Production of Indigo by Immobilization of E. coli BL21 （DE3） Cells in Calcium-Alginate Gel Capsules

The ability of catalyzing indole into indigo of gene engineering strain expressing P450 BM3 immobi- lized by entrapment in calcium-alginate gel capsules was examined,and various characteristics of immobilized cells were assessed.Optimum conditions for cells activity were not affected after immobilization,and pH and tempera- ture for both free and immobilized cells were found to be pH 7.5 and 35℃,respectively.The immobilized cells ex- hibited a markedly improved thermal stability than free cells.After five repeated experiments,the yield of indigo with the immobilized cells retained over 94%of their original activity,which indicated that the operational stability for recycling in batch processes was improved.

双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞NCI-H520蛋白质组成分

目的：建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统，并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法：用固相 ｐＨ梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系ＮＣＩ－Ｈ５２０总蛋白，银染显色，ＰＤＱｕｅｓｔ ２ＤＥ软件分析，对部分蛋白质 点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（ｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｌａｓｅｒ ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ ｆｌｙｉｎｇ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ， ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱，用 ＰｅｐｔＩｄｅｎｔ软件查询 ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ数据库。结果：获得了分辨 率和重复性均较好的双向电泳银染图谱，图像分析探测到３块胶的平均蛋白质点数为（１１４６±１１６），平均匹配的点 数为（８５１±９５），匹配率达 ７３． ７％， ３ 块胶在蛋白质点位置上具有较好的重复性， ＩＥＦ方向的平均偏差为（１． ５２± ０．２２）ｍｍ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方向的平均偏差为（１．９７ ± ０．１３）ｍｍ。随机取６０个蛋白质点进行胶内原位酶解－质谱指纹图 分析得到了５４个蛋白质点的肽质指纹图，查询数据库初步鉴定了４４个蛋白质，其中部分是与细胞周期有关的蛋 白，部分是与信号传导有关的蛋白。

壳聚糖固定化酶和细胞研究新进展

分析评价了壳聚糖作为固定化酶和细胞载体的特性,概述了壳聚糖凝胶固定化酶和细胞的形态及制备方法,着重介绍了近年来壳聚糖固定化酶和细胞的改进方法,并指出今后壳聚糖固定化酶和细胞的发展方向。

固定化梭形气芽孢杆菌在降解废水时微观形态的观察和比较

针对含有油墨的废水 ,筛选到 1株微生物菌种 ,经鉴定为梭形气芽孢杆菌 (Aerobacillusfusiformis) .分别用海藻酸钙 ,聚乙烯醇 (PVA)和多孔陶瓷作为载体固定化梭形气芽孢杆菌 ,比较其在处理油墨废水时微观形态的变化情况 .通过扫描电子显微镜 (SEM)对固定化梭形气芽孢杆菌的微观形态进行观察 ,发现海藻酸钙在处理含油墨废水时容易溶解 ,用PVA作为载体时 ,由于细胞被包埋在PVA内部 ,和底物的接触时扩散阻力较大 ,因而废水中COD的去除效率较低 .而用多孔陶瓷固定化细胞 ,不仅简便易行 ,固定牢固 。

利用κ-卡拉胶-魔芋多糖复配胶固定化酵母生产三磷酸腺苷

利用κ 卡拉胶 魔芋多糖复配胶包埋的固定化啤酒酵母细胞 ,由腺苷 (AR)生产三磷酸腺苷 (ATP)。采用HPLC法分析固定化细胞反应过程核苷 (酸 )的变化以及用琼脂糖平板电泳法对其工艺条件进行了优化。固定化细胞反应 1h ,ATP转化率接近 10 0 %。底物溶液灭菌和添加NAD+后 ,该固定化酵母细胞可反复使用 12次 ,ATP的转化率稳定维持在 95 %以上。

固定化细胞技术发酵玉米醪生产酒精的研究

本文报导了固定化酵母(S.cerevisiae 9064)批次发酵玉米醪生产酒精的研究。采用自制“多层分隔式生物反应器”在最适发酵条件下,成熟醪的终酒精浓度达10％(V/V)左右,发酵时间可由传统发酵的72h缩短到22h左右,酒精生产力提高了3倍。在吨级反应器连续运转试验时,固定化增殖酵母细胞活性稳定性可持续半年以上,PVA—凝胶粒的机械强度和弹性等以及醪液中酒精含量基本保持不变。

