扩张型心肌病心衰患者血骨膜蛋白、可溶性生长刺激表达基因2蛋白及N端脑钠肽前体水平的临床意义

目的:探讨扩张型心肌病心衰患者血清骨膜蛋白(POSTN)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)及N端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平的临床意义。方法:选取2022年11月至2023年4月在东海县人民医院心内科住院的扩张型心肌病(DCM)心衰患者60例作为DCM组,同时选择在该院体检正常者55例作为对照组。检测比较两组血清POSTN、sST2及NT-proBNP水平。结果:DCM组的血清POSTN、sST2及NT-proBNP水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:POSTN、sST2及NT-proBNP水平与DCM心衰密切相关,上述指标可用于辅助判断相关治疗效果及预后。

N-端脑利钠肽前体/可溶性生长刺激表达基因2蛋白联合检测试剂盒的临床性能评价

目的评价N-端脑利钠肽前体(NT-proBNP)/可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)联合检测试剂盒的临床性能。方法选取广西中医药大学第一附属医院2023年4—9月收治的130例患者的血清样本,采用巴迪泰(广西)生物科技有限公司生产的NT-proBNP/ST2联合检测试剂盒检测样本的NT-proBNP和ST2水平,分别与罗氏NT-proBNP检测试剂盒、CriticalDiagnostics PresageST2检测试剂盒的检测结果进行相关性和一致性比较(相关性比较采用线性回归分析法,一致性比较采用Bland-Altman Plot分析法)。结果线性回归分析结果显示,联合检测试剂盒NT-proBNP检测结果与罗氏NT-proBNP检测试剂盒检测结果的相关系数R=0.9951,ST2检测结果与Critical Diagnostics Presage ST2检测试剂盒检测结果的相关系数R=0.9958;将联合检测试剂盒与单一检测试剂盒检测NT-proBNP、ST2结果的平均值作为横坐标,差值作为纵坐标,绘制Bland-Altman Plot分析图进行一致性分析,结果显示,两项指标分别有95.38%(124/130)、94.62%(123/130)的值位于范围内。结论NT-proBNP/ST2联合检测试剂盒与单一检测试剂盒检测NT-proBNP和ST2的相关性好、一致性高,可满足临床检测要求。

血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白、N末端脑钠肽前体、神经酰胺风险评分联合Fried衰弱量表对老年慢性心力衰竭患者预后的评估价值

目的探讨血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、神经酰胺风险(CERT)评分联合Fried衰弱量表对老年慢性心力衰竭(CHF)患者预后的评估价值。方法回顾性分析2020年7月至2021年7月于徐州医科大学附属医院收治住院治疗的304例老年慢性心力衰竭患者的临床资料。随访1年,根据随访期间是否发生不良心血管事件(MACE)将患者分为MACE组(76例)和非MACE组(228例)。比较2组患者血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱的差异。采用SPSS 25.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验、秩和检验或χ^(2)检验进行组间比较。采用Spearman相关分析左心室射血分数(LVEF)与sST2、NT-proBNP、CERT评分等指标的相关性。采用logistic回归分析MACE的影响因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱对老年慢性心力衰竭患者预后的评估价值。结果sST2、NT-proBNP、CERT评分与LVEF呈负相关(r=-0.241,-0.193,-0.183;P<0.05)。与非MACE组比较,MACE组患者sST2、NT-proBNP、CERT评分、衰弱比例更高,LVEF值更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、NT-proBNP水平、CERT评分、衰弱对CHF患者预后不良的预测的曲线下面积(AUC)分别为0.695、0.713、0.636、0.658,四项联合预测AUC为0.800。结论血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱是老年CHF患者发生MACE的重要影响因素,具有较高的预后预测价值,且联合预测价值更高。

