松树皮提取物Pycnogenol的生物学和疾病防治功能研究进展

松树皮是一种古老的药材,其药用价值现今得到了世界范围内的关注。20世纪50年代,法国海岸松树皮提取物被制成保健品Pycnogenol。笔者概括了有关该松树皮提取物化学成分分析的研究,总结了作为强抗氧化剂的松树皮提取物在调控一氧化氮的生成、自由基清除及参与细胞抗氧化体系活动等方面的生物学功能,同时综述了该物质对心血管系统、免疫系统、神经系统、生殖系统疾病及糖尿病、癌症等的防治作用,并对其今后的发展趋势作了展望。

松树皮提取物Pycnogenol与慢性疾病关系的研究进展

Pycnogenol（PYC）提取自法国Gascony海岸的海岸松树皮,由瑞士Horphage研究有限公司专利制成保健品[1],中文名＂碧萝芷（或碧容健）＂。PYC由低聚原花青素、儿茶素、表儿茶素、黄衫素、葡糖酯和果酸等40多种小分子水溶性生物活性成分组成,

Supplementing Conventional Treatment with Pycnogenol(R) May Improve Hepatitis C Virus-Associated Type 2 Diabetes:A Mini Review

Hepatitis C virus (HCV) infection and type 2 diabetes mellitus (T2DM) present a significant health burden,with increasing complications and mortality rates worldwide.Pycnogenol(R) (PYC),a natural product,possesses antidiabetic and antiviral properties that may improve HCV-associated T2DM.In this review,we present previously published data on the effectiveness of PYC against HCV replication and T2DM.We believe that supplementing conventional treatment with PYC may improve the current HCV therapy,attenuate HCV-associated T2DM,and reduce the risk of complications such as cirrhosis or hepatocellular carcinoma and cardiovascular disease.

Pycnogenol~预防缺乏G6PD的红细胞受到溶血损害

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症是人类最常见的酶病。缺乏G6PD的红细胞无足够的能力破坏过氧化物，并对溶血有较高的易感性。Pycnogenol是用法国海岸松树皮制得的含原花青素和双黄酮类成分的干浸膏，作者研究了该制剂是否能预防缺乏G6PD的红细胞免受溶血损害。

Pycnogenol^(?)对全身性红斑狼疮的疗效

Pycnogenol^(?)是法国海岸松树皮提取物制剂,含黄酮类、儿茶素、酚酸和原花青素等,具抗氧化、抗炎、增强免疫和造血功能等作用。作者进行了用该制剂治疗全身性红斑狼疮(SLE)的小规模临床试验,分析了其对活性氧(ROS)产生2组、自主性细胞凋亡和蛋白酪氨酸激酶 p56^(lck)特异性活性的作用。11名 SLE 患者分成2组。

碧萝芷对小鼠免疫系统的影响

为了探讨碧萝芷对小鼠免疫系统的影响 ,采用 12 8只BalB c雄性小鼠 ,按体重随机分为 8组 ,每组 16只 ,每四组为 1批。每批 4组小鼠每天分别经口给予 0、5 0、16 7、5 0 0mg kgBW 的碧萝芷 ,30d后 ,第一批小鼠测定足跖肿胀度、抗体生成细胞数、腹腔巨噬细胞吞噬率和半数溶血值。第二批小鼠测定NK细胞活性。结果显示 ,16 7mg kgBW 与 5 0 0mg kgBW 剂量组能明显提高BalB c雄性小鼠的迟发型变态反应、抗体生成细胞数、单核 -巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性及半数溶血值 ,提示碧萝芷能够促进BalB c雄性小鼠的免疫功能。

碧罗芷体外抑制蛋白糖化终末产物生成作用的研究

目的 应用体外蛋白糖化反应系统 ,确定碧萝芷抑制蛋白糖化终末产物生成的作用。方法 对照组将葡萄糖与牛血清白蛋白分别在 37、50、70℃共同孵育 ,实验组则加入不同剂量的碧萝芷或氨基胍。在不同时间取孵育样品用荧光分光光度计检测其荧光强度代表为蛋白糖化终末产物的生成量。结果 在本体外系统中 ,蛋白糖化产物的生成与孵育温度及时间呈正相关。碧萝芷在 0 3～ 2 0 g·L- 1 剂量范围内可有效抑制蛋白糖化终末产物的生成 ;其抑制作用相当于同剂量的氨基胍。

