灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证小鼠PTEN-PI3K-Akt-FoxO凋亡信号通路的影响

目的观察灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证小鼠胃组织中PTEN、PI3K、p-Akt、Akt、FoxO3a蛋白及mRNA表达的影响,探讨灭幽汤治疗脾胃湿热证可能的作用机制。方法将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、灭幽汤低剂量组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组、胃四联组,每组10只。除对照组外,其余组均采用复合病因方法造模。造模成功后,对照组和模型组小鼠给予蒸馏水灌胃,1次/d;灭幽汤低、中、高剂量组小鼠分别给予灭幽汤6.2 g/kg、12.4 g/kg、24.8 g/kg灌胃,1次/d;胃四联组小鼠给予泮托拉唑肠溶胶囊+枸橼酸铋钾片+替硝唑片+克拉霉素片280.6 mg/kg灌胃,早晚各1次。各组均连续灌胃14 d,观察各组小鼠一般情况。灌胃结束后,HE染色观察胃黏膜组织病理学表现,TUNEL法检测胃黏膜细胞凋亡情况,采用Western blot法检测胃组织中PTEN、PI3K、p-Akt、FoxO3a蛋白表达情况,采用RT-PCR法检测胃组织中PTEN、PI3K、Akt、FoxO3a mRNA表达情况。结果模型组小鼠出现懒动、食欲下降、皮毛松弛无光泽、体质量减轻、肛温升高,胃黏膜组织HE染色表现为慢性浅表性胃炎;胃四联组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠给予相应药物灌胃后各种临床表现均好转,体质量较模型组稍有增加,胃黏膜组织病理改变明显好转;灭幽汤低剂量组小鼠灌胃后症状、病理改变较之模型组没有显著变化。模型组胃黏膜细胞大量凋亡,除灭幽汤低剂量组外,其余药物干预组细胞凋亡情况较模型组显著减少。模型组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于对照组(P均<0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显低于对照组(P均<0.01);胃四联组、灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显高于模型组(P均<0.01);灭幽汤中剂量组、灭幽汤高剂量组小鼠胃组织中PTEN、FoxO3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于胃四联组(P均<0.01),PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA表达水平均明显低于胃四联组(P均<0.01),灭幽汤中剂量组与灭幽汤高剂量组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论灭幽汤可能通过PTEN-PI3K-Akt-FoxO信号通路抗幽门螺杆菌诱导的胃黏膜细胞凋亡而发挥治疗幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证的作用。

脓毒症心肌抑制大鼠PTEN-PI3K-Akt信号通路的激活对心肌组织损伤及凋亡的影响

目的探讨脓毒症心肌抑制大鼠心肌组织PTEN-PI3K-Akt信号通路的激活对大鼠心肌组织损伤及细胞凋亡的影响.方法采用盲肠结扎穿孔术构建脓毒症心肌抑制大鼠模型,并分成对照组、模型组及BPV干预组,每组10只.采用RT-PCR及Western blot检测心肌组织PTEN-PI3K-Akt信号通路关键因子磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、Akt-1、Cyclin D1 mRNA及蛋白的表达,采用TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡情况,采用HE染色观察不同组大鼠心肌组织结构.结果BPV干预组PTEN基因的mRNA及蛋白表达量较模型组下降(P<0.05),同时PI3K-Akt信号通路PI3K、Akt、Akt-1、Cyclin D1的mRNA及蛋白表达量上升(P<0.05);BPV干预组心肌组织细胞的凋亡率低于模型组(P<0.05).正常组大鼠心肌细胞结构整齐,无病理迹象;模型组大鼠心肌细胞呈现脓毒症心肌抑制的典型损伤特征;BPV干预组心肌损伤有所改善.结论激活PTEN-PI3K-Akt信号通路有助于减少细胞凋亡,改善心肌损伤.

