Hsa_circ_0016600通过调控miR-149/PTK7轴促进甲状腺癌细胞迁移的机制

目的:探究环状RNA hsa_circ_0016600对甲状腺癌细胞迁移的影响及其作用机制。方法:收集温州医科大学附属第二医院颈部外科收治的15例甲状腺癌患者的癌组织及正常组织标本,采用RT-qPCR法检测hsa_circ_0016600、miR-149和PTK7在甲状腺癌组织及甲状腺细胞系中的表达情况。体外培养甲状腺癌细胞系,分别敲低hsa_circ_0016600和过表达miR-149,采用CCK-8、Transwell和划痕实验检测甲状腺细胞增殖、迁移和侵袭能力。建立小鼠异种移植皮下瘤模型,观察敲低hsa_circ_0016600的甲状腺癌细胞在体内的成瘤作用,并利用荧光原位杂交实验检测hsa_circ_0016600在裸鼠移植瘤模型中的表达水平。采用RNA荧光原位杂交实验检测hsa_circ_0016600和miR-149在甲状腺癌细胞中的定位,双荧光素酶报告基因实验检测hsa_circ_0016600与miR-149及miR-149与PTK7的靶向调控关系。结果:在人甲状腺癌组织和细胞系中,hsa_circ_0016600(P<0.05)和PTK7表达上调(P<0.01),miR-149表达下调(P<0.05)。敲低hsa_circ_0016600表达后,甲状腺癌细胞的增殖(P<0.01)、侵袭(P<0.01)和迁移能力(P<0.01)受到抑制。hsa_circ_0016600可通过靶向miR-149促进甲状腺癌细胞的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.01)和血管形成,并上调PTK7的表达(P<0.01)。此外,PTK7是miR-149的一个靶基因。结论:Hsa_circ_0016600在甲状腺癌组织和细胞中高表达,并通过调控miR-149/PTK7轴促进甲状腺癌细胞的迁移。

Abl-PTK酪氨酸激酶区基因的克隆与表达

目的 克隆、表达出PTK重组蛋白 ,以鉴定酪氨酸激酶 (PTK)的活性 ,筛选酪氨酸激酶的抑制剂。方法 从PTK重组克隆载体上切下目的基因片段Abl PTK使其连接到表达载体pGEX4T 2上 ,转化大肠杆菌DH5a ,筛选鉴定出正确的转化子。转化菌株经IPTG诱导后进行表达并进行SDS PAGE分析。结果 经酶切和诱导表达鉴定 ,重组质粒pGEX4T 2 PTK构建成功 ,并高效表达了 5 8KD的GST PTK融合蛋白。结论 PTK基因被成功地重组至融合蛋白表达载体中 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。该研究为进一步纯化、鉴定PTK的活性 ,筛选PTK的抑制剂奠定了基础。

基于GPS-PTK技术的变电站故障高精度定位方法

为了提高变电站故障高精度定位能力,提出基于GPS-PTK技术的变电站故障高精度定位方法。构建变电站故障高精度特征分布式融合模型,结合对变电站故障稳态信息采集样结果,提取变电站故障特征分布的谱信息分量,考虑涌流的衰减过程,实现变电站故障的属性类别辨识;通过对变电站故障分布的涌流波形状态分布,采用GPS-PTK技术进行变电站故障特征聚类,根据特征聚类结果,实现对变电站故障高精度定位。仿真结果表明,采用该方法进行变电站故障定位的效率较高,检测定位性能误差率较低,提高了变电站故障的准确识别和诊断能力。

PTK重组质粒的构建与表达

目的构建并表达出PTK重组蛋白,以鉴定酪氨酸蛋白激酶(PTK)的活性,筛选酪氨酸激酶的抑制剂。方法从PTK重组克隆载体上切下目的基因片段Abl-PTK使其连接到表达载体pGEX4T-2上,转化大肠杆菌DH5a,筛选鉴定出正确的转化子。转化菌株经IPTG诱导后进行表达并进行SDS-PAGE分析。结果经酶切和诱导表达鉴定,重组质粒pGEX4T-2-PTK构建成功,并高效表达了58KD的GST-PTK融合蛋白。结论PTK基因被成功地重组至融合蛋白表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达。该研究为进一步纯化、鉴定PTK的活性,筛选PTK的抑制剂奠定了基础。