松树皮提取碧萝芷天然抗氧剂的研究

研究了马尾松、湿地松、火炬松、落叶松和黑荆树等树木的树皮 ,以及马尾松和湿地松等树木的针叶提取、分离、精制碧萝芷的工艺和产品质量。试验表明 ,以黑荆树树皮作原料提取碧萝芷高效抗氧化剂的产品得率高 ,质量好 ;制得的产品 ,外观为浅粉红色粉末 ,产品中原花色素含量达95%以上。

法国海岸松树皮提取物碧萝芷对长链游离脂肪酸诱导的巨噬细胞perilipin2基因表达的影响

目的研究碧萝芷(PYC)对油酸诱导的巨噬细胞perilipin2表达的影响及其相关分子机制。方法应用Real-time PCR和Western blot测定油酸及PYC对perilipin2mRNA和蛋白水平表达影响。应用荧光素酶活性分析方法检测油酸及PYC对perilipin2启动子活性的影响。结果油酸以剂量和浓度依赖方式上调perilipin2mRNA和蛋白水平表达,并促进perilipin2启动子活性。PYC以剂量依赖方式抑制了油酸诱导的perilipin2表达及启动子活性。结论 PYC抑制了巨噬细胞中油酸诱导的perilipin2的表达。PYC通过抑制perilipin2启动子活性,从而直接抑制perilipin2的表达。

碧萝芷提取物对肉糜的抗氧化研究

以肉糜为试材,研究2～4℃储藏条件下碧萝芷、生姜、大蒜、阿魏酸、枳实提取物对其抗氧化作用。结果表明,在8 d的储藏期内,空白对照组的丙二醛(MDA)含量、过氧化值、酸价和挥发性盐基氮均呈明显上升趋势,添加碧萝芷提取物能显著抑制脂肪的酸败变质,在0～2 d,碧萝芷组的MDA值基本没有变化,4～8 d内MDA值反而有下降的趋势,表明碧萝芷不仅可以抑制氧化产物的产生,而且可能对已经产生的氧化产物MDA有降解作用。碧萝芷对过氧化值和酸价的抑制作用分别是空白对照组的1.5倍和2倍,但总体上对挥发性盐基氮的抑制效果不明显。表明碧萝芷提取物对2～4℃储藏的肉糜具很强的抗氧化作用。

碧萝芷对肿瘤生长和非特异性免疫作用的影响

目的 探讨碧萝芷对肿瘤生长的影响和对非特异性免疫的增强作用。方法 采用S180 与H2 2 两瘤株动物移植性肿瘤实验 ,观察对肿瘤生长的影响 ;利用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及乳酸脱氢酶法检测NK细胞活性等非特异性免疫作用的变化。结果 碧萝芷对S180 与H2 2 肿瘤生长未见明显影响 ,但具有明显增强巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性的作用。结论 碧萝芷具有增强非特异性免疫的作用 。

碧萝芷对老年大鼠的抗氧化作用

目的 :探讨碧萝芷对老年大鼠的抗氧化作用。方法 :选用 4 0只 2 0月龄的Wistar大鼠 ,分为空白对照组及碧萝芷高、中、低剂量组 4组 ,分别给予蒸馏水、受试物 5 0 .0mg/kg、1 6 .7mg/kg、8.4mg/kg每d灌胃 1次 ,连续 8周。采用黄嘌呤氧化酶法测血清、肝及脑组织匀浆的SOD活性 ,硫代巴比妥酸 (TBA)法测血清及肝、脑组织中MDA含量 ,并同时检测脑组织的单胺氧化酶 (MAO)活力和脂褐质含量。结果 :与空白对照组比较 ,碧萝芷各剂量组血清、肝、脑组织中的MDA含量均较低 (P <0 .0 5 ) ,除肝组织外SOD的活性明显升高 (P <0 .0 5 ) ;脑组织MAO活力及脂褐质含量也均低于空白对照组。各剂量组间比较 ,高剂量组脑组织MDA含量高于低剂量组 (P <0 .0 5 ) ,中、高剂量组脑组织MAO活力及脂褐质含量低于低剂量组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。结论 :碧萝芷有抗氧化作用 ,可延缓大鼠衰老进程。