激光辅助制动对精子核DNA的影响

目的:研究激光辅助制动精子是否引起精子核DNA损伤。方法:23例行体外受精(IVF)的男性精液标本,上游法处理后用0.45ms脉冲激光照射精子尾部制动精子。采用末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)和单细胞凝胶电泳法(SCGE)两种方法分别检测激光辅助制动处理前后阳性精子百分率。结果:TUNEL法检测激光辅助制动处理前后阳性精子的百分率分别为(1.32±0.61)%、(1.41±0.51)%,差异无显著性(P>0.05);SCGE法检测处理前后阳性精子百分率分别为(1.59±0.70)%、(1.83±0.68)%,差异亦无显著性(P>0.05)。结论:激光照射精子尾部辅助制动精子对精子核DNA无明显损伤。

聚丙烯酰胺凝胶及其固定化细胞扩散性能的研究

应用自行设计的扩散池,以稳态操作方式测定了聚丙烯酰胺凝胶单体浓度、交联度、聚合温度、扩散温度、组分浓度、酵母细胞浓度等对葡萄糖和/或乙醇在聚丙烯酰胺凝胶及其固定化细胞中有效扩散系数的影响。并得到了有效扩散系数与各因素间的关联式。

固定化微生物细胞法处理含氰废水的研究

本文探讨了微生物细胞固定化的方法。采用海藻酸钙为载体固定化活性污泥细胞,制成好氧流化床反应器处理含氰废水,进行了若干条件选择,研究了pH对去除CN^-、COD_(cr)的影响,实验取得了较好结果。

固定化细胞生产L-苯丙氨酸研究

用聚乙烯醇（ＰＶＡ）凝胶包埋固定假单胞菌Ｅ４－１０６细胞，最佳ρ（ＰＶＡ）为８０ｇ／Ｌ；最适湿细胞包埋量为每ｍｌ凝胶０．３ｇ；转氨酶活力回收率为７８％，连续反应２１批次后，固定化细胞酶活力为初始最高活力的９１％；用固定化细胞进行间歇式批次反应，结果表明其酶活性半寿期为４个月；制得的固定化细胞为直径约３ｍｍ的珠状颗粒，机械强度良好，间歇式批次反应１０个月。

一种新的双向电泳蛋白样品制备方法

目的探讨双向凝胶电泳(2-DE)样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果的影响。方法以MOLT-4细胞为例,采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组,并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果通过对2-D PAGE图谱的比较分析,发现采用8 mol/L Urea,2 mol/L Thiourea,4%CHAPS,1%NP-40,4%TritonX-100,65 mmol/L DTT,0.5 mmol/L PMSF,0.5%pharmalyte 3-10,能获得质量较高的2-DE图谱。结论采用高浓度脲、三去污裂解液有利于获得优质的蛋白质样品,从而提高蛋白质提取率和双向电泳分辨率等。

固定化猴头菌细胞的研究

利用海藻酸钠对深层发酵的猴头菌细胞进行固定化培养 ,就包埋剂的最佳浓度、发酵条件及固定化猴头菌细胞在深层发酵中应用的可能性进行了探讨。结果表明 ,最佳海藻酸钠的质量分数为 2 % ,CaCl2 质量分数为 2 % ,固定化猴头菌细胞在发酵培养基内的代谢与游离细胞的代谢基本一致 ,发酵液中氨基酸含量最高可达 80 0mg/L ,多糖含量最高可达 14 0 0mg/L ,固定化细胞可以连续使用 3 2～ 48d 。

改进的扩散自由体积模型及其在凝胶和固定化细胞中的应用(Ⅰ)模型的建立

利用扩散自由体积模型,通过一定的线性假定将凝胶及固定化细胞中的自由体积与各主要影响因素相联系,得到了能表达诸因素对有效扩散系数影响的改进的扩散自由体积模型.其特点是不仅能反映凝胶总单体浓度、交联度及扩散分子大小的影响,而且可以反映温度及细胞浓度对有效扩散系数的影响.

