PVT1基因在胃癌患者血液中的表达及其临床意义

目的:检测人浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)在胃癌患者血液中的表达水平及临床常用肿瘤标志物的含量,探讨PVT1与肿瘤标志物和临床分期分级的关系。方法:采集2015年1月至12月石河子大学医学院一附院收住院的51例胃癌、63例慢性萎缩性胃炎患者与54名正常人外周静脉血,提取血液总RNA。实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测血液中PVT1 mRNA表达水平;电化学发光法检测胃癌患者血清中AFP、CEA、CA19-9的含量。结果:PVT1 mRNA在胃癌、慢性萎缩性胃炎患者血液中的表达量较高,胃癌组与正常组相比PVT1 mRNA表达量差异有统计学意义(t=0.000,P<0.01),慢性萎缩性胃炎组与正常组相比PVT1 mRNA表达量差异也有统计学意义(t=0.000,P<0.01),但是胃癌患者与慢性萎缩性胃炎患者比较其差异无统计学意义(t=0.459,P>0.05)。PVT1 mRNA表达与淋巴结转移有明显相关(r=0.024,P<0.05)。此外,PVT1 mRNA的表达与血清肿瘤标记物CA19-9具有相关性(r=0.429,P<0.01)。结论:PVT1 mRNA在胃癌、慢性萎缩性胃炎患者血液中表达高于正常人,且与CA19-9具有相关性,提示PVT1 mRNA可能成为胃癌早期诊断及预后的分子标志物之一。

急性髓系白血病患者血清LncRNA PVT1、miR-486-5p表达及预后价值

目的探讨急性髓系白血病(AML)患者血清长链非编码RNA PVT1基因(LncRNA PVT1)、微小RNA-486-5p(miR-486-5p)表达水平与疾病病理特征和预后的关系。方法回顾性选取2017年4月—2019年3月河北北方学院附属第二医院血液科就诊的AML患者100例为AML组,选取同期健康体检者100例为健康对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测血清LncRNA PVT1、miR-486-5p相对表达量;采用Pearson相关法分析AML患者血清LncRNA PVT1与miR-486-5p水平的相关性;Kaplan-Meier法分析AML患者生存曲线;采用Cox回归分析评价影响AML患者预后的危险因素。结果AML组患者LncRNA PVT1水平高于健康对照组,miR-486-5p水平低于健康对照组(t/P=15.403/<0.001、18.305/<0.001)。Pearson相关性分析显示,AML患者LncRNA PVT1与miR-486-5p水平呈负相关(r=-0.261,P<0.01);不同白细胞计数、骨髓原始细胞比率、NCCN危险分层患者LncRNA PVT1、miR-486-5p水平比较差异有统计学意义(LncRNA PVT1:t/P=2.934/0.004,2.901/0.005,10.985/<0.001;miR-486-5p:t/P=2.598/0.012,2.604/0.012,8.593/<0.001)。LncRNA PVT1高水平表达者3年总生存率低于LncRNA PVT1低水平表达者(χ^(2)/P=14.16/<0.001),miR-486-5p高水平表达者3年总生存率高于miR-486-5p低水平表达者(χ^(2)/P=16.82/<0.001)。Cox回归分析显示,LncRNA PVT1高表达、miR-486-5p低表达、NCCN危险分层高是急性髓系白血病患者预后不良的危险因素[RR(95%CI)=1.982(1.148~2.993),1.668(1.085~2.641),1.659(1.068~2.602)]。结论AML患者LncRNA PVT1高表达,miR-486-5p低表达,二者水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比率、NCCN危险分层和患者预后有关。

长链非编码RNA Pvt1致癌基因在胶质瘤细胞增殖和上皮-间充质转化过程中的作用研究

目的研究长链非编码RNA Pvt1致癌基因(PVT1)在胶质瘤细胞增殖和上皮-间充质转化(EMT)过程中的作用。方法收集不同级别胶质瘤临床样本,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PVT1表达水平;U87MG和U251细胞系分别转染siRNA-PVT1及siNC后,CCK-8检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹(Western blot)法检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况。结果与正常脑组织相比,随着胶质瘤分级的增加,PVT1表达水平逐渐升高(P﹤0.05)。胶质母细胞系U87MG和U251的PVT1表达水平均明显高于正常HEB细胞系(P﹤0.01)。培养2、3天后,siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞光密度值均低于siNC组。与siNC组相比,siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞侵袭细胞数量均减少。siRNA-PVT1组U87MG和U251细胞系中E-cadherin蛋白相对表达量均高于siNC组,N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量均低于siNC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论长链非编码RNA PVT1在胶质瘤中高表达,其表达水平与胶质瘤恶性程度有关;沉默PVT1可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和EMT过程,为胶质瘤的基因疗法提供了一个新的潜在靶点。