碧萝芷通过下调ERK磷酸化及自噬水平抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞活化

目的:探究碧萝芷对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞活化的影响。方法:5μg/L TGF-β1和不同浓度碧萝芷(0、10、25、50 mg/L)分别作用于LX-2细胞,在有或无自噬抑制剂3-MA和ERK抑制剂PD98059的情况下,用MTT法检测细胞活力的变化,Western blot实验检测α-SMA、ColⅠ、TIMP-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、beclin1、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白水平的变化。结果:与对照组相比,5μg/L TGF-β1组的LX-2细胞活力以及α-SMA、ColⅠ、TIMP-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、beclin 1、p-ERK1/2和ERK1/2蛋白水平明显增加(P<0.05)。而碧萝芷预处理能逆转上述效应,并呈现一定的剂量依赖性,50 mg/L碧萝芷的抑制效果最为显著(P<0.05)。而且,与TGF-β1组相比较,50 mg/L碧萝芷、5 mmol/L 3-MA或者20μmol/L PD98059预处理下,TGF-β1诱导的LX-2细胞活力以及α-SMA和LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论:碧萝芷通过下调ERK磷酸化及自噬水平抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞活化。

碧萝芷对黑腹果蝇寿命影响的研究

目的 用黑腹果蝇的生存实验来观察碧萝芷 (pycnogenol)的延缓衰老功能。方法 收集 8h内羽化而未交配的果蝇进行雌雄分组 ,每个浓度组 2 0 0只果蝇 ,共 4个浓度组 ,每 2天记录果蝇存活数 ,每 4天更换培养基 ,直至果蝇全部死亡。结果 雄性果蝇的平均寿命指标中 4个浓度组都显示了阳性 (P <0 .0 1) ,平均最高寿命组的 0 .0 0 2 5 %浓度雌性果蝇为阳性 (P <0 .0 5 )。

碧萝芷通过激活蛋白激酶B改善AML12细胞胰岛素抵抗

目的探讨碧萝芷(PYC)对油酸(OA)诱导的AML12细胞胰岛素抵抗的作用及其相关分子机制。方法将细胞分为空白对照组、PYC50(50μg/mL)组、OA(200μmol/L)组、PYC10(10μg/mL)+OA(200μmol/L)组、PYC50(50μg/mL)+OA(200μmol/L)组。应用葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖摄取量,糖原染色法检测糖原含量。实时PCR检测糖异生基因G6PC、PEPCK、PGC1αmRNA和糖酵解基因Eno1、PKLR、Gpi1 mRNA表达,Western blotting检测IRS/p-IRS、AKT/p-AKT、p-GSK3β的表达。结果与OA组比较,PYC10+OA组、PYC50+OA组培养基上清葡萄糖剩余含量明显减少(P<0.05),糖原含量明显增加(P<0.05)。PYC10+OA组、PYC50+OA组分别与OA组比较,糖异生基因G6PC、PEPCK、PGC1αmRNA表达无统计学差异(P>0.05),糖酵解基因Eno1、Gpi1 mRNA表达无统计学差异(P>0.05),但PKLR mRNA表达增加(P<0.05)。在胰岛素信号通路中,PYC10+OA组、PYC50+OA组分别与OA组比较,p-IRS表达无统计学差异(P>0.05),但p-AKT、p-GSK3β蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论PYC通过激活AKT促进PKLR表达增加糖酵解,并且促进p-GSK3β表达增加糖原合成来调控AML12细胞胰岛素抵抗。

碧萝芷对辐射所致小鼠各脏器中自由基的清除作用

目的观察碧萝芷对60Coγ射线整体照射所致小鼠主要脏器中超氧化物歧化酶(superoxidedis mutase,SOD)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、抗超氧阴离子自由基能力和抑制羟自由基能力的影响。方法小鼠随机分成3组:正常对照组,辐照对照组及碧萝芷实验组。辐照对照组及碧萝芷实验组各接受1次γ射线照射,同时碧萝芷实验组用碧萝芷灌胃,连续7 d。处死后取肝、脾、肾和睾丸组织,测定SOD活力、MDA含量、抑制羟自由基能力和抗超氧阴离子自由基能力。结果碧萝芷对受照小鼠脏器中SOD活力影响不大,可降低脏器中MDA含量;能增加肝脏、肾脏和睾丸组织中抗超氧阴离子自由基能力和抑制羟自由基能力,增加脾脏抑制羟自由基能力。结论碧萝芷具有一定的抗辐射损伤作用,其通过直接中和超氧阴离子自由基和羟自由基而发挥抗氧化功能,并不增加组织中的抗氧化酶含量。

