甲状旁腺激素相关蛋白mRNA在髁突软骨与生长板软骨发育早期的表达变化

目的研究甲状旁腺激素相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)mRNA在髁突软骨与生长板软骨发育早期的表达变化,初步探讨PTHrP在软骨内成骨中的作用。方法选用胚胎SD大鼠的髁突软骨与生长板软骨作为研究对象,采用原位杂交染色法检测发育早期两种软骨内PTHrP mRNA表达,以图像分析仪进行图像分析。结果胎龄14～19 d,随着软骨发育的成熟,PTHrP mRNA在生长板软骨和髁突软骨中的表达越来越广泛并呈现一定的时空变化,但PTHrP mRNA在两种软骨中的表达部位存在一定的差异。在髁突软骨中,PTHrP mRNA在增殖层和前肥大层强表达;在生长板软骨中,其主要表达在软骨膜细胞和关节周围的软骨细胞,前肥大层中也有较强的表达,增殖层弱表达或不表达。结论 PTHrP mRNA在生长板软骨和髁突软骨中表达部位不同,但均呈现一定的时空变化,提示PTHrP对不同分化阶段的软骨细胞具有一定的调节作用。

PTHrP基因靶向RNA干扰重组表达质粒的构建鉴定以及在HTB-94细胞中的功能检测

目的构建针对目的基因PTHrp的pSilencer3.1-H1neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒,并在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中观察其干扰效果。方法设计并合成针对PTHrP基因编码区的含有发卡结构的互补的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamHⅠ,HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3.1H1neo中,对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定。结果双酶切证实PTHrP siRNA表达质粒克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,同时干扰了PTHrP基因的mRNA和蛋白的表达。结论成功构建的靶向RNA干扰重组表达质粒,可以通过小RNA序列干扰靶向基因的mRNA转录,降低靶向基因在细胞中mRNA和蛋白的表达。

动态压应力对生长板软骨前体干细胞PTHrP及细胞外基质mRNA表达的影响

目的 研究动态压应力对体外培养的大鼠生长板软骨前体干细胞甲状旁腺激素相关肽（PTHrP）以及软骨特性细胞外基质mRNA表达的影响.方法 免疫磁珠分选并体外培养大鼠软骨前体干细胞,用自行设计制作的可控细胞压力加载装置对细胞进行不同强度（30 mmHg、60 mmHg、90mmHg）和持续时间（1 h、6 h、24 h）的压应力刺激,未刺激组为对照组,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术分别检测各组细胞的PTHrP以及软骨特性细胞外基质（Ⅱ型胶原、X型胶原以及aggreean）mRNA表达并进行半定量分析.结果 生长板软骨前体干细胞在30 mmHg、60 mmHg、90 mmHg动态压力培养环境下,各时间点PTHrP、Ⅱ型胶原以及aggrecan mRNA表达水平明显增强并高于对照组（P〈0.05）;Ⅱ型胶原以及aggrecan mRNA表达水平于6h达高峰,PTHrP mRNA的表达水平随时间增加而增强,24 h仍有较高水平的表达;且压力值越大,相同时间点mRNA相对表达量越高.X型胶原表达水平较低且与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 适当的动态压应力能有效促进体外培养的大鼠软骨前体干细胞Ⅱ型胶原及aggreean mRNA表达,PTHrP在此力学信号转导过程中可能起重要的作用.