先天性小耳畸形临床分析和PACT基因检测

目的先天性小耳畸形临床分析和探讨PACT基因在先天性小耳畸形中的作用。方法实验组为2007年1月～2008年3月就诊的先天性小耳畸形患者,进行耳廓畸形分型;对于签写知情同意书的人员抽取外周血约5ml,用于制备基因组DNA的血样,抽提基因组DNA,然后对PACT基因编码蛋白质的外显子进行PCR扩增,测序分析PCR产物。对照组为就诊的无耳廓畸形的瘢痕患者。结果共收集先天性小耳畸形患者共221例,11例具有家族史,包括先证者在内共有27例先天性小耳畸形患者。4例先天性小耳畸形患者亲属中一人或多人具有附耳症状。221例先天性小耳畸形患者共240只畸形耳廓,Ⅰ度先天性小耳畸形48只,Ⅱ度先天性小耳畸形67只,Ⅲ度先天性小耳畸形125只。实验组和对照组未发现PACT基因突变。1例散发患者PACT基因外显子4出现DNA序列改变,为c.385T>A,但编码氨基酸未见改变G129G。结论先天性小耳畸形患者未见PACT基因突变,PACT相关基因有待于进一步筛查。

P53负调控分子PACT的研究进展

睾丸P53相关细胞蛋白(P53 associated cellular protein-testes derived,PACT),又称为相关增殖潜能蛋白(proliferation potential protein related,P2P-R)和成视网膜瘤结合蛋白6(retinoblastoma binding protein 6,RBBP6),是为数不多的能够同时与生物体内最重要的两种抑癌基因p53和Rb结合的蛋白之一,参与细胞分化、前体mRNA剪接、周期阻滞、凋亡等一系列重要的细胞事件。自其不同形式的同源体被发现至今,不同实验室对其在不同角度进行了研究,一些功能已经初见端倪。本实验室近期制备了PACT基因敲除的小鼠模型,揭示了PACT在胚胎发育中的不可或缺性,进一步明确了PACT对P53调控机制。本文通过总结不同实验室对PACT的研究工作,确定了PACT的主要结构区域,综述了当前其主要研究方向和进展。

Prkra小耳小鼠动物模型在先天性小耳畸形研究中的应用

目的研究Prkra小耳小鼠动物模型的构建方法,并探讨其用于先天性小耳畸形研究的可行性。方法从美国JAX实验室引进同窝Prkra little ear(小耳)小鼠6只,通过繁育共获得13只Prkra小耳小鼠孕鼠。其中10只孕鼠共取75只胎龄为14.5 d的胎鼠尾,提取DNA进行Sanger法测序;3只孕鼠正常生产,幼鼠出生后常规饲养,取耳廓畸形和耳廓正常的40 d子鼠各3只,进行骨骼阿利新蓝染色,并作对比分析。结果Prkra小耳纯合型小鼠耳廓明显比其同胞正常耳廓小,失去了正常小鼠耳廓的亚结构形态。DNA测序结果表明,突变位点为在2号染色体76、643、218 bp(GRCm38)上的G向A突变,该突变位点位于第3外显子之后。阿利新蓝染色结果显示,Prkra小耳纯合型小鼠体型较正常野生型小,四肢骨发育基本正常,但较细短,后肢表现尤为明显,肋骨发育较细小,尾骨发育较细短,头颅发育略小。结论成功构建了Prkra小耳小鼠模型,而且该模型是研究先天性小耳畸形胚胎发育机制比较合适的动物模型。