PUMA蛋白在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的检测PUMA蛋白在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平,从而探讨其在结肠癌发生、发展中的作用及其临床意义。方法针对40例结肠癌组织标本及30例癌旁正常组织标本,通过免疫组化方法对其PUMA蛋白的表达进行测定。结果 PUMA蛋白在结肠癌组织中的表达阳性率为22.5%(9/40),在癌旁正常结肠组织中表达阳性率为66.7%(20/30),PUMA蛋白的表达与结肠癌临床病理分期、肿瘤病理分化程度、是否伴有淋巴结转移有关。结论 PUMA蛋白在结肠癌的发生、发展中起重要作用,可能成为结肠癌的分子标记物或结肠癌治疗的新分子靶点。

PUMA蛋白在肝外胆管癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨PUMA蛋白在胆管细胞癌组织中的表达及与胆管癌的临床病理关系。方法:应用免疫组化法检测60例肝外胆管细胞组织与正常胆管细胞组织中PUMA蛋白的表达情况。结果:胆管细胞癌组织PUMA蛋白的表达率为38.3%,低于癌旁组织中(48.3%)和正常胆管组织(63.3%)。PUMA蛋白的表达与肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移情况有关,与患者年龄、性别及肿瘤部位无关。结论:PUMA蛋白的表达缺失与肝外胆管癌的发生发展密切相关。

透骨草提取物对人肺癌A549细胞凋亡及其PUMA/Bcl-2/Caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察透骨草提取物对人肺癌A549细胞PUMA(P53上调凋亡调空因子)、Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、Caspase-3(天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3)蛋白表达的影响,从凋亡诱导的角度探讨透骨草提取物抑制A549细胞增殖的作用机制。方法:将A549细胞分为实验组和对照组;吖啶橙染色观察透骨草提取物对A549细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对A549细胞PUMA、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果:吖啶橙染色结果显示,39.7 mg/L透骨草提取物处理的A549细胞皱缩,胞核固缩、呈边集,出现凋亡小体。免疫组化检测结果显示,39.7 mg/L透骨草提取物处理的A549细胞PUMA蛋白显著高于对照组(P<0.05),而Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达显著低于对照组(P<0.05)。结论:透骨草提取物对A549细胞具有凋亡诱导作用,机制与促进A549细胞PUMA蛋白表达、抑制Bcl-2和Caspase-3蛋白表达有关。

热疗通过上调基因PUMA表达诱导胃癌MKN45凋亡

目的探讨热疗诱导胃癌MKN45细胞凋亡及其对胃癌细胞促凋亡蛋白PUMA表达的影响。方法体外复苏与培养人胃癌MKN45细胞。对照组常温(37℃)下培养,实验组按不同时间分组43℃水浴加热胃癌MKN45后培养24h,采用倒置显微镜和透射电镜观察热疗后胃癌细胞的形态结构变化。四甲基偶氮唑盐比色法(MMT)检测细胞增殖抑制。AO/EB荧光双染色法及Annexin-V/PI双染色法流式检测细胞凋亡。Western blot检测促凋亡蛋白PUMA蛋白表达。结果光镜观察发现热疗后MKN45细胞明显皱缩、变圆及细胞漂浮,3h多数细胞漂浮。电镜下可见热疗后MKN45细胞核仁增多,胞核及胞浆出现大小不等的空泡和凋亡小体。MTT实验提示,热疗可明显抑制MKN45细胞生长(P<0.01)。AO/EB荧光双染色显示,热疗后细胞呈淡黄或橘红色,胞核呈现致密斑状。热疗0.5h、1h、2h和3h后,AO/EB荧光双染色法及Annexin-V/PI双染色法流式检测细胞凋亡率基本一致。热疗0.5h后细胞凋亡率明显增高,1h略低于0.5h,2h达最高峰。Western blot显示,MKN45细胞各热疗时间的PUMA蛋白表达明显升高,热疗0.5h开始升高,热疗2h达最高峰,1h略低于0.5h,3h有所回落(P<0.05)。结论热疗2h诱导胃癌细胞凋亡的效果最佳,并且可通过上调基因PUMA表达诱导胃癌MKN45凋亡。

