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表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建 被引量:1
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作者 徐贞琦 蒋蕙如 +8 位作者 郭艺文 谢泉 殷楠 李拓凡 万志敏 邵红霞 秦爱建 张俊 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第4期47-53,共7页
为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光... 为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 VP1蛋白 CRISPR-Cas9 重组血清4型禽腺病毒 表达
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重组糖蛋白激素β5/α2调控cAMP/PKA/CREB通路促进3T3-L1细胞脂肪分解的作用及机制研究 被引量:1
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作者 千爱君 萧耿苗 +6 位作者 李壮 田雪 刘晓红 宋玉萍 赵正刚 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1272-1278,共7页
目的研究重组糖蛋白激素β5/α2(rCGH)对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响,并探究其潜在机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为成熟脂肪细胞,给予不同浓度rCGH干预24 h。以CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞的细胞活力,酶学方法测定细胞内... 目的研究重组糖蛋白激素β5/α2(rCGH)对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响,并探究其潜在机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为成熟脂肪细胞,给予不同浓度rCGH干预24 h。以CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞的细胞活力,酶学方法测定细胞内甘油三酯(TG)及培养上清中甘油的水平,油红O染色观察脂滴变化。Western blot检测各组脂肪细胞中HSL和ATGL脂解蛋白的表达水平。不同浓度rCGH加或不加PKA抑制剂H89对已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行联合干预实验,将培养细胞分为对照组、H89预处理组、1μmol·L^(-1)rCGH组和(1μmol·L^(-1)rCGH+H89)联合干预组。酶法测定胞内TG及游离甘油的含量,Western blot检测CREB及脂解相关蛋白的表达。结果不同浓度rCGH(0.25、0.5、1、2μmol·L^(-1))对脂肪细胞细胞活力无显著影响(P>0.05);与对照组相比,rCGH处理显著降低了脂滴大小和细胞内TG含量,同时显著升高了细胞上清液中的甘油浓度。rCGH处理还刺激了p-HSL、ATGL和p-PKA的蛋白表达。此外,加入PKA抑制剂H89,减弱了rCGH对游离甘油水平、细胞内TG含量以及p-HSL、p-PLIN1和p-CREB表达的影响。结论rCGH通过上调HSL、ATGL和PKA活性促进3T3-L1脂肪细胞的脂质分解,促进甘油释放,抑制TG合成和脂质积累,其作用机制与cAMP/PKA/CREB信号通路激活有关。 展开更多
关键词 重组蛋白激素β5/α2 3T3-L1脂肪细胞 甘油 甘油三酯 脂解 cAMP/PKA/CREB
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重组人分泌型磷蛋白1与呼吸系统疾病相关性研究进展
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作者 薛婷 杜伟勤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期433-439,444,共8页
重组人分泌型磷蛋白1[SPP-1,又称骨桥蛋白(OPN)]是一种重要的分泌型糖基化磷蛋白,参与机体的多种生理和病理过程如骨形成、炎症和免疫反应、肿瘤生长与转移等,近年来的相关研究表明,SPP-1可通过调节固有和适应性免疫反应在呼吸系统疾病... 重组人分泌型磷蛋白1[SPP-1,又称骨桥蛋白(OPN)]是一种重要的分泌型糖基化磷蛋白,参与机体的多种生理和病理过程如骨形成、炎症和免疫反应、肿瘤生长与转移等,近年来的相关研究表明,SPP-1可通过调节固有和适应性免疫反应在呼吸系统疾病的发生发展过程中发挥关键作用,本文就SPP-1与呼吸系统疾病相关性进行综述,以期进一步提高和加深人们对呼吸系统疾病发病机制及其治疗的了解。 展开更多
关键词 重组人分泌型磷蛋白1 骨桥蛋白 呼吸系统疾病 研究进展
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重组人血管内皮抑制素联合程序性细胞死亡蛋白1抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌的效果及安全性分析
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作者 侯春立 许佳睿 +4 位作者 何强 朱铁年 吴红海 陈虹 薛倩 《中国医药》 2024年第3期366-371,共6页