基于PI3K-Akt-FoxO信号通路的四物汤对小鼠骨髓基质细胞凋亡的影响

目的观察四物汤对小鼠骨髓基质细胞OP9细胞凋亡和PI3K-Akt-FoxO信号通路分子及靶基因Bim基因表达的影响,以及使用PI3K选择性抑制剂LY294002阻断PI3K-Akt-FoxO信号通路后四物汤对上述指标的影响。方法流式细胞术检测四物汤对OP9细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR检测PI3K、Akt、FoxO、Bim mRNA表达水平,蛋白质免疫印迹法检测PI3K、Akt、p-Akt、FoxO、p-FoxO、Bim蛋白表达水平。结果与细胞对照组相比,四物汤组的细胞凋亡率显著降低(P<0.01);PI3K、Akt mRNA表达量显著上升(P<0.01,P<0.05),FoxO、Bim mRNA表达量显著下降(P<0.01);PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO蛋白表达水平显著上调(P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.05),FoxO、Bim蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。相较于四物汤组,LY294002+四物汤组凋亡率明显上升(P<0.01);PI3K、Akt mRNA表达量显著降低(P<0.01),FoxO、Bim mRNA表达量显著升高(P<0.01);PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO蛋白表达水平明显下调(P<0.01),FoxO、Bim蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。结论四物汤可能通过激活PI3K-Akt-FoxO信号通路,下调Bim基因表达,从而抑制小鼠骨髓基质细胞凋亡。

葛根素介导PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制绝经后骨质疏松症的机制研究

目的观察葛根素对去卵巢骨质疏松症小鼠骨组织形态的影响以及PTEN-PI3K-AKT信号通路的变化情况,并探讨其分子机制。方法选取10~12周龄,体重约20~25 g的C57BL/6雌性小鼠24只,随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(Ovx)、葛根素组(Pue)。术后8周,鉴定为骨质疏松模型后开始给药干预,连续给药12周,每组随机取6只小鼠采取颈椎脱臼法处死。取左侧股骨进行Micro-CT扫描并通过real-time PCR法检测骨组织内PTEN、Foxo1、catalase基因的相对表达量。取右侧股骨制成石蜡切片观察其形态结构并采用免疫组化方法观察骨组织中PTEN、P-AKT、catalase蛋白的表达情况。结果术后8周Ovx组,小鼠子宫萎缩变小、骨组织HE染色骨小梁明显稀疏、Micro-CT骨小梁断裂明显。给药后,Pue组骨小梁增多、骨髓腔缩小,骨连接增多;PCR结果表明,葛根素干预后PTEN、Foxo1、catalase基因表达上调(P<0.05,差异有统计学意义);免疫组化结果表明,PTEN、catalase蛋白表达上调,P-AKT蛋白下调,但变化差异不明显。结论葛根素可能通过介导PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制绝经后骨质疏松症。

番茄红素对脑缺血再灌注大鼠海马神经元PTEN-PI3K/Akt信号通路的影响

目的:探讨番茄红素对脑缺血再灌注(IR)大鼠海马神经元PTEN-PI3K/Akt信号通路的影响。方法:36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、番茄红素组,每组12只。除假手术组外,余2组线栓法制备脑IR模型。建模成功第2天开始,番茄红素组按10 mg/kg灌胃番茄红素1次/12 h,假手术组和模型组灌胃等剂量玉米油。治疗7 d后,制备脑组织冠状切片,TTC染色观察脑梗死面积;取海马组织行HE染色,TUNEL染色法检测海马神经元凋亡情况,Western blot法测定海马组织中PI3K、p-Akt、PTEN、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑梗死面积和凋亡细胞增加,海马组织中PTEN、Bax表达水平升高,PI3K、p-Akt、Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,番茄红素组脑梗死面积和凋亡细胞减少,海马组织中PTEN、Bax表达水平降低,PI3K、p-Akt、Bcl-2表达水平升高(P<0.05)。结论:番茄红素能够抑制IR大鼠海马神经元的凋亡,其作用可能与抑制PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路有关。

黄连-大黄-肉桂复方对肝癌细胞增殖及PTEN-PI3K-AKT/SGK1信号通路的影响

目的:观察黄连-大黄-肉桂复方对肝癌细胞增殖的抑制作用,并探索其作用机制。方法:采用醇提法提取黄连-大黄-肉桂复方药液,观察药物作用24 h后SMMC-7721人肝癌细胞株细胞形态的改变;通过MTT法检测不同浓度药物作用24 h、48 h和72 h对肝癌细胞增殖的影响;采用RTq PCR法检测肝癌细胞PTEN、AKT和SGK1基因的mRNA表达。结果:较低浓度的黄连-大黄-肉桂复方作用24 h对肝癌细胞的形态影响较小,而浓度增至2.1 mg/ml可使肝癌细胞部分固缩,大多细胞凋亡,其对肝癌细胞的恶性增殖具有显著抑制作用,并存在时效和量效关系,0.5 mg/ml药物作用48 h即可致肝癌细胞增殖半数得到抑制;药物作用后AKT mRNA表达明显降低,PTEN mRNA表达上调、SGK1 mRNA表达降低。结论:黄连-大黄-肉桂复方能有效抑制肝癌细胞的恶性增殖,且具有时效和量效关系;其抑制作用可能与调节细胞PTEN-PI3K-AKT/SGK1信号转导通路有关。