血清血管紧张素2和生长刺激表达基因2蛋白及末端脑利钠肽前体表达水平与扩张型心肌病患者预后的相关性分析

目的探究血清血管紧张素2(Ang2)、生长刺激表达基因2蛋白(ST2)及末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)表达水平与扩张型心肌病(DCM)患者预后的相关性。方法选取2015年3月至2019年3月于本院接受治疗的90例DCM患者作为研究组,另选取同期40名健康体检者作为对照组,比较两组Ang2、ST2、NT-proBNP表达水平。对研究组随访15个月,按照随访结果分为死亡组(n=13)、再入院组(n=28)和无再发事件组(n=49),比较3组Ang2、ST2、NT-proBNP表达水平,评估Ang2、ST2、NT-proBNP水平对DCM患者预后评估的灵敏度、特异度和一致性。采用ROC分析3种因子对DCM患者预后的临床意义。结果研究组血清Ang2、ST2、NT-proBNP水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组、再入院组血清Ang2、ST2、NT-proBNP水平均高于无再发事件组,且死亡组高于再入院组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ang2评估预后一致性为0.86,灵敏度为90.24%,特异度为81.63%;ST2评估预后一致性为0.81,灵敏度为82.93%,特异度为79.59%;NT-proBNP评估预后一致性为0.84,灵敏度为87.80%,特异度为81.63%。血清Ang2、ST2、NT-proBNP均对扩张型心肌病患者预后具有较好的预测价值(P<0.05)。结论血清Ang2、ST2、NT-proBNP表达水平与DCM患者的预后密切相关,在心脏事件再发的评估中具有较高的临床价值,值得临床推广应用。

小干扰RNA对人淀粉样前体蛋白基因的沉默作用(英文)

目的观察小干扰RNA(siRNA)对人淀粉样前体蛋白(APP)基因的沉默作用。方法该研究将设计好的一对寡核甘酸在细胞内源性地转录成小发夹RNA(shRNA),同时构建了携带两个APP亚型的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的GFP-APP重组质粒。利用EGFP作为报告基因,在COS-7细胞内通过共转染siRNA表达质粒和GFP-APP的重组质粒来观察沉默效应。结果针对APP的siRNA可有效地下调APP基因。结论针对APP的siRNA将不仅在研究APP基因功能和深入研究阿尔茨海默病(AD)的病理分子机制上,而且在运用siRNA这种新型的反义核酸药物治疗AD方面扮演重要角色。

逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达

为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。

还脑益聪方提取物对淀粉样前体蛋白/早老蛋白1双转基因痴呆模型小鼠学习记忆能力的改善作用及其机制

目的探讨还脑益聪方(HYD)提取物改善学习记忆能力的作用机制。方法 3月龄淀粉样前体蛋白(APP)/早老蛋白1(PS1)双转基因小鼠,随机分为模型对照、盐酸多奈哌齐0.65 mg·kg-1、HYD提取物1.7和3.4 g·kg-1组,同龄C57BL/6J小鼠为正常对照。给药组小鼠ig给药,每日1次,连续6个月。给药结束后以跳台实验和Morris水迷宫实验观察小鼠行为变化,HE染色观察小鼠海马CA1区神经元形态变化,实时RT-PCR测定海马组织PS1、热休克蛋白70羧基端作用蛋白(CHIP)、鸟苷酸结合蛋白(CDC42)、呆蛋白(NCT)、激活蛋白-1(AP-1)和活化T细胞核因子(NFAT3)mRNA表达。结果与正常对照组比较,模型组小鼠跳台实验的错误次数增加(P<0.05),潜伏期缩短(P<0.01);水迷宫实验的穿台次数减少(P<0.05),潜伏期延长(P<0.05);海马CA1区神经元数量明显减少,形态结构有所破坏,PS1和CHIP mRNA表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,跳台实验中多奈哌齐、HYD提取物1.7和3.4 g·kg-1组小鼠的错误次数分别由模型组的5.1±1.2减少至2.2±1.1,2.7±1.2和2.1±1.2(P<0.05),潜伏期由(70±27)s延长至130±33,162±33和(213±38)s(P<0.01);水迷宫实验中小鼠的穿台次数分别由2.1±1.8增加至3.5±1.9,3.6±2.0和3.8±1.8(P<0.05),潜伏期由(139±57)s缩短至95±58,95±58和(94±56)s(P<0.05);海马CA1区神经元数量明显增多,形态较完整;HYD提取物1.7和3.4 g·kg-1可明显降低APP/PS1双转基因小鼠海马PS1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),使CHIP mRNA表达进一步升高(P<0.01),对CDC42,NCT,AP-1和NFAT3 mRNA表达均无明显影响。结论HYD提取物具有提高APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的作用,该作用可能与其保护神经元和降低PS1mRNA表达有关。