目的探讨持续静脉泵入重组人血管内皮抑制素联合程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床效果及安全性。方法回顾性选取2020年1月至2022年1月于中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院接受治疗的晚期NSCLC患... 目的探讨持续静脉泵入重组人血管内皮抑制素联合程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床效果及安全性。方法回顾性选取2020年1月至2022年1月于中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院接受治疗的晚期NSCLC患者90例,根据治疗方案不同分为A、B、C组,各30例。A组选用PD-1抑制剂+重组人血管内皮抑制素注射液+含铂两药的治疗方案;B组选用PD-1抑制剂+含铂两药的治疗方案;C组选用重组人血管内皮抑制素注射液+含铂两药的治疗方案。主要研究终点为客观缓解率(ORR)及无进展生存期(PFS),次要研究终点为疾病控制率(DCR)及安全性。结果3组ORR、DCR比较差异均有统计学意义(P=0.039、0.018),其中A组ORR、DCR[50.0%(15/30)、83.3%(25/30)]均最高。A、B、C组中位PFS分别为7.4、5.6、5.7个月,3组PFS比较差异有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox回归模型分析结果显示性别、表皮生长因子受体突变及转移器官数量是影响晚期NSCLC患者PFS的危险因素(均P<0.05)。A组发生不良反应总计55例次,其中严重不良反应(3~4级)4例。B组发生不良反应总计54例次,其中严重不良反应(3~4级)4例。C组发生不良反应总计51例次,其中严重不良反应(3~4级)2例。结论重组人血管内皮抑制素联合PD-1抑制剂治疗晚期NSCLC显现出了良好的临床效果,且不良反应相对可控。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 重组人血管内皮抑制素 程序性细胞死亡蛋白1抑制剂
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重组人生长激素治疗前后糖尿病足患者血清中IGF-1、IGFBP-3和血浆蛋白水平的变化及其意义 被引量:14
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作者 尚涛 任艳丽 +1 位作者 李静 张英 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1209-1214,共6页
目的:检测糖尿病足(DF)患者血清中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)和血浆蛋白的水平,探讨重组人生长激素(rhGH)对DF患者的治疗作用。方法:选取DF患者(DF组,n=40)、糖尿病患者(DM组,n=40)和健康成年人(正... 目的:检测糖尿病足(DF)患者血清中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)和血浆蛋白的水平,探讨重组人生长激素(rhGH)对DF患者的治疗作用。方法:选取DF患者(DF组,n=40)、糖尿病患者(DM组,n=40)和健康成年人(正常对照组,n=40)为研究对象。将DF组患者按照患者意愿分为rhGH治疗组和常规治疗组,每组各20例。rhGH治疗组患者给予0.4IU·kg-1·d-1rhGH注射液,皮下注射,每个疗程15d,2个疗程间隔5d,总计3个疗程;常规治疗组患者给予同等剂量生理盐水皮下注射。比较各组研究对象一般临床资料、治疗前后血清IGF-1和IGFBP-3水平、患者病情分级构成、血浆蛋白总蛋白(TP)、转铁蛋白(TRF)、空腹血糖(FBG)水平及DF组患者和正常对照组研究对象rhGH治疗有效率和创面愈合时间。结果:DF组患者血清IGF-1和IGFBP-3水平明显低于DM组和正常对照组(P<0.01);DM组患者血清IGF-1和IGFBP-3水平明显低于正常对照组(P<0.05)。rhGH治疗组患者治疗后血清IGF-1、IGFBP-3和血浆TP、TRF水平与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05),且均高于常规治疗组治疗后的相应指标(P<0.05);DM组和正常对照组研究对象FBG水平比较差异无统计学意义(P<0.05)。rhGH治疗组患者有效率明显高于常规治疗组(P<0.05)。结论:DF患者经rhGH治疗后有效率提高,适合临床推广。 展开更多
关键词 重组人生长激素 糖尿病足 胰岛素样生长因子1 血浆总蛋白 转铁蛋白
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重组融合蛋白GX1-rmhTNFα的克隆、表达及鉴定 被引量:10
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作者 曹珊珊 吴开春 +4 位作者 颜真 万一 韩宇 赵丽娜 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期360-362,共3页
目的构建胃癌新生血管导向性肽GX1与新型人肿瘤坏死因子(GX1-rmhTNF)基因的原核表达载体,表达GX1-rmhTNF蛋白。方法利用基因工程方法将胃癌血管特异性结合肽融合在新型人肿瘤坏死因子α的氨基末端,构建GX1-rmhTNF原核表达载体,在大肠杆... 目的构建胃癌新生血管导向性肽GX1与新型人肿瘤坏死因子(GX1-rmhTNF)基因的原核表达载体,表达GX1-rmhTNF蛋白。方法利用基因工程方法将胃癌血管特异性结合肽融合在新型人肿瘤坏死因子α的氨基末端,构建GX1-rmhTNF原核表达载体,在大肠杆菌进行表达。对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Westernblot检测分析。结果成功构建了GX1-rmhTNF重组融合表达质粒,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在相对分子质量(Mr)约18000处出现了1条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TNFα单克隆抗体特异性的结合能力。结论成功构建了GX1-rmhT-NF基因的原核表达载体并在原核细胞中表达了该产物,为下一步GX1-rmhTNF的纯化奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体肽段CGNSNPKSC/GX1 GX1-rmhTNFα 重组融合蛋白/表达 温度诱导
