pup/mpa/dop/pafA基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv和无毒株H37Ra的构建

目的构建pup/mpa/dop/pafA基因过表达结核杆菌国际标准强毒株H37Rv和无毒株H37Ra。方法提取已构建的结核杆菌-大肠埃希菌重组穿梭质粒PMV361pup,PMV361mpa,PMV361dop和PMV361pafA,利用电转化方法分别转入H37Rv和H37Ra感受态细胞,构建pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra,同时优化电转化脉冲电压,并应用QRT-PCR进行检测及鉴定。结果成功构建了pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra,重组菌均能表达目的基因,在2 100~2 300V脉冲电压范围内构建的菌株目的基因相对表达量与电压呈正相关。结论构建的pup/mpa/dop/pafA基因过表达H37Rv和H37Ra均能表达相应目的基因,以电压为2 300V电转化构建的菌株表达量较高。

Pup-蛋白酶体系统的作用机制和生物学功能

Pup-蛋白酶体系统(Pup-proteasome system,PPS)是原核生物的一种翻译后蛋白质修饰降解体系,在去酰胺酶(deamidase of Pup,Dop)和蛋白酶体辅助因子A(proteasome accessory factorA,PafA)两种酶的作用下,原核生物类泛素蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup)可以标记靶蛋白,并介导靶蛋白经蛋白酶体降解。在分枝杆菌中PPS参与氧化应激、营养缺乏、热激、DNA损伤等多种应激反应,并在金属离子稳态调控、毒素-抗毒素系统(toxin-antitoxin system,TA system)的调节以及抵抗宿主免疫等过程中发挥作用。PPS与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)的持留性和致病性直接相关,因此PPS中的PafA、Dop和蛋白酶体均是抗结核药物开发的新靶点,筛选针对PPS的小分子抑制剂将成为新型抗结核药物研发的一个新途径。此外,Paf A催化的蛋白质Pup化被应用于生物技术的研发,形成了一种新的邻近标记技术——基于Pup化的邻近标记技术(pupylation-based interaction tagging,PUP-IT),应用于蛋白质相互作用的研究。本文综述了Pup-蛋白酶体系统的作用机制及其生物学功能研究的进展,并探讨了该系统在抗结核药物和生物技术研发中的应用前景。

矿井防尘供水管网粒子群-蚁群融合算法的优化

矿井防尘供水管网研究重难点是将最低管网费用与最可靠管网性能良好结合。为最大化提升优化搜索的速度与精确度,结合相关粒子群和蚁群算法的优势,提出新的算法,对矿井防尘供水管网进行优化。以管网年费用折现值和运行维修管理费用之和为目标函数,以流量、压降、流速、水压和管网直径为约束条件构建管网优化数学模型,用MATLAB编写粒子群和蚁群的融合算法进行求解。最后将该算法应用到开滦集团某矿中,得到该算法的优化效果,同时通过对比分析验证其提高优化速度和精确度的能力。

磷铵肥法(PAFP)烟气脱硫技术

PAFP烟气脱硫技术是利用天然磷矿石和氨为原料,在烟气脱硫过程中直接生产磷铵复合肥料的回收法脱硫技术。其工艺过程主要由吸附、萃取、中和、吸收、氧化、浓缩干燥等单元操作组成。目前,总体技术达到:总脱硫效率≥95％,磷矿石的萃取率>90％,肥料总养分含量(N+P_2O_5)≥35％。经济分析表明,当烟气中SO_2浓度≥2200ppm,可望获利。