TCRVβ基因亚家族的优势取用和PTK信号传导途径的激活及体外对肝癌细胞凋亡的诱导

目的 :研究特异识别肝癌细胞株肿瘤相关抗原的TCRVβ基因亚家族的优势取用及对肝癌细胞凋亡的诱导。 方法 :流式细胞术检测淋巴细胞表型 ,RT PCR和Southern印迹分析TCRVβ基因亚家族表达水平 ,Westernblot检测PTK含量。透射电镜观察凋亡细胞超微结构。结果 :McAb共刺激T细胞与肝癌细胞混合培养后 ,T细胞表面CD3和CD8分子表达量明显升高 ,而CD4无明显变化。TCRVβ7选择性扩增 ,表达水平由 5 %升高至 13 %～ 2 5 % ,且在第 4天达到高峰。同时相应的PTK信号传导途径被激活 ,其含量由 11%升至 5 8% ,亦在第 4,5天达到高峰。以抗CD3+CD2 8,抗CD2 8+CD80 ,抗CD2 +CD5 8共刺激的淋巴细胞均在体外诱导了肝癌细胞的凋亡。结论 :TCRVβ7为特异的肿瘤抗原识别受体 ,TCR CD4复合物与抗原结合后激活PTK信号传导途径 。

PTK787对K562细胞增殖及fak mRNA表达的影响

本研究旨在观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787对K562细胞增殖、细胞周期和fak mRNA表达的影响,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制。应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法观察不同浓度PTK787在不同时间对K562细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测各浓度PTK787对K562细胞周期的影响,应用RT-PCR技术检测各浓度PTK787对K562细胞fak mRNA表达水平的影响。结果表明:随着PTK787浓度增加与作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高。同一时间不同浓度组之间比较,或者同一浓度不同时间组之间比较,差异均有统计学意义(p<0.05),其中PTK787作用48小时,以浓度320μmol/L对细胞抑制率最高,继续增加浓度或延长作用时间抑制率增加均不明显。随着PTK787浓度增加,G1期细胞比例逐渐升高,S期细胞比例逐渐下降,各组间比较有明显差异(p<0.05)。PTK787浓度由160μmol/L继续升高,对K562细胞周期的改变不明显。随着PTK787浓度增加,K562细胞的fak mRNA表达逐渐降低,组间比较差异有统计学意义(p<0.05)。PTK787浓度由160μmol/L继续升高,对K562细胞fak mRNA表达的影响亦不明显。结论:PTK787可以抑制K562细胞增殖,阻止K562细胞由G1期向S期转化,降低fak mRNA表达水平,从而达到抗白血病细胞的作用。

痹颗粒对RA-MsPGN大鼠肾组织PTK活性的影响

目的探讨痹颗粒对RA-MsPGN大鼠模型肾组织PTK活性的影响,治疗RA-MsPGN的作用机制。方法按照Phospho Safe TM ExtR Action Reagent试剂盒提取蛋白质,按照K-LISA PTK Screening Kit试剂盒测定蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性,并根据检测试剂盒提供的标准品直线回归方程计算PTKs的含量。结果RA-MsPGN模型大鼠与正常组相比肾组织PTK含量显著升高(P<0.001),雷公藤多苷片和痹颗粒各剂量组均能显著降低大鼠肾组织PTK含量(P<0.05或0.01)。结论痹颗粒对RA-MsPGN大鼠肾组织PTK活性有明显抑制作用,其治疗作用有可能是通过对PTK的作用而实现的。