抑癌候选基因NDRG2对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调节作用

研究发现NDRG2具有多方面的抑癌作用,然而其背后的确切机制我们却知之甚少,经典的信号通路PI3K/AKT与肿瘤的发生发展有密切关系,了解NDRG2与PI3K/AKT信号通路的关系,可为进一步探究NDRG2的抑癌机制提供线索和思路。

从PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨补肾疏肝方含药血清抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移的机制

目的:通过研究补肾疏肝方含药血清对PTEN-PI3K-AKT信号通路的影响,探讨补肾疏肝方抑制肺腺癌细胞增殖和转移作用机制。方法:大鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为生理盐水组(NS为2 m L),顺铂组(8 mg·kg-1),补肾疏肝方低剂量组(15 g·kg-1),补肾疏肝方高剂量组(30 g·kg-1),联合顺铂低剂量组(15 g·kg-1+8 mg·kg-1),联合顺铂高剂量组(30 g·kg-1+8 mg·kg-1),每只大鼠ig,2 m L,每天2次,共5 d。制备药物血清:经药物作用后的大鼠,经腹主动取血,分离血清,灭活,过滤,冻存。MTT法检测补肾疏肝方含药血清对A549细胞增殖的影响。三维细胞培养观察并计数各组细胞形成管状结构数量。RT-PCR检测含药血清对A549肺腺癌细胞AKT-1,Cyclin D1,NF-κB mRNA水平的表达,Western blot检测含药血清对PTEN,p-PI3K,p-AKT蛋白水平的表达。结果:低剂量补肾疏肝方含药血清对A549细胞有抑制作用,低剂量中药与顺铂联用有协同作用且以时间依赖方式,即补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组在48,72,96 h的抑制率均高于其他组(P<0.05,P<0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组拟态血管数目均低于其他组(P<0.05,P<0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组PTEN蛋白表达均高于其他组(P<0.05,P<0.01),补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组p-PI3K,p-AKT蛋白,Akt1,Cyclin D1,NF-κB的mRNA表达均低于其他组(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾疏肝方含药血清可通过PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移。

黄芪多糖减轻糖尿病性肌少症大鼠肌肉萎缩的作用机制研究

[目的]探究黄芪多糖通过作用于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)-叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)信号通路及相关炎症因子对糖尿病性肌少症大鼠肌肉萎缩的改善及治疗作用。[方法]一次性链脲佐菌素腹腔注射构造糖尿病动物模型,随机分为模型组、黄芪多糖组和二甲双胍组,另设置无干预正常组,分组给药3个月,实验结束后进行腓肠肌苏木精-伊红(HE)染色;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)/AKT及FOXO1蛋白含量;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测白细胞介素(IL-6)、抑癌基因TP53、热休克转录因子1(HSF1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平;检测血清生化指标三酰甘油(TG)。[结果]与模型组相比,黄芪多糖组腓肠肌肌细胞明显改善,细胞体积变大、间隙变窄,炎性渗出显著减轻;另外,黄芪多糖组的糖尿病保护因子P-AKT/AKT、FOXO1蛋白含量明显上升;炎性因子IL-6、TP53、HSF1及MMP-9含量明显下降。在血脂方面,西药二甲双胍组TG下降更加明显。[结论]黄芪多糖可能通过PI3K-AKT-FOXO1信号通路,降低IL-6、TP53炎性因子水平,影响HSF1和MMP-9的活性,从而改善糖尿病性肌少症大鼠的肌肉萎缩。