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我国HIV-1 B'/C重组流行株Tat蛋白的表达、纯化及功能分析 被引量:14
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作者 陆彬 邢辉 +2 位作者 赵全壁 耿运琪 邵一鸣 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期297-302,共6页
根据全国HIV分子流行病学研究发现,B'和C亚型HIV-1在我国发生了重组,并以优势株形式在我国广泛流行。为了探讨这种HIV-1B'/C重组毒株tat基因的变异与其表型之间的关系,利用pET表达系统在大肠杆菌中高效表达了三种不同基因变异... 根据全国HIV分子流行病学研究发现,B'和C亚型HIV-1在我国发生了重组,并以优势株形式在我国广泛流行。为了探讨这种HIV-1B'/C重组毒株tat基因的变异与其表型之间的关系,利用pET表达系统在大肠杆菌中高效表达了三种不同基因变异类型的Tat蛋白,重组蛋白占菌体总蛋白的26%,Westernblot显示较好的反应原性,并通过金属鏊合层析纯化了目的蛋白。荧光素酶活性检测表明:体外表达的Tat蛋白具有明显的生物学活性,可以反式激活HIVLTR引导的报告基因的表达;三种Tat蛋白在激活活性上的差异与流行现场检测的病毒载量的高低存在明显的对应关系,说明tat基因的变异可以引起病毒生物学特性的改变,进而影响病毒的流行特征。此结果为进一步研究我国HIV重组毒株的基因变异特征及变异规律奠定了基础。 展开更多
关键词 HIV-1B'/重组流行株 TAT蛋白 表达 纯化 功能分析 人免疫缺陷病毒1 基因变异
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泰勒焦虫重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1间接ELISA检测方法的建立 被引量:4
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作者 魏玉荣 易忠 +10 位作者 马文戈 郭会玲 向银珍 米晓云 陈智 魏婕 苗书魁 吴国梁 祁巧芬 埃尼瓦尔.太外库力 黄炯 《新疆农业大学学报》 CAS 2013年第5期360-365,共6页
以真核表达的焦虫表面抗原重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1作为ELISA板包被抗原,通过方阵实验确定抗原包被浓度,探索抗原包被时间、温度、一抗及二抗血清稀释度及作用时间,建立牛环形泰勒焦虫表面抗原重组蛋白ELISA方法。结果得出TaSP-Tams1-S... 以真核表达的焦虫表面抗原重组蛋白TaSP-Tams1-SPAG1作为ELISA板包被抗原,通过方阵实验确定抗原包被浓度,探索抗原包被时间、温度、一抗及二抗血清稀释度及作用时间,建立牛环形泰勒焦虫表面抗原重组蛋白ELISA方法。结果得出TaSP-Tams1-SPAG1的最佳包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为OD492nm≥0.348,重复试验变异系数小于12%,所建立的ELISA方法不与牛巴贝斯虫及牛瑟氏泰勒虫血清发生反应。TaSP-Tams1-SPAG1为抗原建立的ELISA方法特异性强,敏感度高,重复性好,为牛环形泰勒焦虫病的准确检测及防治提供技术支持。 展开更多
关键词 泰勒焦虫 TaSP-Tams1-SPAG1 重组蛋白 ELISA
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细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合蛋白诱导小鼠免疫应答 被引量:12
9
作者 周必英 陈雅棠 +1 位作者 李文桂 杨梅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期232-237,共6页
目的研究细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合蛋白免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法 56只SPF级雌性Balb/c小鼠随机均分7组,分别为重组Bb-Eg95-EgA31皮下注射组(A组)、肌肉注射组(B组)、鼻腔内接种组(C组)、口服灌胃组(D组)... 目的研究细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合蛋白免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法 56只SPF级雌性Balb/c小鼠随机均分7组,分别为重组Bb-Eg95-EgA31皮下注射组(A组)、肌肉注射组(B组)、鼻腔内接种组(C组)、口服灌胃组(D组)、空载体对照组(E组)、Bb对照组(F组)和Bb培养用液体培养基(MRS)对照组(G组)。免疫后8周各组鼠用50个Eg原头节攻击,攻击25周后,处死小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE和脾细胞上清液IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平;MTT法测定脾细胞增殖反应;流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T细胞百分比和脾细胞凋亡发生率。结果重组Bb-Eg95-EgA31免疫组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgG1水平升高,IgG3和IgE降低;脾IFN-γ、IL-12和TNF-α水平升高,IL-10水平降低;脾T淋巴细胞明显增殖;脾CD4+和CD8+T细胞显著增加;脾细胞凋亡发生率显著降低。结论细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-E-gA31融合蛋白能诱导小鼠产生有效的保护性免疫应答。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 重组Rh—Eg95-EgA3 1 融合蛋白 免疫应答