黑色素前体多巴和多巴胺培养后的中华按蚊蛹体壁结构特征及其转录组分析

【目的】筛选出促黑化条件下中华按蚊Anopheles sinensis蛹体壁中表达变化最显著的基因类群,并初步探究它们与黑色素前体累积及表皮结构特征间的相关性。【方法】在Grace’s昆虫细胞培养基中添加黑色素前体多巴(dopa)和多巴胺(dopamine),对化蛹20 min内中华按蚊体壁进行体外培养,对照组(CK)中不添加黑色素前体,培养16 h时利用体视显微镜观察黑色素前体处理组与对照组蛹体壁着色和表皮截面特征;通过Illumina测序平台对黑色素前体处理组与对照组蛹体壁进行转录组测序,对差异表达基因(different expression genes,DEGs)进行GO功能分类和KEGG通路富集分析;分析被显著富集的基因注释和染色体分布;利用qRT-PCR验证转录组数据。【结果】多巴和多巴胺处理组中华按蚊蛹体壁与表皮截面相比于CK明显黑化,且多巴处理组着色程度最深;多巴和多巴胺处理组中华按蚊蛹表皮相比于CK明显增厚,且增厚程度与黑化程度相关。多巴处理组vs CK与多巴胺处理组vs CK比较组的DEGs分别为2952和697个,且下调基因居多;这两类比较组间共有上调的DEGs有223个,共有下调的DEGs有347个。DEGs的GO功能注释结果表明,在上述比较组以及两比较组间共有的上调DEGs被显著富集到表皮结构组分(GO:0042302)。KEGG通路富集分析结果显示,多巴处理组vs CK比较组上调的DEGs被显著富集到剪切体通路,下调的DEGs被显著富集到Toll-Imd和Hippo信号通路;在多巴胺处理组vs CK比较组中下调DEGs被显著富集到自噬通路;这两比较组间共享的DEGs没有被显著被富集的通路;65个被富集的上调表皮蛋白基因来自于CPR,CPF,TWDL,CPLC和CPAP 5个家族,并分布于3条染色体,其中部分成员成簇分布。qRT-PCR结果显示,两比较组中所选择的共有上调的12个表皮蛋白基因的表达量与转录组数据一致。【结论】本研究在组学水平上证实了蚊虫体壁组织中黑色素的过量累积能够诱导大量表皮蛋白基因的显著上调表达,并使得其表皮结构特征发生改变。研究结果为后续探索黑色素前体对表皮结构基因的调控机制,以及理解昆虫表皮重要组分间的互作模式,对昆虫适应性状的影响提供了新的视角。

广东海风藤提取物对痴呆鼠脑内β淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的 研究老年痴呆鼠脑内 β淀粉样前体蛋白基因 (β APP)表达的改变 ;及广东海风藤提取物 (HS2 )对老年痴呆鼠学习记忆及脑内 β APP基因表达的影响。方法 选用昆明种小鼠 ,腹腔注射D 半乳糖和灌胃三氯化铝制备老年痴呆小鼠模型 ,三个治疗组在造模的同时分别灌胃低、中、高剂量的HS2 。通过Morris水迷宫和半定量反转录聚合酶链反应 (RT PCR)来测定HS2 对老年痴呆模型小鼠学习记忆和脑内 β APPmRNA含量的影响。结果 老年痴呆模型小鼠学习记忆成绩下降 ,脑内 β APP基因表达增强。模型小鼠口服低、中、高剂量HS2 能提高其学习记忆成绩 ,降低脑内β APPmRNA含量并呈现一定的量效关系。 结论 HS2 能改善老年痴呆鼠学习记忆能力并下调β APP基因的表达。

