紫斑牡丹花粉乙酸乙酯部位化学成分研究

对紫斑牡丹花粉的化学成分进行研究,综合运用硅胶、聚酰胺、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及制备型高效液相等色谱技术,从该花粉70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到18个化合物,其结构由HR-ESI-MS、1H和13 C NMR等波谱学方法鉴定为腺苷(1)、芹菜素(2)、柠檬黄素(3)、8-甲氧基山萘酚(4)、槲皮素(5)、柠檬素-3-β-D-葡萄糖苷(6)、sexangularetin-3-O-y1-β-D-sophoroside(7)、limocitrin-3-O-y1-β-D-sophoroside(8)、芍药苷(9)、芍药内酯苷(10)、氧化芍药苷(11)、β-谷甾醇(12)、没食子酸(13)、肉豆蔻酸(14)、亚油酸(15)、对羟基苯甲醛(16)、邻苯二甲酸二戊酯(17)和蔗糖(18),以上化合物均为首次从紫斑牡丹花粉中分离得到,其中化合物3、4、6为首次从该属植物中分离得到。

紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物抗氧化能力研究

目的评价紫斑牡丹花粉的不同浓度乙醇提取物的抗氧化能力。方法通过测定紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的3种抗氧化能力(铜离子还原能力、DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力),对紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的抗氧化性能进行评价。结果铜离子还原能力法测得紫斑牡丹花粉无水乙醇提取物、75%乙醇提取物、50%乙醇提取物、25%乙醇提取物和水提取物的抗氧化活性没食子酸量依次为26.00、28.33、28.90、14.98、9.24 mg/g;紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物的清除DPPH自由基和ABTS自由基能力均低于维生素C,其顺序依次为:50%乙醇提取物>75%乙醇提取物>无水乙醇提物>25%乙醇提取物>水提取物。结论紫斑牡丹花粉不同浓度乙醇提取物均具有较强的抗氧化能力,以50%、75%乙醇提物的抗氧化能力最强。

紫斑牡丹花粉发育的细胞形态学研究

紫斑牡丹花粉具二型性，正常花粉占８４．３％，异常花粉占１５．７％。正常花粉的发育可划分为单核小孢子早期、单核小孢子晚期、花粉第一次有丝分裂期、２－细胞花粉早期和２－细胞花粉晚期（成熟期）等５个时期；异常花粉在单核小孢子晚期开始分化，其中大部分逐渐停滞发育，少数（不超过１％）可在体内启动雄核发育途径，朝着形成孢子体的方向发展。

紫斑牡丹小孢子形成过程的细胞遗传学研究

首次对紫斑牡丹栽培品种的花粉母细胞减数分裂过程进行了系统研究。细胞学观察发现约 33%的花粉母细胞减数分裂过程异常。对该品种花粉进行人工萌发试验 ,花粉萌发率约为 65.4%。统计该品种的结实率发现 ,其有效结实率仅为 2 3.5% ,认为该紫斑牡丹品种花粉母细胞减数分裂行为异常是形成败育花粉的关键原因 ,但它仅仅是导致该品种结实率低的原因之一。

紫斑牡丹花粉中异鼠李素的定性定量分析及总黄酮的含量测定

目的:建立甘肃紫斑牡丹花粉中异鼠李素的定性定量分析及总黄酮含量测定的方法。方法:采用薄层色谱法对紫斑牡丹花粉中异鼠李素进行定性鉴别;采用高效液相色谱法,以Agilent Eclipse plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为固定相,流动相:甲醇-乙腈-0.1%磷酸(25∶13∶62),流速:1.0 m L·min-1,在360 nm波长下,对紫斑牡丹花粉中异鼠李素的含量进行定量分析。采用紫外分光光度法,以芦丁为对照品,在510 nm波长下,对紫斑牡丹花粉中总黄酮含量进行测定。结果:薄层鉴别色谱特征斑点明显,重现性好;异鼠李素浓度在8.4~168.0μg·m L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率(n=9)为100.8%(RSD=2.36%),测得紫斑牡丹花粉中异鼠李素含量为3.21~8.91 mg·g^(-1)。总黄酮浓度在0.01~0.06 mg·m L-1范围内与吸收度呈良好的线性关系(r=0.9992),平均回收率(n=9)为101.06%(RSD=2.56%),测得紫斑牡丹花粉中总黄酮含量为9.44~15.96 mg·g^(-1)。结论:所建方法操作简单,准确可靠,重复性好,可用于甘肃紫斑牡丹花粉的质量控制。