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重组BPI_(23)-Fcγ1融合蛋白在CHO细胞中的表达 被引量:6
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作者 徐俊杰 徐静 +1 位作者 童贻刚 王海涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期587-589,共3页
The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and... The fusion gene of BPI 23 and human Fcγ1 was obtained by PCR method,and the expression plasmid was constructed to express recombinant BPI 23 \|Fcγ1 fusion protein in CHO cells.After transfection with the plasmid and selection by methotrexate,the cell lines expressing the fusion protein were obtained.The recombinant protein was purified using cation\|exchange chromatography and its bioactivity was proved with bactericidal assays. 展开更多
关键词 杀菌/通透性增加蛋白 BPI23-Fcγ1融合蛋白 表达 CHO细胞 重组
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重组人干扰素-α1b吸入联合免疫球蛋白对重症腺病毒肺炎患儿细胞免疫功能的影响 被引量:14
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作者 杨婷 饶花平 +5 位作者 罗力妍 丁妞 徐畅 罗淑娟 金世杰 陈艳萍 《疑难病杂志》 CAS 2021年第7期676-679,684,共5页
目的观察重组人干扰素α1b(rhIFN-α1b)吸入联合免疫球蛋白对重症腺病毒肺炎患儿细胞免疫功能的影响。方法选取2019年8月—2020年8月湖南省儿童医院呼吸内科诊治重症腺病毒肺炎患儿82例,按照抽签法随机分为对照组和联合组各41例,对照组... 目的观察重组人干扰素α1b(rhIFN-α1b)吸入联合免疫球蛋白对重症腺病毒肺炎患儿细胞免疫功能的影响。方法选取2019年8月—2020年8月湖南省儿童医院呼吸内科诊治重症腺病毒肺炎患儿82例,按照抽签法随机分为对照组和联合组各41例,对照组予基础治疗+rhIFN-α1b吸入治疗,联合组在对照组基础上给予免疫球蛋白治疗,2组均连续治疗7 d。流式细胞仪检测T细胞(CD3、CD4、CD8)水平,酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子(TNF)、γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)水平,比较2组治疗效果、临床症状缓解时间、不良反应发生率。结果联合组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(90.24%vs.73.17%,χ^(2)/P=3.998/0.046)。联合组发热、肺部啰音、咳嗽、憋喘、咯痰等缓解时间均短于对照组(t/P=17.810/0.001、74.590/0.001、16.280/0.001、27.530/0.001、18.400/0.001);治疗后2组CD3、CD4、CD8水平均较治疗前升高,且联合组较对照组明显升高(t/P=10.870/0.001、4.367/0.001、2.362/0.021);治疗后2组TNF、IFN-γ、IL-2水平均较治疗前降低,且联合组较对照组明显下降(t/P=6.482/0.001、10.500/0.001、15.340/0.001)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论rhIFN-α1b吸入联合免疫球蛋白对重症腺病毒肺炎患儿治疗效果显著,能提高其细胞免疫功能,控制患儿病情发展,改善其临床症状,促进患儿早日康复。 展开更多
关键词 腺病毒肺炎 重组人干扰素Α1B 免疫球蛋白 细胞免疫功能 儿童
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His-tag不影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性 被引量:9
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作者 曾瑞红 王卫华 +3 位作者 房桂珍 龚伟 梅兴国 魏林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1066-1070,共5页
目的:观察His-tag是否影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。方法:PCR扩增G1和F/M2基因片段,插入表达载体pET-His和pET-DsbA-His中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni+螯合亲和层析法纯化得His-G1F/M2和DsbA-His-G1F/M2,将后者用... 目的:观察His-tag是否影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。方法:PCR扩增G1和F/M2基因片段,插入表达载体pET-His和pET-DsbA-His中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni+螯合亲和层析法纯化得His-G1F/M2和DsbA-His-G1F/M2,将后者用凝血酶消化,再经Ni+螯合亲和层析法纯化得G1F/M2,将His-G1F/M2和G1F/M2免疫BALB/c小鼠,用ELISA测定抗体滴度,MTT法测定细胞毒性T细胞活性(CTL)。结果:两种蛋白在BALB/c小鼠中诱导的RSV特异性抗体和CTL活性无显著差异。结论:His-tag不影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 HIS-TAG 重组蛋白G1F/M2 免疫原性
