PU-H71对结直肠癌HCT-15细胞凋亡和周期的影响

目的探究PU-H71对结直肠癌HCT-15细胞增殖、凋亡、周期等生物学行为的影响,在分子水平探讨HCT-15细胞凋亡和周期的作用机制。方法体外培养人结直肠腺癌HCT-15细胞,MTT检测不同时间点和浓度的PU-H71对结直肠癌HCT-15细胞增殖的作用;流式细胞术检测细胞凋亡和周期;Western blot检测相关因子的表达水平。结果PU-H71作用24h和48h后,对结直肠癌HCT-15细胞有显著的抑制作用,并有明显的时间和浓度依赖性;设置不同浓度组作用24h后,HCT-15细胞凋亡率上升且处于G2期的细胞增多;STAT3和JAK2蛋白的表达水平明显下降,周期及凋亡相关因子CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平下降,Cytc、Caspase9、Caspase3、Bax蛋白表达水平上调。结论PU-H71对结直肠癌HCT-15细胞的增殖有明显的抑制作用,使细胞G2周期阻滞并诱导凋亡。PU-H71有可能通过负向调控JAK-STAT3途径来调控线粒体信号通路,以此影响凋亡和周期相关因子的表达。

PU-H71对增加宫颈癌细胞辐射敏感性的研究

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂PU-H71联合X射线照射对辐射抗性人宫颈癌细胞的作用。方法利用生物信息学分析Hsp90基因在宫颈癌组织和癌旁组织中的表达。通过分次照射法(2 Gy/次, 共30次)获得辐射抗性的宫颈癌细胞系HeLa RR和SiHa RR, 将细胞分为对照组(二甲基亚砜处理)、单纯照射组、PU-H71组(0.5 μmol/L PU-H71处理)、PU-H71+照射组(0.5 μmol/L PU-H71处理24 h后给予照射)。利用克隆形成法检测细胞存活。细胞处理后1、6、24 h, 用免疫荧光法检测γH2AX聚焦点。细胞处理后1、2、6、12、24 h, 利用蛋白质印迹法检测Rad51的表达;细胞处理后2 h, 检测磷酸化的DNA依赖蛋白激酶催化亚基(p-DNA-PKcs)的蛋白质表达。细胞处理后48 h, 流式细胞术检测细胞凋亡。结果 PU-H71增强了辐射抗性宫颈癌细胞对X射线的敏感性。与单纯照射组相比, PU-H71+照射组HeLa RR和SiHa RR细胞, 在10%存活下的辐射增敏比(SER)分别为1.36和1.27, 而凋亡率分别提高了约72.1%和63.1%。PU-H71使辐射诱导的γH2AX聚焦点的持续时间延长, 抑制了DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)的磷酸化, 从而限制非同源末端连接(NHEJ)修复, 同时延迟了同源重组修复。结论 PU-H71通过抑制DNA双链断裂修复途径, 增加了辐射抗性宫颈癌细胞的辐射敏感性, 有望作为一种增强宫颈癌放射治疗疗效的放射增敏剂。

热休克蛋白90对结肠癌荷瘤小鼠肝脏功能的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)在结肠癌介导肝脏损伤中的作用,为HSP90抑制剂的临床应用提供一定的数据支持。方法健康的SPF级BALB/C雄性6-8周龄小鼠20只,将5×10^(6)结肠癌CT-26细胞接种至小鼠右后腿外侧,实验采用随机分组,分为对照组和PU-H71组,每组各10只,PU-H71组经尾静脉给药(2mg/kg),每周2次,持续给药2周,对照组给予等量生理盐水。通过HE染色从病理学角度确定肝损伤程度;采用试剂盒检测小鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量变化;通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析血清中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化;最后,通过qPCR分析肝脏组织中线粒体自噬相关基因PINK、Parkin、p62和LC3的表达变化。结果相较于对照组,PU-H71处理组血清中AST、ALT和MDA含量明显降低(P<0.05),同时SOD含量明显升高(P<0.05);病理学结果显示PU-H71小鼠,肝小叶结构相对完整,肝血窦变窄程度较弱,相对清晰可见,肝细胞肿胀程度较轻;血清中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达明显降低(P<0.05);肝组织中线粒体自噬相关基因PINK、Parkin、p62和LC3的表达明显升高(P<0.05)。结论抑制HSP90可能通过调控肝细胞线粒体自噬影响结肠癌荷瘤小鼠肝功能。