利用流式细胞术检测线粒体PTP开放

用线粒体膜电位特异性荧光探针Rhodamine123标记线粒体后 ,在改装FACS420流式细胞仪上用C -30数据采集和储存程序采集并存储数据 ,用C -30分析程序分析得到反映线粒体前散射 (FSC)、Rhodamine123荧光强度和侧散射 (SSC)变化的FSC,FL1和FL2合并图。结果显示 ,200μmol/LCa2 + 处理20分钟使线粒体同时发生FSC增大、Rhodamine123荧光强度降低和SSC增大。结果表明 ,流式细胞术可同时检测到Ca2 +诱导PTP开放产生的线粒体膨胀 ,膜电位消失 ,线粒体颗粒性状改变。本方法可多指标测定 ,实验过程快速 ,结果准确可靠 ,所需样品量小 ,是一种理想的PTP开放检测手段。

烟草赤星病菌代谢产物诱导的烟草BY-2细胞ROS爆发和ATP损耗

【目的】探讨赤星病菌代谢产物(metabolic products of Alternaria alternata,MP)对烟草BY-2细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生和ATP含量的影响以及产生这种影响的原因。【方法】用10%MP处理烟草BY-2细胞,用氧电极检测不同MP处理时间后,烟草BY-2细胞呼吸速率和呼吸途径的变化,同时分析BY-2细胞内H2O2产生和ATP含量等的变化。【结果】MP处理导致了烟草BY-2细胞H2O2爆发和ATP含量下降,此外,MP处理也导致了烟草BY-2细胞总呼吸速率、细胞色素途径(cytochrome pathway)和交替氧化酶途径(AOX)的下降,并且造成线粒体通透转换孔道(permeability transition pore,PTP)开放和细胞色素c释放。【结论】MP对BY-2细胞呼吸速率和细胞色素途径的抑制不可避免地导致胞内ATP含量下降,此外MP诱导的烟草BY-2细胞氧化磷酸化的解偶联作用是MP导致胞内ATP含量下降的另一重要原因。而MP对AOX途径的抑制则是诱导胞内ROS爆发的重要原因。