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猪流产嗜性衣原体omp-1基因的重组质粒与重组蛋白免疫组合效果 被引量:3
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作者 杨琪 李建平 +3 位作者 杨建民 李军 杨利 何诚 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期9-13,共5页
为增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫措施进而筛选出高效新型分子疫苗,本实验将猪流产嗜性衣原体omp-1基因克隆入pcDNA3.1(+)载体构建DNA疫苗,初次和二次免疫分别以核酸/重组蛋白(DNA/r-MOMP)、重组蛋白/核酸(r-MOMP/DNA)、重组蛋白... 为增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫措施进而筛选出高效新型分子疫苗,本实验将猪流产嗜性衣原体omp-1基因克隆入pcDNA3.1(+)载体构建DNA疫苗,初次和二次免疫分别以核酸/重组蛋白(DNA/r-MOMP)、重组蛋白/核酸(r-MOMP/DNA)、重组蛋白+核酸/重组蛋白+核酸(r-MOMP+DNA/r-MOMP+DNA)、核酸+核酸(DNA/DNA)和重组蛋白+重组蛋白(r-MOMP/r-MOMP)5种组合接种BALB/c小鼠,同时以载体和弱毒为对照。二次免疫后14 d以ELISA和T淋巴细胞增殖实验检测特异性体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示核酸与重组蛋白同时免疫可以诱导产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,而DNA/r-MOMP组合的细胞免疫和体液免疫水平高于r-MOMP/DNA组合,单独免疫DNA组或r-MOMP都不能获得好的细胞和体液免疫。 展开更多
关键词 猪流产嗜性衣原体 omp-1基因 重组质粒 重组蛋白 免疫 小鼠
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人β_2糖蛋白1的重组表达及对抗磷脂抗体综合征患者血清诱导内皮细胞产生ICAM-1的影响 被引量:7
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作者 付嘉 方艳秋 +7 位作者 徐立 李明辉 刘桂英 姜艳芳 段秀梅 刘力华 许淑芬 谭岩 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期654-657,共4页
目的:探讨重组人β2糖蛋白1(hrβ2-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:应用pQE30表达载体表达hrβ2-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应用hrβ2-GP1处理前后的APS患... 目的:探讨重组人β2糖蛋白1(hrβ2-GP1)对抗磷脂抗体综合征(APS)患者血清诱导内皮细胞系产生细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:应用pQE30表达载体表达hrβ2-GP1,Western blotting对重组蛋白进行鉴定;应用hrβ2-GP1处理前后的APS患者血清分别与内皮细胞株EA.hy926共孵育,细胞ELISA和RT-PCR方法分析处理前后EA.hy926表达ICAM-1的变化。结果:成功构建pQE30-hβ2-GP1,并对表达产物进行了纯化和鉴定,所获得的蛋白与预期的大小一致,并具有人β2-GP1的抗原性;rhβ2-GP1处理后的APS患者血清与处理前比较,与其孵育的内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1在蛋白和mRNA水平均明显降低,这种抑制作用随着rhβ2-GP1的浓度增加而逐渐增强。结论:抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1)促进内皮细胞系EA.hy926表达ICAM-1,hrβ2-GP1可中和此作用。 展开更多
关键词 重组人β2糖蛋白1 抗磷脂抗体综合征 内皮细胞系 细胞间黏附分子-1
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鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究 被引量:6
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作者 吴秀芳 于三科 +5 位作者 谢应国 王栋 袁源 刑丽 武素琴 王希良 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期269-272,276,共5页