紫斑牡丹花粉破壁工艺优化及其金属元素测定

[目的]优化紫斑牡丹花粉温差破壁工艺,并分析破壁前后10种金属元素的含量变化。[方法]根据Box-benhnken试验设计原理,以解冻温度、解冻时间、液料比为响应变量,以破壁率为响应值设计紫斑牡丹花粉温差破壁工艺,并采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对紫斑牡丹花粉破壁前、破壁后10种金属元素的含量变化进行研究。[结果]最优破壁工艺为冷冻温度-150℃、冷冻时间24 h、液料比20∶1(mL∶g)、解冻时间7 h、解冻温度20℃,在此最优条件下得到牡丹花粉的平均破壁率为92.82%,经平行验证试验后,优化得到牡丹花粉温差破壁工艺,合理可行。花粉经冷冻破壁后,固体颗粒中的Mn、Zn、Sr、Fe、K、Mg、Ca等金属元素的含量均有所下降,有害元素Pb、As、Cd的含量很低,均低于检出限。[结论]该研究为紫斑牡丹花粉的深度开发和综合利用提供理论依据。

牡丹种间花粉粒形态差异性比较

利用扫描电子显微镜对三种牡丹不同品种的花粉形态进行了观察研究,报道了花粉形态特征和种间差异,探讨了花粉形态特征在种间演化的分类学意义。结果表明,牡丹属牡丹组成熟花粉粒形态大小和外壁纹饰存在着种间差异。

紫斑牡丹栽培品种小孢子发育过程的细胞遗传学研究

本文对紫斑牡丹栽培品种的花粉母细胞减数分裂过程进行了系统研究 ,结果发现紫斑牡丹品种约68 96%的花粉母细胞在减数分裂过程表现正常 ,约有 3 1 0 4 %的花粉母细胞在减数分裂的双线期、中期Ⅰ、后期Ⅰ、中期Ⅱ、后期Ⅱ及四分体时期观察到染色体行为异常。本实验表明 ,在小孢子形成过程中 ,多数小孢子发育正常 ,但有约 3 1 0 4 %的花粉母细胞减数分裂异常 ,导致了花粉的败育。

储存温度对单瓣和重瓣紫斑牡丹花粉活力及生理特性的影响

以紫斑牡丹‘象牙白’单瓣和重瓣花的花粉为材料,对其超微结构及生理生化特性进行观察和分析,探讨单瓣和重瓣花花粉超微结构以及不同温度储存花粉活力与其可溶性蛋白含量、MDA含量和3种保护酶活性(POD、SOD、CAT)的关系,以确定紫斑牡丹单瓣和重瓣花花粉最佳储存温度。结果表明:(1)紫斑牡丹重瓣花花粉平均极轴长、平均赤道轴长、极轴长/赤道轴长均小于单瓣花花粉;室温(25℃)条件下,单瓣花花粉萌发率(83.62%)高于重瓣花(72.06%),单瓣花和重瓣花花粉的半衰期分别为40 d和60 d;随着储存温度降低和储存时间的延长,单瓣花和重瓣花的花粉萌发率较室温均显著提高,且单瓣花花粉萌发率始终高于重瓣花花粉。(2)紫斑牡丹单瓣和重瓣花花粉在短期储存(1~120 d)、较长时间储存和长期储存的适宜温度分别为4℃、-20℃,-80℃。(3)与室温相比,低温可提高储存期间紫斑牡丹花粉的可溶性蛋白质含量和保护酶活性,并降低MDA含量,从而有效延缓花粉萌发率的下降。(4)低温胁迫对紫斑牡丹单瓣花花粉的影响低于重瓣花花粉,在相同储存温度条件下,重瓣花花粉细胞受损程度更高、萌发率下降速率更快。研究认为,紫斑牡丹花粉在-80℃储存条件下基本处于代谢平衡状态,故低温能有效延长其花粉储存寿命;储存期间花粉萌发率下降的主要原因是细胞膜脂过氧化程度加剧,细胞损伤加重;紫斑牡丹重瓣花花粉粒小、瘪粒和畸形是导致其较单瓣花花粉萌发率低的主要原因。