慢性乙型病毒性肝炎病人血浆中LncRNA PVT1、微RNA-31-5p表达水平与炎症损伤程度的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1()、微RNA-31-5p(miR-31-5p)在慢性乙型病毒性肝炎(CHB)病人血浆中的表达情况,并分析其与炎症损伤程度的关系。方法选取东莞市人民医院2019年12月至2020年12月确诊的180例CHB病人为CHB组,所有病人均行肝穿刺活检,根据CHB病人炎症损伤程度分为G1组(66例),G2组(58例),G3组(41例),G4组(15例),根据肝纤维化程度进行分组,无明显肝纤维化(S0,S1)组(64例),明显肝纤维化组(S2,S3)(78例),早期肝硬化(S4)组(38例)。同时选取55例健康者为对照组。收集CHB组和对照组的一般资料,分别检测两组血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-10、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酰基转移酶(GGT)等指标水平;采用实时荧光定量PCR法对血清中LncRNA PVT1、miR-31-5p表达水平进行检测,Pearson法分析LncRNA PVT1、miR-31-5p表达的相关性。结果CHB病人血清中LncRNA PVT1(1.52±0.31、1.93±0.47、2.57±0.63、3.42±1.03)表达水平高于对照组0.68±0.23,且LncRNA PVT1表达水平随着炎症损伤程度加重而升高,miR-31-5p表达水平(0.85±0.22、0.79±0.18、0.63±0.14、0.50±0.11)低于对照组0.96±0.24,且miR-31-5p表达水平随着炎症损伤程度加重而降低,差异有统计学意义(P<0.05);CHB组病人TNF-α(108.13±30.32)ng/L、IL-6(68.50±22.59)ng/L、IL-1β(358.92±36.80)ng/L、IL-10(75.25±18.99)ng/L、Hs-CRP(11.22±3.15)mg/L、ALT(57.13±9.34)U/L、AST(37.86±5.56)U/L、GGT水平(33.21±10.62)U/L均显著高于对照组[(38.49±19.88)ng/L、(19.12±3.21)ng/L、(169.05±5.24)ng/L、(16.56±2.34)ng/L、(1.68±0.56)mg/L、(24.62±7.95)U/L、(22.32±4.26)U/L、(26.94±8.32)U/L](P<0.05);CHB组病人血清中LncRNA PVT1表达与TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、Hs-CRP、ALT、AST、GGT均呈正相关(P<0.05),miR-31-5p与TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10、Hs-CRP、ALT、AST、GGT均呈负相关(P<0.05);CHB病人血清中LncRNA PVT1、miR-31-5p的表达呈明显负相关(r=−0.36,P<0.05)。结论CHB病人血清中LncRNA PVT1表达升高,miR-31-5p表达降低,且二者均与炎症损伤程度有关。

长链非编码RNA PVT1对人脑胶质瘤U251细胞增殖能力的影响

目的探讨长链非编码RNA PVT1(lnc RNA-PVT1)对人脑胶质瘤U251细胞增殖能力的影响。方法体外培养胶质瘤细胞系U251细胞,分别转染PVT1 si RNA(PVT1组)和negative control si RNA(对照组)。PCR法检测lnc RNA-PVT1及C-MYCm RNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot检测C-MYC蛋白表达水平。结果 PVT1组lnc RNA-PVT1 m RNA表达水平(0.27±0.08)较对照组(1.0±0.30)明显降低(P<0.05);PVT1组C-MYC m RNA表达水平(0.87±0.19)与对照组(1.0±0.15)无明显差异(P>0.05)。转染si RNA后1、2、3 d,PVT1组U251细胞活力较对照组均明显降低(P<0.05)。PTV1组C-MYC蛋白表达水平(0.29±0.12)较对照组(0.85±0.27)明显降低(P<0.05)。结论降低lnc RNA-PVT1表达水平能够抑制U251细胞增殖,其机制可能与lnc RNA-PVT1够影响C-MYC蛋白的表达水平有关。