H102对APP转基因小鼠脑内淀粉样蛋白和淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响

目的:研究H102对APP695转基因模型小鼠脑内淀粉样蛋白和淀粉样蛋白前体蛋白表达的影响方法:9月龄转基因小鼠随机分为模型组和药物注射组,正常对照组采用月龄和性别与之相匹配的C57BL/6J小鼠。药物注射组给予侧脑室注射H102,每只每次3μl,连续10d;模型组和正常对照组给予等体积NS。应用免疫组织化学结合刚果红组织学染色,普通光学显微镜观察海马和颞叶皮层蛋白表达的变化。免疫印迹法检测小鼠大脑皮层APP蛋白的表达。结果:Aβ和APP免疫组化染色结果显示对照组海马CA1区神经元胞浆着色呈阴性或弱阳性,模型组较对照组阳性细胞增多,表达增强,胞浆着色明显加深。药物注射组同模型组相比,胞浆着色变淡,表达减弱。刚果红染色观察转基因小鼠模型组和H102注射组大脑颞叶皮层和海马的淀粉样斑块,可见H102注射组淀粉样斑块数较模型组明显减少。正常对照组未见阳性淀粉样斑块。免疫印迹检测显示模型组APP蛋白表达明显增加,给药组与模型组相比具有统计学意义。结论:APP695转基因小鼠大脑CA1区Aβ蛋白和APP蛋白表达增加,H102能够明显抑制该转基因小鼠Aβ蛋白和APP蛋白表达。

鸡减蛋综合征病毒(EDSV-76)末端前体蛋白的基因结构分析

从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒弱毒株ＡＡ－２，经常规方法提取其病毒核酸后，组建了完整的限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库，并对其中ＨｉｎｄⅢ（２１．０ｍ．ｕ．）－ＳａｃⅠ（３３．２ｕ．）进行了序列测定。同源比较分析证明：其Ｌ链含编码病毒末端前体蛋白，容量为５８０个氨基酸残基（ａａ）的开放读码框架（Ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ）。由此推导的多肽氨基酸序列及结构特点，如保守序列、核定位信号（Ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌ）。等与其他腺病毒的相应多肽存在较大差异。本文为阐明腺病毒末端前体蛋白参与ＤＮＡ复制起始的机制提供了新的依据。

阿尔茨海默病中β淀粉样前体蛋白基因外显子9、10的mRNA表达及突变研究

于上海地区汉人群中,探讨阿尔茨海默病(AD)患者外周血中β淀粉样前体蛋白基因外显子9、10(APP9～10)的mRNA表达水平,并作cDNA的点突变检测。采用半定量竞争性反转录聚合酶链反应(semi quantitivecompetitiveRT PCR)技术测定APP9～10的mRNA表达水平;以聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态(RFLP)方法检测基因组DNA中载脂蛋白E基因(APOE)和早老素1基因(PS1)多态;APP9～10cDNA的点突变检测采用变性梯度凝胶电泳法。结果表明(1)AD患者中APP9～10的mRNA表达水平显著高于健康老人(P<0.05);(2)作为AD的主要风险因子,APOE ε4等位基因并不影响AD患者中APP9～10的mRNA表达水平,而另一可疑风险因子PS1基因1等位基因的存在却可显著增加AD患者中APP9～10的mRNA表达;(3)AD患者中不存在APP9～10cDNA的点突变。提示上海汉人群中,AD患者外周血中APP基因外显子9、10的mRNA表达水平显著升高,也许这一生物学改变可作为一种生物学辅助诊断指标应用于AD的临床研究。

海风藤选择性抑制淀粉样前体蛋白基因表达(英文)

背景:淀粉样蛋白(β-amyloidprotein,β-AP)是老年斑的核心成分,它在脑内的沉积与阿尔茨海默病(Alzheimer'sAD)发病有着密切的关系。现代研究证实β-AP来源于淀粉样前体蛋白(β-amyloidprecursorprotein,β-APP),如果β-APP基因表达受到抑制,β-AP在脑内的沉积就会减少,阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)有可能得到有效防治。因此,很多国内外学者都在积极寻找β-APP基因表达抑制物,企图发现防治AD的有效药物。目的:研究海风藤对人类神经母细胞瘤细胞β-APP基因表达的影响。设计:药物(海风藤)干扰和非药物干扰对照;目的基因(β-APP)与结构基因(β-Actin)对照。材料:人类神经母细胞瘤细胞系列(SK-N-SH),海风藤。方法:应用细胞培养和反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)观察海风藤不同浓度和不同时间对β-APPmRNA的影响。结果:海风藤选择性的抑制β-APP基因表达,这种抑制作用随时间的延长和浓度的增加而增强。结论:海风藤选择性抑制β-APP基因表达,为其防治AD提供了更加可靠的实验依据。