PTK对跨膜型与分泌型TNF-α诱导中性粒细胞功能的调节作用

目的:研究酪氨酸磷酸化激酶（PTK）对跨膜型〔TM-TNFα）与分泌型TNF-α（S-TNF-α）诱导中性粒细胞呼吸爆发和NO释放的影响。方法:用化学发光法检测呼吸爆发,用硝酸还原酶法定量检测释放的NO,在体外观察PTK抑制剂对两型TNF-α诱导中性粒细胞以上功能的影响,并用Western印迹比较两型TNF-α诱导中性粒细胞蛋白酪氨酸磷酸化的异同。结果:PTK抑制剂Genistein（50 μmol/L）不仅可明显抑制S-TNF-α诱导的中性粒细胞呼吸爆发（P<0.005）,也可明显抑制TM-TNF-α诱导的中性粒细胞产生NO（P<0.001）。Western印迹显示大约17KD处,S-TNF-α介导的酪氨酸磷酸化条带比对照略强,而TM-TNF-α介导的酪氨酸磷酸化条带则明显增强;约于31 kD处,出现由TM-TNF-α介导的酪氨酸磷酸化的特异性条带,而在其它处理组则均未发现。结论:两型TNF-α对中性粒细胞功能的影响均依赖于PFK的激活;但二者诱导酪氨酸磷酸化的程度及酪氨酸磷酸化的靶分子则存在差异。

蛋白酪氨酸激酶PTK7在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

背景与目的:新近发现的蛋白酪氨酸激酶-7(protein tyrosine kinase-7,PTK7)基因与多种肿瘤的发生、发展和浸润有关。本研究旨在探讨PTK7在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其与临床分期、组织学分级、转移和预后等指标的关系,分析PTK7表达在卵巢浆液性肿瘤中的诊断及预后价值。方法:制备3株卵巢癌细胞系(HO8910、SKOV3、A2780)爬片,并收集14例正常输卵管上皮组织,6例良性浆液性卵巢肿瘤,51例交界性浆液性卵巢肿瘤和97例卵巢浆液性癌组织蜡块,采用免疫组化EliVision两步法检测PTK7蛋白的表达,结合相关病理指标,采用χ2检验、Fisher确切概率法、Kaplan-Meier法进行统计分析。结果:PTK7在卵巢癌细胞株HO8910及A2780中呈阴性表达,在SKOV3中成弱阳性表达。PTK7在92.86%(13/14)的正常输卵管上皮、83.33%(5/6)的良性浆液性卵巢肿瘤、45.10%(23/51)的交界性浆液性卵巢肿瘤和28.87%(28/97)的浆液性卵巢癌中阳性表达。正常输卵管上皮与良性浆液性肿瘤、良性浆液性肿瘤与交界性浆液性肿瘤之间PTK7表达差异无统计学意义(P=0.521,P=0.102)。浆液性卵巢癌与正常输卵管上皮、良性浆液性肿瘤以及交界性浆液性肿瘤之间PTK7表达差异有统计学意义(P=0.000,P=0.012,P=0.048)。PTK7在交界性浆液性卵巢肿瘤中的表达与其临床分期、淋巴结和(或)腹膜转移情况有关(P=0.038,P=0.038),与其发生部位、年龄无关(P=0.088,P=0.896)。PTK7在卵巢浆液癌中的表达与其临床分期、WHO分级、MDACC病理分级有关(P=0.011,P=0.004,P=0.000),与其发生部位、转移情况、肿瘤直径、年龄无关(P=0.326,P=0.524,P=0.588,P=0.584)。卵巢浆液癌中PTK7阳性组的生存率显著高于阴性组(P=0.017)。结论:PTK7在输卵管正常上皮、良性浆液性卵巢肿瘤、交界性浆液性卵巢肿瘤和浆液性癌中表达呈逐步下调趋势。PTK7表达与卵巢上皮性浆液性肿瘤的较晚临床分期、高组织分级、预后差呈正相关,可能成为卵巢浆液性肿瘤辅助诊断及临床预后的新指标。

PTK联合PRK治疗LASEK术后病毒性角膜炎致角膜白斑1例

患者男性，36岁。于2011年4月8日在我院行双眼激光上皮下角膜磨镶术（1asersubepithelialkeratomileusis，LASEK），术前近视右眼：-6．25DS／-0．50DC×30。矫正1．0；左眼：-6．50／-0．50×145矫正1．0。A超查角膜中央厚度：

