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白芨MYB类转录因子PAP1基因的克隆与表达分析 被引量:6
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作者 田爱梅 张恩慧 +2 位作者 许忠民 丁群英 付洪冰 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期123-127,共5页
花青素对植物的生长发育具有重要的作用。MYB家族转录因子参与花青素合成代谢的调控。利用同源基因克隆的方法,根据其他物种中基因的同源序列设计特异性引物,利用PCR技术从白芨基因组中克隆到MYB转录因子PAP1,cDNA全长844bp,经DNAStar... 花青素对植物的生长发育具有重要的作用。MYB家族转录因子参与花青素合成代谢的调控。利用同源基因克隆的方法,根据其他物种中基因的同源序列设计特异性引物,利用PCR技术从白芨基因组中克隆到MYB转录因子PAP1,cDNA全长844bp,经DNAStar软件分析,PAP1无内含子,包含一个完整的阅读框,编码184个氨基酸。不同组织的表达特征分析发现,BsPAP1在花中的表达较强,在块根状假鳞茎和嫩蒴果中的表达次之。蛋白质特征预测及蛋白序列结构分析发现PAP1具有MYB转录因子典型的DNA结合区域。序列同源比对表明该基因与芜菁、花椰菜等的PAP1基因有很高的相似性,推测BsPAP1是MYB家族的成员之一。 展开更多
关键词 白芨 pap1 基因
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PAP1/METTL9基因在肺癌细胞中表达谱的生物信息学分析 被引量:4
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作者 舒坤贤 夏燕 冉启煤 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第33期4141-4144,4148,共5页
目的研究PAP1/METTL9基因在肺癌细胞中的表达谱,进一步了解肺癌发病的分子机制。方法利用GeneSifter软件对人类正常的和永生的肺支气管表皮细胞的基因芯片数据集进行分析,并结合GO工具和KEGG通路分析其生物学意义。方法筛选出22个与PAP1... 目的研究PAP1/METTL9基因在肺癌细胞中的表达谱,进一步了解肺癌发病的分子机制。方法利用GeneSifter软件对人类正常的和永生的肺支气管表皮细胞的基因芯片数据集进行分析,并结合GO工具和KEGG通路分析其生物学意义。方法筛选出22个与PAP1/METTL9表达相关的基因,涉及到细胞分裂、蛋白质合成、免疫反应等多种生物学过程。结论 PAP1/METTL9基因在肺癌细胞中有特异性表达,可作为肺癌基因诊断与基因治疗新的候选基因。 展开更多
关键词 pap1/METTL9基因 基因本体 聚类分析
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难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序 被引量:2
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作者 李明 申晓冬 +3 位作者 丛延广 谭银玲 饶贤才 胡福泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期539-542,共4页
目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛... 目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp。结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列。 展开更多
关键词 大片段克隆 噬菌体 基因组测序 pap1
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裂殖酵母Pap1应答H_2O_2氧化胁迫的机制 被引量:1
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作者 丁艳菲 张荃 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期398-402,共5页
转录因子Pap1是裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)应答H2O2氧化胁迫反应中的关键调控因子.高浓度的H2O2激活蛋白激酶Sty1途径清除过量的H2O2,使H2O2降至较低浓度再活化Pap1;低浓度的则直接氧化活化Pap1,导致Pap1快速向细胞核内运输... 转录因子Pap1是裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)应答H2O2氧化胁迫反应中的关键调控因子.高浓度的H2O2激活蛋白激酶Sty1途径清除过量的H2O2,使H2O2降至较低浓度再活化Pap1;低浓度的则直接氧化活化Pap1,导致Pap1快速向细胞核内运输从而激活Pap1相关基因的表达.本文综述了裂殖酵母中转录因子Pap1在不同浓度H2O2胁迫下的激活途径,以及蛋白激酶Sty1对Pap1激活的重要作用. 展开更多
关键词 H2O2 氧化胁迫 转录因子pap1 蛋白激酶Sty1
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芥菜型油菜PAP1基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 贺丹 张卫平 +4 位作者 林微 陈家乐 贺鹏 张大为 严明理 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第22期7337-7347,共11页
