多表位HBV重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价

目的探讨多表位乙型肝炎DNA疫苗诱导特异性细胞免疫应答及其治疗慢性乙型肝炎的潜能。方法筛选一组HBV的表位,并进行优化组合,辅以一定的旁侧序列,并合成目的基因片段HS。将它插入可人用的真核表达载体pVAX1中,构建出重组质粒PVAX-HS。通过重组质粒免疫小鼠,观察免疫动物体内CTL。结果酶切结果显示成功构建了PVAX-HSDNA疫苗,ELISPOT测定证实其可以在小鼠体内诱导产生特异性T细胞,51Cr释放实验证实,所诱导的T细胞中具有很强的CTL活性。结论PVAX-HSDNA疫苗免疫可诱导特异性细胞免疫应答,具有慢性病毒性乙型肝炎治疗性疫苗的潜能。

多表位HBV DNA疫苗的中试制备及质量研究

目的建立多表位HBVDNA疫苗(PVAX-HS)的中试制备及质量控制方法。方法采用分批补料发酵方式,碱裂解结合超滤浓缩,三步柱层析制备DNA疫苗,并对终产品进行全面质量控制。结果分批补料发酵获得生物量50～60g/L,质粒最终产量约为1.0mg/g菌体,符合药用DNA疫苗质量标准。结论建立了质量稳定的PVAX-HS中试制备工艺,符合规模化生产要求。