PKC和PTK对肺癌患者肺泡巨噬细胞免疫功能调节研究

目的 :研究肺癌患者肺泡巨噬细胞 (Alveolarmacrophage ,AM)内蛋白激酶C(ProteinkinaseC ,PKC)、酪氨酸蛋白激酶 (Proteintyrosinekinase,PTK)信号传导机制对AM抗肿瘤免疫功能的调节作用。方法 :收集肺癌患者及对照组慢性肺病患者支气管肺泡灌洗液中AM ,加入粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (Granulocytemacrophagecolonystimulatingfactor,GM -CSF)、PKC抑制剂staurosporine、PTK特异性阻断剂genistein培养4 8h ,用ELISA方法检测上清液中的肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)和酶法检测NO含量。以慢性肺病患者为对照组。结果 :GM -CSF刺激后两组TNF -α、NO含量都有显著增加 (P <0 .0 5 ) ,加入staurosporine或genistein培养后 ,TNF -α、NO含量显著减少 (P <0 .0 1)。结论 :PKC、PTK信号传导途径在GM -CSF促AM抗肿瘤免疫功能中起重要作用。

PtK2细胞的核骨架—核纤层——中间纤维体系

本文用选择性系列抽提的方法结合整装细胞电镜技术和DGD包埋-去包埋超薄切片技术,在电镜下清晰地显示了PtK 2细胞的核骨架-核纤层-中间纤维体系的精细结构。处于分裂中期的细胞经抽提后可以看到,染色体残余与中间纤维仍然保持一定的联系。用免疫荧光技术对抽提后的PtK 2细胞进行分析结果表明:其中间纤维能同时与AE1和AE3反应;能与Lamin B反应的单抗可以特异地定位于其核周,而Lamin A(C)的单抗除了与其核纤层蛋白有很强的反应外还与中间纤维有交叉反应。此外,在分裂期细胞中可以看到Lamin A(C)可能与染色体能特异结合;与HeLa细胞不一样。PtK 2细胞的核骨架成份不能与280kD的核骨架蛋白单抗反应。双向电泳结果显示出PtK 2细胞的核骨架-核纤层-中间纤维体系的组成成份与HeLa细胞相比有较大的差异,而且这种差异主要反映在核骨架组份上,TdR的处理也能导致其组份发生变化。

乙二胺四乙酸螯合联合PTK及羊膜移植术治疗眼内硅油填充术后带状角膜变性的临床疗效观察

目的评估乙二胺四乙酸(EDTA)螯合联合激光治疗性角膜切削术(PTK)及羊膜移植术治疗眼内硅油填充术后带状角膜变性的临床疗效。方法收集2009年至2011年EDTA螯合联合PTK及羊膜移植术治疗眼内硅油填充术后并发带状角膜变性的6例(7只眼)患者临床资料,对手术前后最佳矫正视力、症状有无改善、上皮重建时间、外观、并发症进行回顾性分析。结果视力提高2只眼(28.5%),视力无提高5只眼(71.5%),所有患者症状均有改善,平均上皮重建时间为(10.6±2.4)d,外观较好5只眼(71.5%),外观改善一般的2只眼(28.5%),术后追踪随访时间平均为(11.1±4.0)个月,没有发现术后并发症以及复发。结论 EDTA螯合联合PTK及羊膜移植术对于治疗眼内硅油填充术后带状角膜变性是有效的。

准分子激光PTK治疗复发性角膜上皮糜烂

目的:探讨准分子激光治疗性角膜切削术(excimer laser phototherapeutic keratectomy,PTK)治疗角膜上皮糜烂的方法和疗效。方法:选择9例11眼复发性角膜上皮糜烂(recurrent corneal erosiou)患者,行准分子激光治疗性角膜切削术(PTK),戴治疗性角膜接触镜5~7d,随访3mo^3a。结果:9例11眼中8例10眼一次性痊愈,1例1眼再次PTK治疗痊愈。结论:PTK是治疗复发性角膜上皮糜烂简便有效的方法。

PTK治疗双眼近视伴颗粒状角膜营养不良1例

0引言 角膜营养不良是一组少见的遗传性、双眼性、原发性的具有病理组织特征改变的疾病，与原来的角膜组织炎症或系统性疾病无关。颗粒状角膜营养不良（GCD）是角膜营养不良之一，是一种罕见的常染色体显性遗传性疾病，目前暂无有效治疗手段。其病理组织学具有特征性，角膜颗粒为玻璃样物质，颗粒物的确切性质和来源仍然不清，可能是细胞膜蛋白或磷脂异常合成或代谢的产物。我们对1例近视伴角膜颗粒状营养不良患者行准分子激光治疗性角膜切削术（PTK）联合治疗，取得较满意的效果，现报告如下。

