鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成调控研究Ⅺ. PUR box的突变分析

为研究１６ｂＰ ＰＵＲ ｂｏｘ中除第３位的Ｇ与第１４位的Ｃ外，余下６个完全保守碱基的４个在与ＰｕｒＲ阻遏蛋白结合中的功能，对它们分别做了定点突变，使其分别从Ｃ、Ａ、Ａ和Ｔ突变为Ｇ、Ｇ、Ｇ和Ｃ。凝胶阻滞实验结果表明，含上述指定突变的ＰＵＲ ｂｏｘ均不能与ＰｕｒＲ阻遏蛋白结合。由此证明，这４个保守碱基对维持ＰＵＲ ｂｏｘ的功能是必须的，其中任一改变都导致ＰＵＲ ｂｏｘ功能的丧失。

鼠伤寒沙门氏菌purB受purR调控的实验证据

通过遗传图和序列同源性分析获得了鼠伤寒沙门氏菌purB核苷酸序列. 为揭示鼠伤寒沙门氏菌purB是否受purR调控, 对purB基因的PUR box进行了功能分析. PCR扩增野生型PUR box和其第14位保守碱基发生突变(C→T)的DNA片段, 分别与从鼠伤寒沙门氏菌野生型菌株LT2提取的PurR粗制品进行了凝胶阻滞实验. 结果表明, purB基因的PUR box与PurR阻遏蛋白有很好的结合能力, 而突变的PUR box则不能与PurR阻遏蛋白结合. 可见, 野生型鼠伤寒沙门氏菌purB与嘌呤从头合成途径中其他结构基因一样是受purR基因协同调控的. 此外还对不受调控的实验现象的机制做了研究. 结果表明purB组成型表达是purB∷MudJ基因融合发生在PUR box上游(-554 bp)的结果. 这一结果还为鼠伤寒沙门氏菌purB基因与其上游ycfC基因属于同一个操纵子提供了有力的证据.