目的以重组霍乱毒素B亚单位(rCT-B)为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分... 目的以重组霍乱毒素B亚单位(rCT-B)为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,检测鼻咽喉、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏膜分泌型IgA;采用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。结果以rCT-B为佐剂的鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗滴鼻免疫后,能够诱导血清中IgGI、gA抗体比正常对照组显著升高(P<0.01),同时诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内特异性黏膜抗体升高,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著(P<0.01)。与单纯的F1-V组相比,不同剂量比例疫苗组都能诱导较高、较快的血清IgGI、gA和黏膜sIgA,其中1∶2疫苗组能诱导更强的系统免疫和黏膜免疫,但是相比之下,5∶1疫苗组是最合适的免疫剂量。结论rCT-B佐剂不仅能提高鼠疫F1-V黏膜疫苗的系统全身免疫应答,还能促进诱导呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜sIgA抗体,增强局部免疫应答,提示rCT-B佐剂能显著提高鼠疫感染的免疫应答作用,这为下一步疫苗的免疫保护评价奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗 重组霍乱毒素B亚单位 黏膜免疫 系统免疫
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用EMA-1基因重组蛋白对马巴贝斯虫病的血清学调查 被引量:7
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作者 许应天 梁晚枫 +2 位作者 宋建臣 张守发 李春英 《动物医学进展》 CSCD 2003年第6期108-109,共2页
在寄生虫病的血清学诊断中 ,常用的虫体抗原有纯化难、制备有限和部分交叉反应等缺点。以重组蛋白作为诊断抗原具有特异性强、敏感性高、制备简单和易纯化等优点。本试验以EMA-1基因重组蛋白为诊断抗原 ,用 EL ISA方法对延边地区马巴贝... 在寄生虫病的血清学诊断中 ,常用的虫体抗原有纯化难、制备有限和部分交叉反应等缺点。以重组蛋白作为诊断抗原具有特异性强、敏感性高、制备简单和易纯化等优点。本试验以EMA-1基因重组蛋白为诊断抗原 ,用 EL ISA方法对延边地区马巴贝斯虫病进行了血清学调查。结果表明 ,该地区马巴贝斯虫病的血清阳性率为 3 4.2 % ( 3 8/ 1 1 1 ) ,而血涂片染色镜检法的阳性率为 1 3 .5% ( 1 5/ 1 1 1 ) ,两者之间差异极显著 ( P <0 .0 1 )。不同牧地和不同年龄被检血清阳性率之间未见显著差异。 展开更多
关键词 EMA-1基因 基因重组 重组蛋白 马巴贝斯虫病 血清学 寄生虫病
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文蛤C1q基因的克隆与表达及其重组蛋白活性的研究 被引量:6
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作者 隋立军 刘卫东 +3 位作者 李云峰 高祥刚 李宏俊 赫崇波 《水产科学》 CAS 北大核心 2012年第6期321-328,共8页
利用构建的文蛤cDNA文库,克隆得到了文蛤C1q基因全长cDNA序列,该序列全长1213bp,5′UTR为316bp,3′UTR为372bp,开放阅读框长度为525bp,编码174个氨基酸。在文蛤C1q(MmC1q)蛋白中,C1q结构域与软体动物、两栖类动物和脊椎动物中的C1q结构... 利用构建的文蛤cDNA文库,克隆得到了文蛤C1q基因全长cDNA序列,该序列全长1213bp,5′UTR为316bp,3′UTR为372bp,开放阅读框长度为525bp,编码174个氨基酸。在文蛤C1q(MmC1q)蛋白中,C1q结构域与软体动物、两栖类动物和脊椎动物中的C1q结构域均具有较高的同源性。通过荧光实时定量PCR,MmC1q mRNA在所检测的各个组织中均有表达,在肝胰脏中表达量最高。在细菌感染试验中,文蛤受鳗弧菌感染后,C1q相对表达水平有明显的上升调节,注射2h,MmC1qmRNA表达量最高,为对照组的2.19倍。包含成熟肽的MmC1q cDNA片段被重组,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,采用牛津杯法对MmC1q重组蛋白进行体外抑菌试验,但并未检测到明显的抑菌活性。 展开更多
关键词 文蛤C1qcDNA克隆 荧光定量PCR 重组蛋白 抑菌活性
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A20重组蛋白通过NF-κB/TGF-β1/CTGF信号通路抑制哮喘小鼠气道重构的初步实验研究 被引量:9
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作者 延光海 崔允浩 朴红梅 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期44-49,共6页
目的探讨A20重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道重构及NF-κB信号通路的影响。方法 40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机数字表法分为4组,每组10只,分别为:生理盐水对照组;卵蛋白(OVA)哮喘组;A20重组蛋白治疗3 d组;A20重组蛋白治疗7 d组。在末次激... 目的探讨A20重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道重构及NF-κB信号通路的影响。方法 40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机数字表法分为4组,每组10只,分别为:生理盐水对照组;卵蛋白(OVA)哮喘组;A20重组蛋白治疗3 d组;A20重组蛋白治疗7 d组。在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色及PAS染色。