circPVT1对鼻咽癌细胞增殖、转移和凋亡的影响及作用机制研究

目的研究环状非编码RNA基因PVT1(circPVT1)在鼻咽癌组织中的表达及对鼻咽癌细胞增殖、转移和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qRCR)检测circPVT1在鼻咽癌组织和鼻窦炎组织(对照组)中的表达,将鼻咽癌细胞系HNE1体外培养并分成阴性对照组(转染阴性对照载体)、circPVT1过表达试验组(转染circPVT1 mimic)和circPVT1干扰试验组(转染circPVT1 inhibitor)。采用RT-qRCR检测circPVT1 mimic和circPVT1 inhibitor转染效果;采用MTT试验分析circPVT1对鼻咽癌细胞增殖的影响;采用Transwell chamber试验分析circPVT1对鼻咽癌细胞转移的影响;流式细胞术分析circPVT1对鼻咽癌细胞凋亡的影响;采用Western blot分析circPVT1对PTEN-PI3K/AKT信号通路表达的影响。结果与对照组相比,鼻咽癌组织中circPVT1表达明显上调(P<0.05)。转染circPVT1 mimic后,circPVT1过表达试验组细胞中circPVT1的表达增加(P<0.05),转染circPVT1 inhibitor后,circPVT1干扰试验组细胞中circPVT1的表达降低(P<0.05)。转染circPVT1 mimic显著促进鼻咽癌细胞的增殖和转移能力,抑制细胞凋亡,同时降低PTEN表达和增加PI3K/AKT磷酸化(P<0.05)。转染circPVT1 inhibitor显著抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移能力,促进细胞凋亡,同时增加PTEN的表达和降低PI3K/AKT磷酸化(P<0.05)。结论circPVT1在鼻咽癌中表达增加,可通过靶向调节PTEN-PI3K/AKT信号途径促进鼻咽癌细胞增殖和转移能力,并抑制细胞凋亡,进而参与鼻咽癌的发展,circPVT1可能是治疗鼻咽癌的潜在新靶点。

circPVT1对皮肤鳞状细胞癌发生机制的相关性研究

研究环状非编码RNA 基因PVT1(circPVT1)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)组织中的表达。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circPVT1在cSCC组织(实验组)和癌旁正常组织(对照组)中的表达,分析二者表达的差异。结果:与对照组癌旁组织 (0.0831±0.0157)相比,cSCC组织中circPVT1相对表达量 (0.1511±0.0222)上调 (t2.291,P0.045)。结论:circPVT1在cSCC组织中表达增加,促进了cSCC细胞的增殖和转移能力,抑制细胞凋亡。该研究为进一步探讨将 circPVT1 做为cSCC早期诊断和治疗的分子靶点提供可供参考的依据。

LncRNA PVT1靶向miR-146a对结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞TLR4通路免疫效应的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸浆细胞瘤可变异位基因(LncRNA PVT)1靶向微小核糖核酸(miR)-146a对结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞Toll样受体(TLR)4通路免疫效应的影响。方法采用结核分枝杆菌株H37Rv感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,分别向感染细胞转染LncRNA PVT1干扰阴性对照(si-NC)、si-LncRNA PVT1、miR-146a模拟物(miR-146a mimics)、miR-146a mimics阴性对照(miR-NC)、si-LncRNA PVT1+miR-146a抑制剂阴性对照(NC inhibitor)、si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor,记为si-NC组、si-LncRNA PVT1组、miR-146a mimcs组、miR-NC组、si-LncRNA PVT1+NC inhibitor组、si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor组,另取未转染的感染细胞为对照组。转染48 h后,倒置荧光显微镜观测转染效率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;实时荧光定量-聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞LncRNA PVT1和miR-146a、TLR4、髓样分化因子(MyD88)、核转录因子(NF)-κB p65 mRNA表达;Western印迹检测细胞TLR4、MyD88、NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因及RT-qPCR法检测LncRNA PVT1与miR-146a、miR-146a与TLR4的靶向作用。结果si-NC组、si-LncRNA PVT1组、miR-146a mimcs组、miR-NC组、si-LncRNA PVT1+NC inhibitor组、si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor组转染效率(81.21±4.15)%、(85.68±3.49)%、(86.55±5.03)%、(84.63±4.29)%、(83.41±4.73)%、(80.67±3.95)%;与对照组、si-NC组、miR-NC组比较,miR-146a mimics组、si-LncRNA PVT1组、si-LncRNA PVT1+NC inhibitor组和si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor组TNF-α和IL-6水平显著下降,miR-146a表达显著上升,TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达和p-NF-κB p65蛋白表达显著下降(P<0.01);与si-LncRNA PVT1组、si-LncRNA PVT1+NC inhibitor组比较,si-LncRNA TUG1+miR-146a inhibitor组TNF-α和IL-6水平上升,TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达和p-NF-κB p65蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.01);LncRNA PVT1直接靶向调控miR-146a;miR-146a直接靶向调控TLR4。结论抑制LncRNA PVT1可促进结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞的免疫效应,可能与靶向miR-146a抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路、下调TNF-α和IL-6水平相关。