花青素是导致芥菜型油菜叶片颜色差异的重要物质,PAP1基因是花青素合成途径中的一个关键转录调控基因。本研究利用同源克隆技术,以不同叶色芥菜型油菜为材料,根据同源性较高的白菜PAP1基因序列设计引物,克隆芥菜型油菜PAP1基因序列。芥... 花青素是导致芥菜型油菜叶片颜色差异的重要物质,PAP1基因是花青素合成途径中的一个关键转录调控基因。本研究利用同源克隆技术,以不同叶色芥菜型油菜为材料,根据同源性较高的白菜PAP1基因序列设计引物,克隆芥菜型油菜PAP1基因序列。芥菜型油菜PAP1基因的基因长度在1348~1669 bp,编码序列长744~753 bp,包括3个外显子和2个内含子区域。PAP1蛋白包括两个MYB结合域,分别位于第9~59和62~110氨基酸。进化分析表明芥菜型油菜PAP1基因与白菜和芜菁具有较高的同源性,与拟南芥亲缘关系较远。对比不同叶色芥菜型油菜基因序列发现,紫叶芥和红叶芥PAP1基因的编码区序列无差异,但编码的蛋白质与绿叶芥有22个氨基酸差异,定量PCR分析表明PAP1基因及其调控的下游基因如DFR、TT19等在绿叶芥油菜中表达水平较低,上述差异可能导致了芥菜型油菜叶色的差异。本研究为探究不同叶色芥菜型油菜的可能形成机制及遗传改良提供参考。 展开更多
关键词 pap1基因 花青素 基因克隆 表达分析
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白菜、甘蓝和甘蓝型油菜PAP1/2同源基因的鉴定及分析
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作者 陈道宗 刘镒 +2 位作者 沈文杰 朱博 谭晨 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1301-1312,共12页
PAP1/2转录因子是参与形成MBW复合体从而调控花青素合成的主要MYB转录因子。以拟南芥PAP1/2转录因子核酸和蛋白序列比对及Pfam验证,研究白菜、甘蓝和甘蓝型油菜等芸薹属植物中PAP1/2转录因子调控花青素代谢的确切同源拷贝数、进化关系... PAP1/2转录因子是参与形成MBW复合体从而调控花青素合成的主要MYB转录因子。以拟南芥PAP1/2转录因子核酸和蛋白序列比对及Pfam验证,研究白菜、甘蓝和甘蓝型油菜等芸薹属植物中PAP1/2转录因子调控花青素代谢的确切同源拷贝数、进化关系及表达情况:在白菜、甘蓝及甘蓝型油菜中鉴定到的PAP1/2转录因子同源拷贝数分别为3、4和9个;通过进化分析和PAP1/2转录因子同源拷贝所在区段微共线性分析进一步明确了其不同拷贝间的进化关系,厘清了A7和C6染色体上PAP1/2转录因子不同拷贝的相互关系;结合白菜、甘蓝和甘蓝型油菜不同组织转录组测序数据进行表达情况分析,阐明了PAP1/2转录因子同源拷贝在不同组织中的表达情况。 展开更多
关键词 白菜 甘蓝 甘蓝型油菜 同源基因 保守结构域 花青素 R2R3-MYB转录因子 pap1/2
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转基因丹参中aSm-miR858过表达致酚酸类活性成分含量显著下降 被引量:2
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作者 陈芳 冯明月 王健 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1235-1244,共10页
丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)体内水溶性酚酸类物质具有显著的药理活性并已成为目前研究热点。植物体内microRNAs(miRNAs)作为一类非编码小分子RNA,广泛参与生长、发育、信号转导及环境胁迫的调控,但miRNAs参与植物体内次生代谢调... 丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)体内水溶性酚酸类物质具有显著的药理活性并已成为目前研究热点。植物体内microRNAs(miRNAs)作为一类非编码小分子RNA,广泛参与生长、发育、信号转导及环境胁迫的调控,但miRNAs参与植物体内次生代谢调控研究的报道较少。本研究前期通过Small RNA高通量测序获得的1条丹参miR858(命名为Sm-miR858)序列为基础,通过overlapping PCR技术构建了人工Sm-miR858前体(aSm-miR858)植物过表达载体(35S:aSm-miR858),并对丹参进行转化,以分析丹参体内Sm-miR858过表达后对酚酸类活性成分合成的影响,进而探索Sm-miR858在丹参体内的生物学功能。实时定量PCR和RNA印迹结果显示,在各阳性转基因株系中,Sm-miR858均呈现不同程度过表达。同时,Sm-miR858的潜在靶标基因Sm-PAP1表达水平呈现相应不同程度的显著下调,且转化株系中酚酸类活性成分含量均低于同期的野生型丹参。进一步检测上述各丹参植株中酚酸类活性成分代谢途径相关酶基因表达水平。结果显示,酚酸类次生代谢途径中关键酶基因表达水平均呈现不同程度的显著下调。结果说明,丹参中可能存在SmmiR858通过负调控SmPAP1的表达,来控制酚酸代谢途径关键酶基因的表达,进而影响酚酸类物质合成的调控模式,其具体精密调控机制正在进一步研究中。 展开更多
关键词 丹参 miR858 Sm-pap1 酚酸类活性成分
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构建携带人PAPS合成酶1(hpapss1)全长cDNA的重组腺病毒
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作者 赵凤娣 许雅丽 +1 位作者 李晓波 殷莲华 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期307-312,共6页
目的构建携带人PAPS合成酶1(hpapss1)全长cDNA的重组腺病毒,并感染巨噬细胞使PAPSS1过表达,为研究其在胆固醇代谢中的作用提供工具。方法PCR扩增hpapss1全长cDNA,继而构建了真核表达载体pCDNA3.0-hpapss1,再将hpapss1片段亚克隆入腺病... 目的构建携带人PAPS合成酶1(hpapss1)全长cDNA的重组腺病毒,并感染巨噬细胞使PAPSS1过表达,为研究其在胆固醇代谢中的作用提供工具。方法PCR扩增hpapss1全长cDNA,继而构建了真核表达载体pCDNA3.0-hpapss1,再将hpapss1片段亚克隆入腺病毒穿梭质粒pshuttle-CMV,得到转移质粒pshuttle-CMV-hpapss1,并将其转化含腺病毒基因组质粒pAdEasy-1的BJ5183感受态菌(AdEasier-1cells)。筛选并鉴定重组正确的腺病毒质粒pAdEasy-1-hpapss1,在阳离子脂质体介导下,转染腺病毒包装细胞(293细胞)进行包装和扩增。携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒感染THP-1来源的巨噬细胞48h后,用Western blot方法测定蛋白水平来确定PAPSS1的过表达。结果成功制备携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒,滴度为5.3×108pfu/mL,实现了hpapss1基因在巨噬细胞中的过表达。结论携带hpapss1全长cDNA的重组腺病毒的成功制备为进一步探讨PAPSS1及氧化固醇硫酸化在巨噬细胞胆固醇代谢平衡中的作用及机制建立了很好的模型和工具。 展开更多