PTK抑制剂对TGFα刺激的胃癌细胞增殖和DNA合成的抑制作用

目的探索蛋白酪氨酸激酶(PTK）剂Tyrphostin51对TGFα刺激的胃癌细胞增殖和DNA合成的抑制作用。方法利用细胞体外培养技术，观察PTK抑制剂Typhostin51对胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用，用3H-TdR掺入法检测其对细胞DNA合成的影响；探索其对TGFα刺激的细胞生长和DNA合成的抑制效应。结果在TGFα刺激下，SGC7901增殖加快，细胞生长曲线上移，DNA合成增加；在Tyrphostin51作用下，细胞增殖有所减慢，生长曲线稍下移，DNA合成也减少；而TGFα刺激的细胞生长和DNA合成明显地被Tyrphostin51所抑制。结论PTK抑制剂Tyrphostin51能减缓血清刺激、明显抑制TGFα刺激的胃癌SGC7901细胞生长和DNA合成。

Genistein和乳腺癌干细胞PTKs信号转导通路的研究进展

饮食中的genistein在降低亚洲人乳腺癌的发病率上有很重要的作用。最新研究表明genistein抑制乳腺癌细胞生长是通过调节细胞的增殖、分化和凋亡等相关信号转导通路来完成的。乳腺癌干细胞可能是乳腺癌发生耐药、复发及转移的根源。近年来发现乳腺癌干细胞相关信号转导通路复杂且涉及面广泛,其中蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)信号转导通路在癌干细胞中的异常过表达,是引起癌基因转化、肿瘤生长的重要因素之一。因此,Genistein和乳腺癌干细胞相关的PTKs信号转导通路之间的关系也越来越受到关注,对寻找更为有效的乳腺癌靶向治疗具有重要意义。

PTK787在SCID小鼠-人AML模型中的抗骨髓血管生成作用研究

目的观察酪氨酸激酶抑制剂PTK787在SCID小鼠-人急性髓系白血病模型中对血血管内皮生长因子受体-2mRNA(VEGFR-2mRNA)、外周血CD33阳性表达率以及骨髓微血管密度的影响,探讨PTK787抗急性髓系白血病的作用机制。方法(1)采用RT-PCR法分析30例不同组别之间SCID小鼠VEGFR-2mRNA水平的差异。(2)利用流式细胞仪检测外周血CD33表达。(3)采用SP免疫组化法,用兔抗人vWF(vonWille-brandfactor)多克隆抗体标记骨髓内皮细胞,比较不同组别小鼠之间的骨髓微血管密度(MVD)的差异。结果(1)患病组SCID小鼠外周血VEGFR-2mRNA灰度扫描比为(0.3257±0.0709),高于正常组(0.0826±0.0315)(P<0.05),治疗组为(0.1411±0.0404),与正常组比较(P<0.05)。(2)外周血白细胞CD33的阳性率,治疗组(9.41±1.35%)及患病组(15.08±2.90%)与正常组(0.81±0.11%)比较,P值均<0.01,差异有统计学意义;治疗组与患病组比较,P<0.05,差异有统计学意义。(3)患病组SCID小鼠中骨髓微血管数为(20.4±3.2)个/HP,显著高于正常组(14.2±2.1)个/HP(P<0.001),治疗组为(15.6±2.4)个/HP,与正常组相似(P>0.05)。结论PTK787在体内可以有效的抑制血管生成,一定程度具有抗白血病细胞增生的作用。

PRK联合PTK治疗近视伴颗粒状角膜营养不良(附1例报告)

目的介绍准分子激光角膜切削术(PRK)联合准分子激光治疗性角膜切削术(PTK)治疗近视伴颗粒状角膜营养不良患者的方法及疗效。方法先用PTK模式削除患者浅层病变角膜组织后,再用PRK模式对近视进行治疗。比较术前、术后患者角膜透明性和视力情况。结果经手术治疗后患者角膜混浊较术前明显减少,术后视力恢复至1.0。结论PRK联合PTK治疗近视伴颗粒状角膜营养不良具有良好的疗效,但远期疗效还需长期观察。