PYDDT通过ROS激活p53诱导结肠癌细胞HCT116凋亡机制的研究

目的:研究PYDDT诱导人结肠癌细胞HCT116凋亡的作用及分子机制。方法:以p53野生型人结肠癌细胞HCT116为研究对象,分别以MTT法测定PYDDT对细胞增殖的抑制作用,Annexin V/PI双染法测定细胞凋亡率,DCFH-DA法测定活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS),Western blot法检测p53和凋亡相关蛋白的表达。此外,采用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine,NAc)预处理2 h,检测PYDDT对HCT116细胞凋亡率、p53及凋亡相关蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,PYDDT呈剂量依赖抑制HCT116细胞的生长,5、10和20μM的PYDDT处理24 h后,细胞存活率分别为75.4%、59.4%和27.3%;凋亡率为20.2%、31.9%和76.3%;胞内ROS水平明显升高;Western blot结果表明,PYDDT处理24h后的HCT116细胞,p53及其下游靶基因Bax表达显著上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2与空白对照组相比未明显改变,Caspase级联反应被激活。同时,5 mM的NAc能够逆转PYDDT(10μM)的促凋亡作用,PYDDT+NAc组p53、Bax的表达较空白对照组无差异,Caspase3未被激活。结论:PYDDT具有诱导HCT116细胞凋亡的作用,其机制是通过上调胞内ROS水平,继而上调p53及其下游靶基因Bax的表达,激活Caspase级联反应促发凋亡。