PYNOD对LPS活化的BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响

目的:观察PYNOD对LPS活化的BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响。方法:将表达PYNOD的重组质粒p EGFP-C2-PYNOD瞬时转染BV2细胞后,加入LPS作用24 h,Griess法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)的释放,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测诱导型一氧化氮合酶(inducible NO synthase,i NOS)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)mRNA的表达,此外Western blotting和ELISA法检测i NOS和IL-1β的蛋白表达。结果:转染PYNOD重组质粒能显著抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症因子NO的释放(P<0.05)。Real-time PCR证实PYNOD可抑制i NOS和IL-1β的mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA和Western blotting证实PYNOD可下调i NOS和IL-1β蛋白的表达(P<0.05)。结论:PYNOD蛋白可以在转录水平和翻译水平显著抑制LPS刺激的BV2小胶质细胞活化产生的炎症反应。

过表达PYNOD调控LPS介导BV2小胶质细胞极化的机制研究

目的:研究PYNOD对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导的BV2小胶质细胞极化的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养BV2细胞,建立LPS介导的细胞模型,并将细胞分成对照(control)组、LPS组、空质粒对照组(NC+LPS组)和过表达PYNOD组(PYNOD+LPS组)。采用real-time PCR检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-10和PYNOD的mRNA表达;ELISA检测细胞培养液中IL-6、TNF-α和IL-10含量;Western blot检测细胞中PYNOD、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)P65、磷酸化P65(p-P65)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的蛋白表达。结果:与con⁃trol组相比,LPS组IL-6、TNF-α和IL-10的表达和分泌量均显著升高(P<0.05);p-P65蛋白水平显著升高,而PPARγ蛋白表达显著降低(P<0.01)。与NC+LPS组相比,PYNOD+LPS组IL-6和TNF-α的表达和分泌量显著降低(P<0.05),IL-10的表达和分泌量显著升高(P<0.05);p-P65蛋白水平显著降低,而PPARγ蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:PYNOD过表达能够抑制小胶质细胞的M1型极化,促进M2型极化,其机制可能与降低NF-κB活性和升高PPARγ表达有关。

PYNOD抑制NLRP3炎症小体调控小胶质细胞焦亡的脓毒症相关性脑病

目的观察PYNOD对小胶质细胞焦亡的影响。方法采用盲肠结扎穿刺构建脓毒症小鼠模型,收集小鼠脑组织,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测小鼠脑组织中PYNOD水平。通过LPS刺激BV2细胞或过表达PYNOD,采用蛋白质免疫印迹检测细胞中PYNOD与GSDMD蛋白表达水平。结果与假手术组相比,脓毒症组小鼠脑组织中PYNOD表达水平显著增加;与对照组相比,LPS刺激后BV2细胞中PYNOD表达显著增加;PYNOD高表达能够显著抑制GSDMD水平。结论脓毒症模型小鼠脑组织中PYNOD表达水平升高,下调GSDMD表达,抑制小胶质细胞焦亡。