取右肺组织分别用酶联免疫吸附法(ELISA),RT-PCR和Western blote检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、TNF-α及IFN-γ含量以及肺组织中结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)、转化生长因子-β1(trailsforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达和核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达。结果哮喘模型组小鼠与对照组相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、TNF-α水平增高,而IFN-γ水平降低;肺组织CTGF、TGF-β1的转录和表达水平以及NF-κB表达水平均显著高于对照组(P<0.01)。A20重组蛋白3 d和7 d干预组小鼠与哮喘模型组相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、TNF-α水平,CTGF、TGF-β1的转录和表达水平,NF-κB表达水平均显著降低,而BALF中IFN-γ水平明显上升,具有显著差异(P<0.05),但2个不同治疗组之间上述各指标间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 A20重组蛋白可抑制哮喘小鼠气道重构的发生,其机制有可能是通过抑制NF-κB/TGF-β1/CTGF信号通路而实现的。 展开更多
关键词 气道重塑 小鼠 A20重组蛋白 NF-ΚB TGF-Β1
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重组腺相关病毒介导RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞影响的动物试验 被引量:4
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作者 刘雄 李刚 +3 位作者 张宝 王路 李晓华 李湘平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期611-614,618,共5页
目的探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对于鼻咽癌细胞在体内增殖及转移能力的影响。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA(shRNA)干扰序列,构建2种重组腺相关病毒(rAAV)载体:(增强型绿色荧光蛋白,EGFP)rAAV-EGFP和rAAV-shRNA-LMP-1... 目的探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对于鼻咽癌细胞在体内增殖及转移能力的影响。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA(shRNA)干扰序列,构建2种重组腺相关病毒(rAAV)载体:(增强型绿色荧光蛋白,EGFP)rAAV-EGFP和rAAV-shRNA-LMP-1,以不同滴度rAAV-EGFP转染鼻咽癌C666-1细胞确定最佳转染复数(MOI),rAAV-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1,RT-PCR鉴定抑制效率,将体外转染RNA干扰后的C666-1细胞注入裸鼠肝脏包膜下制作鼻咽癌异位肝种植的肝肺转移模型,观察肝脏成瘤及肝内、肺转移情况,分析LMP-1基因沉默在动物水平对鼻咽癌细胞成瘤及转移能力的影响。结果rAAV-EGFP以5×104v.g(virus genome,病毒基因组数)/细胞转染C666-1细胞,转染效率大于95%,RT-PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×104v.g/细胞转染C666-1后目的基因抑制效率大于90%,动物试验结果显示rAAV-shRNA-LMP-1组肝脏成瘤体积与对照组rAAV-EGFP无显著差异,但显著减少了种植肿瘤的肝内及肺转移率。结论通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达,可在动物水平抑制鼻咽癌细胞转移,但对鼻咽癌细胞生长无显著影响。 展开更多
关键词 鼻咽癌 重组腺相关病毒 RNA干扰 EB病毒潜伏膜蛋白1 转移
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重组促凋亡蛋白TFAR19对CNE-1细胞凋亡影响的初步研究 被引量:4
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作者 陶莹 李登清 +3 位作者 漆涌 伍勇 郑兰香 马大龙 《实用预防医学》 CAS 2006年第2期222-223,共2页
目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应。方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应。结果不... 目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应。方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应。结果不同浓度TFAR19蛋白均可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30 mg/L的TFAR19蛋白后,鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是:15.26%、29.48%、37.11%、54.20%、72.36%。阴性对照组的细胞凋亡率为12.40%。结论TFAR19蛋白可直接进入CNE-1细胞并明显促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 重组TFAR19蛋白 CNE-1细胞 细胞凋亡 重组促凋亡蛋白 鼻咽癌
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