紫斑牡丹单瓣与半重瓣花粉超微结构及生理生化特性比较

该研究以3个紫斑牡丹品种(‘象牙白’、‘美人面’、‘紫金冠’)的单瓣与半重瓣花粉为材料,对其超微结构和生理生化特性进行观察分析,并对其花粉培养基进行筛选优化,探讨单瓣和半重瓣花粉的超微结构与花粉萌发率以及物质代谢与花粉萌发率之间的关系。结果表明:(1)紫斑牡丹花粉萌发的最适宜培养基为100 g·L^(-1)蔗糖+0.15 g·L^(-1)硼酸+10 g·L^(-1)琼脂。(2)花粉饱满率是影响花粉萌发的主要原因。(3)3个紫斑牡丹品种的单瓣花粉离体培养萌发率均显著高于半重瓣的花粉。(4)‘象牙白’、‘美人面’、‘紫金冠’单瓣花粉可溶性蛋白含量均高于半重瓣花粉,但三者单瓣花粉的MDA含量和3种保护酶(CAT、SOD、POD)活性均低于半重瓣花粉。研究认为,花粉体内蛋白质亏损和MDA、CAT、SOD、POD的积累可能是引起半重瓣紫斑牡丹花粉萌发率较低的生理原因之一。

柱后衍生阳离子交换色谱法测定甘肃紫斑牡丹花粉氨基酸含量

目的:建立柱后衍生阳离子交换色谱方法,测定甘肃紫斑牡丹花粉氨基酸的含量。方法:样品加6 mol·L^(-1)盐酸于110℃水解22 h。采用柱后衍生阳离子交换色谱法,对甘肃产紫斑牡丹花粉氨基酸的含量进行分析;色谱柱:LCAK06/Na型磺酸基强酸性阳离子交换树脂色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),梯度洗脱,其中A泵(溶液泵)流速为0.45 m L·min^(-1),M泵(茚三酮泵)流速为0.25 m L·min^(-1),检测波长为440 nm(脯氨酸)和570 nm(其余氨基酸),进样量为50μL。结果:该测定方法中天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸的线性关系良好;精密度RSD范围为0.10%~1.6%,重复性RSD范围为0.20%~1.5%;平均回收率(n=6)在89.5%~98.2%之间,RSD在0.81%~2.9%之间。样品中所含氨基酸的范围为4.13~44.23 mg·g^(-1),破壁前后所测得氨基酸含量无显著差异。结论:所建立的分析方法可作为紫斑牡丹花粉中氨基酸的定量分析。

甘肃紫斑牡丹花粉中脂肪酸的分析研究

目的分析评价甘肃紫斑牡丹花粉中的脂肪酸类成分。方法采用溶剂法超声提取紫斑牡丹花粉中脂肪酸类成分,经三氟化硼-甲醇法催化甲酯化,以GC-MS-SIM对紫斑牡丹花粉及其破壁花粉样品进行分析。采用HP-5MS石英毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm);载气:高纯氦气;程序升温:起始温度50℃,以8℃·min^(-1)升至155℃,保持2 min;再以10℃·min^(-1)升至175℃,保持2 min;以1.3℃·min^(-1)升至190℃,保持8 min;最后以6℃·min-1升至280℃,保持5 min。不分流进样;进样口温度:260℃;进样量:1μL。结果紫斑牡丹花粉中主要含有C8~C24的18种脂肪酸,其中辛酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、油酸、亚油酸、γ-亚麻酸含量较高;紫斑牡丹花粉中的脂肪酸以不饱和脂肪酸为主,不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的50.45%~73.55%;破壁的紫斑牡丹花粉中脂肪酸总量是未破壁样品的6~7倍。结论所建立的分析方法简便、准确,适于甘肃紫斑牡丹花粉中脂肪酸类成分的分析。

紫斑牡丹花粉HPLC特征图谱及4个成分含量测定

目的:利用高效液相色谱法建立紫斑牡丹花粉的特征图谱,并测定不同产地紫斑牡丹花粉中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、槲皮素4个成分的含量。方法:采用CAPCELL PAK-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.2%甲酸水(B)为流动相梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长274nm,柱温30℃;采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)对13批牡丹花粉进行相似度分析,同时测定7批不同产地牡丹花粉中4个成分的含量。结果:13批紫斑牡丹花粉样品得到的指纹图谱相似度大于0.960,标定共有峰16个,并确定了其中4个色谱峰的归属。产自甘肃兰州、安徽亳州、山东菏泽的7批紫斑牡丹花粉样品中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、槲皮素的含量分别在2.488~7.675、0~15.251、2.339~10.433、6.462~15.924 mg·g^-1之间。结论:HPLC指纹图谱结合定量测定能全面反映紫斑牡丹花粉内在质量,该方法简便可行,快速准确,可为其质量评价提供参考。