关键词 PAPS合成酶1 腺病毒 巨噬细胞 氧化固醇 硫酸化
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LPIN1与人类疾病研究进展 被引量:2
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作者 卢淑娴 吕赵劼 +2 位作者 王志浩 寇瑶 田静 《生命科学》 CSCD 北大核心 2020年第11期1151-1158,共8页
Lipin 1是磷脂酸磷酸水解酶家族重要成员之一,在脂质合成中起着关键作用,同时也作为转录辅助活化因子调节脂质代谢相关基因的表达。LPIN1在人体脂肪组织、骨骼肌、周围神经系统均高表达,LPIN1突变会引起人类肌红蛋白尿症、肌病、脂代谢... Lipin 1是磷脂酸磷酸水解酶家族重要成员之一,在脂质合成中起着关键作用,同时也作为转录辅助活化因子调节脂质代谢相关基因的表达。LPIN1在人体脂肪组织、骨骼肌、周围神经系统均高表达,LPIN1突变会引起人类肌红蛋白尿症、肌病、脂代谢紊乱及2型糖尿病。该文从分子和遗传角度阐述人类LPIN1与以上四种疾病的内在联系,为该基因功能的深入研究以及相关疾病的诊断和治疗提供参考。 展开更多
关键词 LPIN1 pap1 肌红蛋白尿症 肌病 脂质代谢紊乱 2型糖尿病
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An ubiquitin-like protein SDE2 negatively affects sucrose-induced anthocyanin biosynthesis in Arabidopsis
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作者 Ye Xie Yulei Zhao +2 位作者 Huijuan Tan Qin Chen Jirong Huang 《Science Bulletin》 SCIE EI CAS CSCD 2017年第23期1585-1592,共8页
Anthocyanin biosynthesis is regulated by a conserved transcriptional MBW complex composed of MYB,b HLH and WD40 subunits. However, molecular mechanisms underlying transcriptional regulation of these MBW subunits remai... Anthocyanin biosynthesis is regulated by a conserved transcriptional MBW complex composed of MYB,b HLH and WD40 subunits. However, molecular mechanisms underlying transcriptional regulation of these MBW subunits remain largely elusive. In this study, we isolated an Arabidopsis mutant that displays a constitutive red color in aboveground tissues with retarded growth phenotypes. In the presence of sucrose, the mutant accumulates more than 3-fold anthocyanins of the wild type(WT), but cannot produce anthocyanins as WT in the absence of sucrose. Map-based cloning results demonstrated that the mutation occurs in the locus At4 G01000, which encodes a conserved nuclear-localized ubiquitin-like(UBL) superfamily protein, silencing defective 2(SDE2), in eukaryotes. SDE2 is ubiquitously expressed in various tissues. In the sucrose-induced anthocyanin biosynthesis, SDE2 expression was not responded to sucrose treatment at the early stage but was enhanced at the late stage. SDE2 mutations result in upregulation of anthocyanin biosynthetic and regulatory genes. Yeast-two hybrid analysis indicated that SDE2 has no direct interaction with the MYB transcription factor PAP1 and b HLH factor TT8, indicating that SDE2 is a indirect factor to affect anthocyanin accumulation. Taking together, our data suggest that SDE2 may play a role in finely coordinating anthocyanin biosynthesis with other biological processes. 展开更多
关键词 Anthocyanin biosynthesis SUCROSE SDE2 pap1 ARABIDOPSIS
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