人类免疫球蛋白超家族一个新成员:α-1B糖蛋白前体基因的克隆和分析

应用RACE方法 ,从人肝MarathoncDNA中克隆一 16 94bp的cDNA ,其中开放阅读框架在 4 3～ 15 30bp ,编码 4 95个氨基酸 ,1～ 17氨基酸为信号肽 ,有 4个IGc2结构域 ,与从人血浆分离的α 1B糖蛋白高度同源 ,是一个尚未克隆的α 1B糖蛋白前体基因 ,属于免疫球蛋白超家族的一个新成员 。

还脑益聪方组分对β淀粉样前体蛋白转基因痴呆小鼠行为学及胆碱能系统的早期干预作用

目的:观察还脑益聪方复方组分早期干预对阿尔茨海默病(Alzhei mer disease,AD)模型β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)转基因小鼠行为学及脑胆碱能系统的影响。方法:将60只3月龄APP695V717I转基因小鼠随机分为4组:模型组、大剂量还脑益聪方组[2.80g/(kg.d)]、小剂量还脑益聪方组[1.40g/(kg.d)]及盐酸多奈哌齐阳性对照组[0.65mg/(kg.d)],每组15只。15只遗传背景相同的非转基因C57BL/6J小鼠作为正常对照组。所试药物稀释至相同体积灌胃给药,正常组和模型组给以等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃6个月。采用Morris水迷宫实验和避暗实验进行小鼠行为学测试,采用酶联免疫吸附测定法分别检测小鼠大脑皮层和海马组织的乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)、乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)含量及胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)的活性,采用考马斯亮蓝法测定脑组织中蛋白的含量。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠学习记忆成绩均显著下降(P<0.05,P<0.01),海马和皮层组织的ACh含量和ChAT活性显著降低,AChE含量显著增加(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组小鼠的学习记忆能力均有明显提高(P<0.05);盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方大剂量组小鼠海马ACh含量明显提高(P<0.05),盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组小鼠海马AChE含量显著降低,ChAT活性显著升高(P<0.01,P<0.05);盐酸多奈哌齐组和还脑益聪方两组小鼠皮层ACh含量均明显提高(P<0.05),AChE含量有不同程度的降低,还脑益聪方两组小鼠皮层ChAT活性均明显提高(P<0.05)。结论:还脑益聪方能明显改善APP转基因小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与调控小鼠海马与皮层胆碱能系统相关酶的含量有关。

β-淀粉样前体蛋白转基因小鼠发育过程中海马CA1区神经细胞凋亡变化

目的:探讨瑞典家系β-淀粉样前体蛋白(APPSWE)转基因小鼠发育过程中海马CA1区神经细胞凋亡规律。方法:取不同发育时间(P0、P7、P14、P30、P90、P180)APPSWE转基因模型鼠与同时间点对照鼠,Nissl染色观察海马结构和锥体细胞形态,免疫组织化学方法观察海马细胞内Caspase-3表达变化,RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达变化。结果:随着小鼠的生长发育,P14时间点以后,模型组CA1区神经元Caspase-3阳性细胞密度比对照组高;RT-PCR检测结果与Caspase-3免疫组织化学结果基本一致。结论:APPSWE转基因小鼠发育中的海马神经细胞过度凋亡可能与阿尔茨海默病的发生、发展具有联系。

呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的探讨呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因表达的影响。方法22月龄SD大鼠采用海人酸破坏脑基底核法造成学习和记忆功能障碍的痴呆动物模型。造模后的大鼠随机分为痴呆模型组、呆聪液(低、中、高剂量)组,同时设正常对照组,每组10只。呆聪液低、中、高剂量组每日呆聪液灌胃(低5g/kg、中10g/kg、高20g/kg),痴呆模型组和正常对照组每天用生理盐水(10ml/kg)灌胃,共1个月。通过水迷宫法和反转录聚合酶链反应观察呆聪液对痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑内β-APP基因表达的影响。结果老龄痴呆模型大鼠学习记忆能力下降,脑内β-APP基因表达增强。呆聪液高、中、低剂量组能明显提高学习记忆能力,降低脑内β-APPmRNA含量,并有一定的量效关系,与痴呆模型组比较差异有显著性(P<0.05)。结论呆聪液能改善老龄痴呆大鼠的学习和记忆功能,下调β-APP基因的表达。

海风藤抑制淀粉样前体蛋白基因表达的研究

目的：研究海风藤对人类神经母细胞瘤细胞系列淀粉样前体蛋白（βＡＰＰ）基因表达的抑制作用。方法：应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交观察βＡＰＰｍＲＮＡ的变化，应用细胞存活率、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放、细胞集落观察海风藤对神经细胞的直接作用。结果：海风藤选择性的抑制βＡＰＰ基因表达。实验浓度内未发现细胞毒性作用。结论：βＡＰＰ与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病（ＡＤ）的发病关系密切。

淀粉样前体蛋白转基因痴呆模型小鼠视网膜和视神经纤维层病理改变

目的观察淀粉样前体蛋白(amyloid precusor protein,APP)转基因痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠视网膜组织病理和视神经纤维记数的改变。方法本实验采用6只10月龄的C57BL/6JAPP转基因雄性小鼠模型作为模型组,6只同月龄的C57BL/6J正常雄性小鼠作为正常对照组。处死小鼠,完整取出眼球分离视网膜,进行视网膜常规HE染色,同时取球后视神经制作半薄切片,甲苯胺蓝染色,光镜观察视神经形态,行图像分析和轴突纤维计数。结果视神经横断面模型组小鼠与正常对照组相比:神经纤维组织疏松,排列较紊乱,染色深浅不均,间质增多,部分轴突水肿。与正常对照组(1.77±0.04)×106相比,模型组小鼠视神经纤维数量(2.28±0.06)×106明显减少,视神经纤维密度正常对照组和模型组分别为(0.3836±0.0697)μm-2和(0.2701±0.0517)μm-2,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组神经细胞平均光密度值无明显变化,与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组小鼠视网膜神经节细胞层细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),两组内颗粒层和外颗粒层细胞数量无明显变化,差异无统计学意义(均为P>0.05)。结论 APP转基因AD模型小鼠视网膜神经节细胞数减少,视神经纤维数明显减少而且受损,提示APP转基因AD模型小鼠视网膜和视神经存在退行性病变。

淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质组蛋白质表达差异

目的:以蛋白质组学技术研究淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑蛋白质表达差异,从蛋白质分子水平探索老年性痴呆发病机制。方法:实验于2002-03/2003-10在河北医科大学第二医院、解放军总医院老年医学研究所、北京大学蛋白质工程国家重点实验室完成。淀粉样β蛋白前体转基因小鼠4只与正常C57小鼠4只脑组织经蛋白提取后,分别以固相pH梯度等电聚焦为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向进行双向电泳。图像分析软件Im-ageMaster2DElite分析电泳图谱。以MALDI-TOF质谱仪对差异蛋白进行鉴定。结果:8只小鼠均进入结果分析。11个蛋白点在淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑组织表达量明显不同。他们分别被鉴定为热休克蛋白86ku-1、神经丝三联体L、氧化还原酶75ku亚单位前体、血清白蛋白前体、甘油-3-磷酸脱氢酶、三磷酸腺苷合酶α亚单位、α-烯醇化酶、γ-烯醇化酶、泛素结合酶E2、肌酸激酶、天冬氨酸氨基转移酶。结论:通过蛋白质组学技术,寻找并鉴定了淀粉样β蛋白前体转基因小鼠与正常小鼠脑差异表达蛋白质。