固定化猴头菌细胞的研究

报道了利用海藻酸钠固定化猴头菌细胞的发酵情况．就包埋剂的最佳浓度、固定化细胞的发酵条件以及固定化猴头菌细胞在深层发酵中应用的可行性进行了探讨．结果表明：最佳海藻酸钠的浓度为２％，氯化钙浓度为２％，固定化猴头菌细胞在发酵培养基内的代谢与游离细胞的代谢基本一致，发酵液中氨基酸含量最高可达８００ｍｇ／Ｌ，多糖含量最高可达１４００ｍｇ／Ｌ，固定化细胞可以连续使用３２～４８ｄ。

包埋紫草细胞的海藻酸钙凝胶扩散性能

用非稳态法测定了充分搅拌条件下在未包埋紫草细胞和包埋紫草细胞的海藻酸钙凝胶珠粒体系内蔗糖溶液浓度的瞬间变化情况。结果表明，海藻酸钠浓度、氯化钙浓度和紫草细胞包埋量对蔗糖扩散有明显影响，有效扩散系数Ｄｅ随着海藻酸钠浓度、氯化钙浓度和紫草细胞包埋量的提高而下降．

帕金森病和正常人外周血单个核细胞的蛋白质组差异分析

目的:通过研究帕金森病和正常外周血单个核细胞(PBMC)的蛋白质组差异,初步探讨外周免疫系统与帕金森病的病理联系方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离人帕金森病和正常单个核细胞总蛋白质,考马斯亮蓝染色,PDQuest 2-DE软件分析,对部分差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用Mascot查询系统查询SWISS-PROT数据库。结果:获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳考染图谱,对其中的21个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析,经数据库查询,初步鉴定为一些与蛋白降解、抗氧化应激、信号转导、细胞骨架、细胞周期调控等有关的蛋白质。结论:建立了帕金森病PBMC的双向凝胶电泳图谱,提示帕金森病和正常的PBMC的蛋白质表达具有差异。

改进的扩散自由体积模型及其在凝胶和固定化细胞中的应用(Ⅱ)实验数据的关联

应用本文(I)报建立起来的改进的扩散自由体积模型,对聚丙烯酰胺凝胶及其固定化酵母细胞中葡萄糖和(或)乙醇的有效扩散系数与凝胶的单体浓度、交联度、温度和细胞浓度分别进行关联,定性解释和定量关联都令人满意,说明了该模型的适用性.

磁芯负载离子液体凝胶微球的制备、表征及在固定化细胞技术中的应用

选取具有良好生物相容性的壳聚糖(CS)包覆四氧化三铁纳米粒子(Fe_3O_4/CS)作为磁响应材料,制备了磁芯负载1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIM]PF_6)凝胶微球;对Fe_3O_4/CS及磁芯负载离子液体凝胶微球的组成、结构、微观形貌和磁性能进行了表征;将其应用于固定化细胞技术,在产紫青霉细胞全细胞生物催化甘草酸(GL)合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸(GAMG)体系中,实现了对全细胞生物催化剂和离子液体的快速回收和重复利用.实验结果表明,壳聚糖成功包裹Fe_3O_4纳米粒子; Fe_3O_4/CS均匀分布在凝胶微球内部,并显示出良好的磁性能;与凝胶微球固定化细胞催化体系相比,磁芯负载[BMIM]PF_6凝胶微球固定化细胞催化体系中GAMG的产率提高了13. 8%;重复利用实验结果表明,磁芯负载[BMIM]PF_6凝胶微球固定化产紫青霉细胞在外加磁场的作用下,易于快速回收,并且循环再利用9次后相对活性仍保留59. 2%.

利用固定化啤酒酵母合成5’-核苷三磷酸

固定化啤酒酵母细胞由5’-核苷一磷酸(NMPs)合成5’-核苷三磷酸(NTPs)。在250mL摇瓶中加入20g固定化酵母细胞和20mL反应液(NMP 40mmol/L,葡萄糖150mmol/L,K2HPO4-KH2PO4缓冲液250 mmol/L,硫酸镁10mmol/L),pH 7.0,35℃,反应2.5h,NTP转化率达到80%。底物溶液添加NAD+后,该固定化酵母细胞可反复使用10次,NTP的转化率稳定维持在70%以上。

一种固定化酵母细胞的复合载体——PVA-海藻酸盐凝胶

固定化细胞这一生物技术在近20年来发展迅速,已涉及食品、发酵、化工、医疗、生化等各领域.新型载体研制是发展固定化细胞技术的一个主导因素.PVA(聚乙烯醇)是近年来用于固定化细胞的一种新载体材料,但目前制备PVA凝胶的方法通常是在PVA溶液凝固后(或加入固化剂、乳化剂等让其凝固)手工切块.为了解决PVA载体的成球问题,简化制备方法,我们进行了这方面的研究.本文报道了用PVA和海藻酸钠制备的一种固定化细胞载体新配方,比较了几种常用载体及几种PVA载体的性能及用于乙醇发酵的实验结果.