,可引起PTEN、Raf-1和MAPK1基因相对表达量极显著下调(P<0.01,下同),PRKCα和PKN1基因相对表达量极显著上调,SGK1基因相对表达量显著上调(P<0.05);而GSK3β和Casp9基因相对表达量在不同处理组绵羊骨骼肌卫星细胞间的差异均不显著(P>0.05),可能在维持绵羊骨骼肌卫星细胞基本生命活动中发挥作用。【结论】miR-486通过调控PI3K-Akt信号通路相关基因的表达而参与绵羊骨骼肌卫星细胞生长发育及增殖,为深入研究miR-486对绵羊骨骼肌发育的调控机理及优质肉羊品种培育打下了理论基础。

仙鹤草素通过抑制PI3K-AKT通路促进NRF2介导的胃癌细胞铁死亡

目的:观察仙鹤草素抑制人胃癌HGC-27、MKN-45的作用机制。方法:将胃癌HGC-27、MKN-45细胞分为对照组、不同剂量仙鹤草素组、卡培他滨(阳性对照)组及仙鹤草素+NRF2激活剂(Bardoxolone)组。采用CCK-8法检测HGC-27、MKN-45细胞活力,划痕实验观察细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,western blotting法检测PI3K-AKT通路相关蛋白及抗铁死亡分子NRF2、Histone H3、HO-1、SLC7A11、GPX4表达。结果:与对照组相比,不同剂量仙鹤草素对HGC-27、MKN-45细胞活性均有显著的抑制作用(P<0.05),且随着时间延长和仙鹤草素剂量增加,抑制作用增强。与对照组比较,仙鹤草素低、高剂量组和阳性对照组HGC-27、MKN-45细胞迁移能力减弱,ROS和MDA水平升高,GSH/GSSG、P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT比值降低,总NRF2(Total-NRF2)、细胞核内NRF2(Nuclear-NRF2)、HO-1、SLC7A11、GPX4蛋白表达下调(均P<0.05)。仙鹤草素+Bardoxolone组Total-NRF2、GPX4蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:仙鹤草素可促进胃癌HGC-27、MKN-45细胞铁死亡,其作用机制可能与抑制PI3K-AKT-NRF2信号通路的激活有关。

辛伐他汀对K562细胞PI_3K-AKT信号通路分子变化影响的体内外比较

目的通过检测辛伐他汀体外对K562细胞和裸鼠慢性粒细胞白血病组织(CML)K562细胞的影响,同时分别检测辛伐他汀处理后K562细胞PI3K-AKT信号通路中mRNA水平的变化,比较辛伐他汀在体内外所引起PI3K-AKT信号通路的分子变化,以分析辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的机制。方法体外培养CML细胞株K562细胞,MTT噻唑蓝法检测细胞增殖抑制率。流式细胞术检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化。另外,12只BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下接种K562细胞,构建Balb/c-nu/nu裸小鼠的慢性粒细胞白血病动物模型,采用缺口末端标记技术TUNEL(TdT-medi-ated dUTP nick end labe ling)法检测辛伐他汀诱导K562细胞早期凋亡的变化,用RT-PCR检测辛伐他汀在体内外K562细胞后N-ras分子和N-ras分子下游的PI3K-AKT信号通路的N-ras、PI3K、AKT1、IKK-β、NF-κB1mRNA水平的变化。结果辛伐他汀在体外能抑制K562细胞的增殖,使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,PI3K-AKT信号通路大多数基因出现差异表达。不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P=0.000);不同剂量的辛伐他汀能够引起PI3K、AKT1、NF-κB、IKK-β mRNA的明显差异表达(P=0.000,P=0.003)。但体外实验中的PI3K-AKT信号PI3K、AKT1mRNA水平的变化与体外实验PI3K、AKT1mRNA水平的变化呈现相反的差异表达。结论辛伐他汀体外能够引起参与K562细胞凋亡的N-ras分子和N-ras分子下游的PI3K-AKT信号通路的基因mR-NA水平的变化,从一定角度说明辛伐他汀能依赖PI3K-AKT信号通路诱导K562细胞及其移植瘤细胞凋亡。但体内外实验存在不同的凋亡诱导机制。