沉默lncRNA TPT1-AS1对非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及对沉默lncRNA TPT1-AS1非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制。方法检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织lncRNA TPT1-AS1表达情况,做细胞培养及lncRNA TPT1-AS1转染,分为空白组、过表达组、沉默组,过表达组转染si-TPT1-AS1-NC质粒,沉默组转染si-TPT1-AS1质粒,空白组细胞不做任何处理,转染24h后鉴定转染效率。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及PTEN-PI3K-AKT信号通路蛋白表达情况。结果与癌旁组织相比,癌组织TPT1-AS1 mRNA表达量升高(P<0.05)。与空白组相比,过表达组TPT1-AS1 mRNA表达量升高,沉默组TPT1-AS1 mRNA表达量降低(P<0.05),说明转染成功。与过表达组相比,沉默组各时间点细胞增殖率、细胞迁移数、侵袭数、p-PI3K、p-AKT、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,凋亡率、PTEN、Bax蛋白表达量升高(P<0.05)。结论lncRNA TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织高表达,沉默lncRNA TPT1-AS1可抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与调控PTEN-PI3K-AKT信号通路相关。

卵巢癌的二元论及其相关蛋白表达差异

目的比较E-钙粘附素(E-Cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)以及P53蛋白,在低级别浆液性癌(LGSC)、高级别浆液性癌(HGSC)、早期透明细胞癌(ECCC)与晚期透明细胞癌(ACCC)中表达的差异,探讨卵巢癌(OC)的二元论发病机制。方法收集我院2002年1月~2017年11月100例OC石蜡包埋组织,应用M.D.Anderson癌症中心的两级组织学分级系统将卵巢浆液性癌(OSC)进行分级,运用国际妇产科联盟(FIGO)分期系统将OC分期,采用免疫组织化学法检测22例LGSC、38例HGSC、20例ECCC以及20例ACCC组织中E-Cadherin、β-Catenin、PTEN、PI3K110α、p-AktSer 473以及P53蛋白表达,并结合临床病理特征进行统计分析。结果E-Cadherin、β-Catenin蛋白表达在LGSC与HGSC以及ECCC与ACCC之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。PTEN、PI3K110α、p-AktSer 473以及P53蛋白表达在LGSC与HGSC以及ECCC与ACCC之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在LGSC与ECCC中E-Cadherin、β-Catenin蛋白表达均呈负相关(P<0.05),在HGSC中PTEN与PI3Kp110α、p-AktSer473以及P53蛋白表达均呈负相关(P<0.05),在ECCC中PTEN与PI3Kp110α以及p-AktSer473蛋白表达均呈负相关(P<0.05)。发病年龄≤50与>50、G1~2与G3以及Ⅰ~Ⅱ与Ⅲ~Ⅳ期在LGSC与HGSC以及ECCC与ACCC之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论E-Cadherin蛋白表达的缺失和β-Catenin蛋白的过度激活共同参与LGSC以及ECCC的发生、发展,而PTEN蛋白表达的缺失,PI3K110α以及p-AktSer 473蛋白的过度激活共同参与HGSC及ECCC的发生、发展,P53蛋白的过度激活参与HGSC及ACCC的发生、发展,这为探讨OC的二元论发病机制、临床诊治以及预后判断提供了依据。

沉默神经元HIF-1α和PTEN的表达对体外培养的大鼠神经元氧糖剥夺损伤的影响

目的利用RNA干扰技术分别沉默神经元中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和磷酸酶并和张力蛋白同源物(PTEN)基因,论证它们在神经元体外氧糖剥夺(OGD)损伤后的功能调控作用。方法构建并筛选靶向HIF-1α及PTEN基因的shRNA慢病毒载体;提取并将原代神经元分为4组:(1)NC组,仅加空载病毒;(2)NC+OGD组,加空载病毒后缺氧;(3)Si-hif-1α+OGD组,加Si-hif-1α病毒后缺氧;(4)Si-pten+OGD组,加Si-pten病毒后缺氧,均在培养第3天感染病毒,第7天OGD损伤模拟细胞缺氧。缺氧后24 h行荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测干扰效率,行乳酸脱氢酶(LDH)检测及AnnexinV-FITC/PI检测神经元细胞损伤、凋亡变化,Western blot检测相应蛋白表达变化。结果慢病毒介导的shRNA能有效沉默目的基因mRNA的表达;HIF-1α沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡加重,PTEN蛋白的表达升高,p-PTEN、p-AKT、NR2A及VEGFa表达降低(P<0.05);PTEN沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡有所减轻,p-PTEN、p-AKT表达升高(P<0.05),HIF-1α、NR2A及VEGFa的表达无显著变化(P>0.05)。结论慢病毒介导的shRNA能有效沉默神经元HIF-1α及PTEN的表达,逆转神经元缺氧损伤中HIF-1α升高对PTEN活性的抑制,参与神经元损伤调控。