PUMA、IQGAP1在胰腺癌中的表达及与临床病理、预后生存的相关性

目的探讨PUMA、IQGAP1蛋白在胰腺癌中的表达及与临床病理、预后生存的相关性。方法选取2016年10月至2018年10月本院收治的胰腺癌患者胰腺癌组织标本、远离胰腺肿瘤3 cm的癌旁组织标本各74份,比较两组织中PUMA、IQGAP1蛋白的表达情况,并探讨其与病理特征的关系。随访2年,了解74例患者生存率,采用ROC曲线分析不同PUMA、IQGAP1表达的胰腺癌患者预后2年生存情况,采用Logistic回归模型分析影响胰腺癌患者2年预后的独立危险因素。结果胰腺癌组织中的PUMA阳性率显著低于癌旁组织,IQGAPl阳性率显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅵ期、有淋巴结转移、分化程度为中-低分化的胰腺癌患者PUMA阴性率、IQGAPl阳性率更高(P<0.05)。74例胰腺癌患者2年生存率为16.22%。PUMA阴性表达、IQGAPl阳性表达的胰腺癌患者死亡率高于PUMA阳性表达、IQGAPl阴性表达的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析显示PUMA(表达阳性)、IQGAPl(表达阴性)者生存期较长,Keplan-meier生存曲线明显不同(P<0.05)。TNM(Ⅲ~Ⅵ期)、淋巴结转移(有)、分化程度(中-低分化)、PUMA(表达阴性)、IQGAPl(表达阳性)为影响胰腺癌患者预后生存的独立危险因素(P<0.05)。结论 PUMA阴性、IQGAPl阳性为影响胰腺癌患者预后生存的危险因素,临床可通过加强监测二者表达情况,以评估胰腺癌患者病情进展情况及预后。

PUMA在大鼠胰腺移植缺血-再灌注损伤中的意义

目的:探讨PUMA在移植胰腺缺血再灌注损伤(I/RI)中的早期促凋亡作用。方法:对封闭群大鼠建立大鼠腔静脉内分泌引流、肠道外分泌引流的动物模型.再灌注后第0、1、2、3、4、6、9、12 h等时点,每时点处死5只大鼠,切取移植胰腺,石蜡包埋切片,原位DNA缺口末端标记(TUNEL)法测定胰腺组织细胞凋亡,Western blot方法测定移植胰腺组织PUMA,bcl-2、bax、caspase-3蛋白表达。结果:再灌注术后第0、1、2、3、4、6、9、12 h,胰腺细胞凋亡数分别为(29.42±4.93)、(47.65±6.43)、(74.80±9.73)、(106.35±16.80)、(148.71±19.50)、(123.96±15.54)、(97.32±10.60)和(57.42±9.56)个/高倍视野。各时点均显著高于正常胰腺(23.48±4.26)。第4小时细胞凋亡数明显增高,12 h降低到最低值,不同组细胞凋亡数的差异有统计学意义(P<0.01);PUMA以及其下游的bax和caspase-8蛋白表达在第4小时达到最高峰,12 h降低到最高值,bcl-2在第4小时达到最低值,蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05),以后逐渐升高,12 h降低到最低值,PUMA表达与各时点的细胞凋亡数有明显的正相关(r=1.00,P<0.05)。结论:I/RI后细胞早期凋亡与PUMA活化有关,PUMA是通过调节下游bax、caspase-8、bcl-2基因发挥凋亡促进作用。

蛇床子素对海人酸致痫大鼠海马神经元Puma表达的影响

目的:探讨蛇床子素对海人酸致痫大鼠海马神经元损伤的保护作用及相关分子机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、海人酸组和蛇床子素组,采用结晶紫染色法观察大鼠海马神经元的形态,采用免疫组化法检测大鼠海马神经元Puma蛋白的表达。结果:形态学观察结果显示,海人酸组较正常对照组大鼠的海马神经元排列不规则,数量减少,核固缩;蛇床子素组较海人酸组大鼠的海马神经元排列规则,数量增加,神经元形态与正常对照组相似。Puma蛋白检测观察结果显示,海人酸组较正常对照组大鼠海马神经元Puma蛋白表达增高(P<0.05),蛇床子素组较海人酸组大鼠海马神经元Puma蛋白表达降低(P<0.05)。结论:蛇床子素对海人酸致痫大鼠海马神经元损伤具有保护作用,其机制可能与下调大鼠海马神经元Puma蛋白表达有关。

Slug敲除促进γ-射线照射小鼠肠上皮细胞损伤的体内研究

目的:观察γ射线照射对Slug敲除C57BL/6小鼠肠粘膜上皮细胞损伤的影响及机制。方法:Slug敲除C57BL/6小鼠和非Slug敲除C57BL/6小鼠各12只,以8Gy 60Coγ射线全身一次性照射制作动物模型,分别在照射后第1、3、8天处死小鼠,取小肠组织4%多聚甲醛液固定作病理学检查;取非Slug基因敲除小鼠和Slug基因敲除小鼠各24只,予以8Gy 60Coγ射线全身一次性照射,分别在照射后第2、4和24 h处死,采用免疫组化法检测肠道细胞PUMA表达,TUNEL染色检测细胞凋亡。结果:8Gy 60Coγ射线照射后,Slug基因敲除小鼠死亡率91.67%,明显高于非基因敲除小鼠的25.00%,差异有统计学意义(P=0.004)。Slug敲除小鼠肠道细胞凋亡指数、PUMA阳性表达细胞数以及肠道损伤的严重程度均明显高于非敲除组。结论:Slug基因敲除加重γ射线引起的放射性肠道损伤。