碧萝芷对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡及转移影响

目的探讨松树皮提取物碧萝芷对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡和转移的影响及可能机制。方法分别用30、60和90mg/L的碧萝芷和RPMI 1640培养基(对照组)处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用MTT法检测碧萝芷对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用;克隆形成实验检测对MDA-MB-231细胞体外生长能力的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell小室法分别检测各浓度碧萝芷对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白质印迹法分别检测碧萝芷处理后,乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP以及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达;明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性。结果MTT结果显示,与对照组相比,碧萝芷呈剂量依赖及时间依赖性抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,差异有统计学意义,F浓度=178.335,P浓度<0.001;F时间=3.476,P时间=0.035;二因素间交互作用:F时间×浓度=3.162,P时间×浓度=0.007,为协同作用。克隆形成实验结果显示,对照组及30、60、90mg/L碧萝芷组克隆形成率分别为(20.09±1.96)%、(14.34±2.05)%、(12.90±1.37)%和(9.81±1.27)%,差异有统计学意义,F=57.902,P<0.001。流式细胞仪检测结果显示,对照组及30、60、90mg/L碧萝芷组的细胞凋亡率分别为(3.58±0.26)%、(5.75±0.40)%、(9.60±0.20)%和(19.71±0.38)%,差异有统计学意义,F=4507.561,P<0.001。Transwell小室结果显示,对照组及30、60、90mg/L碧萝芷组的迁移细胞数目分别为41±3、36±4、22±5和9±2,差异有统计学意义,F=131.882,P<0.001;侵袭转移的细胞数目分别为30±4、27±3、17±2和10±2,差异有统计学意义,F=89.964,P<0.001。蛋白质印迹法结果显示,碧萝芷可上调Bax(F=973.558,P<0.001)、Caspase-9(F=679.196,P<0.001)、Caspase-3(F=912.678,P<0.001)和PARP(F=70.155,P<0.001)蛋白表达,下调Bcl-2(F=216.980,P<0.001)蛋白表达。同时,各组MDA-MB-231细胞中的MMP-2(F=160.844,P<0.001)及MMP-9(F=94.135,P<0.001)蛋白表达水平降低;MMP-2(F=1363.577,P<0.001)和MMP-9(F=1017.977,P<0.001)活性降低。结论碧萝芷可通过促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的方式抑制其生长,且能抑制细胞的迁移和转移。

碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和转移的影响

目的探讨抗氧化剂碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,并对观察碧萝芷对MCF-7细胞的转移和迁移功能的影响。方法用10、20、40μg/ml的碧萝芷处理乳腺癌MCF-7细胞作为实验组,空白对照组只加入DMEM培养基(无血清), MTT法在处理细胞后24、48、72 h于波长490 nm处测定各组吸光度值;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用β-半乳糖苷酶染色法检测MCF-7细胞衰老率;用Transwell小室法分别检测各浓度碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;用Western blot法分别检测乳腺癌MCF-7细胞衰老相关蛋白P53、P21、P16、P27、E2F1以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-2、MMP-9的表达。细胞迁移、侵袭数目及各种蛋白的表达水平比较采用单因素方差分析,吸光度值比较采用重复测量的方差分析,两两比较采用LSD法。结果 MTT结果显示,在处理乳腺癌MCF-7细胞24、48、72 h后,各组吸光度值比较,差异有统计学意义(F=149.439,P<0.001),在不同时间点之间比较,差异有统计学意义(F=27.922,P<0.001);分组与时间点之间存在交互作用(F=18.466,P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示:空白对照组及10、20、40μg/ml碧萝芷组的细胞凋亡率分别为(2.36±0.27)%、(6.44±1.43)%、(7.52±2.09)%和(11.68±1.65)%,差异有统计学意义(F=19.143,P<0.001)。β-半乳糖苷酶染色法结果显示:空白对照组和10、20、40μg/ml碧萝芷组的细胞衰老率分别为(5.35±1.32)%、(20.08±2.14)%、(40.55±4.61)%和(59.26±4.10)%,差异有统计学意义(F=150.150,P<0.001)。Transwell小室结果显示:空白对照组及10、20、40μg/ml碧萝芷组的迁移细胞数目分别为(41±5)、(27±2)、(19±1)、(11±2)个,差异有统计学意义(F=59.330,P<0.001);侵袭转移的细胞数目分别为(24±4)、(17±1)、(12±2)、(7±2)个,差异也有统计学意义(F=26.230,P<0.001)。Western blot结果显示:碧萝芷可上调P53、P21、P16、P27蛋白表达(F=263.905、424.937、217.515、391.115,P均<0.001),下调E2F1蛋白的表达(F=64.003,P<0.001);同时,各组MCF-7细胞中的MMP-2及MMP-9蛋白表达水平明显降低(F=44.104、45.594,P均<0.001)。结论碧萝芷可能是以促衰老的方式抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,且能抑制细胞的迁移和转移。