Prrx1在骨发育和骨改建中作用的研究进展

转录因子配对相关同源框1(paired related homeobox 1,Prrx1)作为一种间充质细胞的标志物,不仅参与胚胎时期的骨发育过程,亦在机体成年后骨稳态的调节与损伤后的修复过程中发挥作用。Prrx1+细胞是间充质细胞的一种亚群,作为成骨的前体细胞参与骨骼的发育与形成。本文对Prrx1及Prrx1+细胞在骨发育及骨改建中的作用及影响进行综述。

非小细胞肺癌组织PRRX1、HOXC8表达及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织配对相关同源框1(PRRX1)、同源盒C8(HOXC8)表达及其临床意义。方法 选取2015年5月至2017年5月该院收治的120例行手术切除的NSCLC患者为研究对象,检测NSCLC患者癌组织及癌旁组织PRRX1、HOXC8、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况,分析PRRX1、HOXC8表达与E-cadherin、Vimentin表达及患者临床病理特征的关系。随访5年,采用Kaplan-Meier法及Log-rank检验分析不同PRRX1、HOXC8表达情况的患者的累积生存率。经COX风险回归模型分析NSCLC患者预后的影响因素。结果 NSCLC患者癌组织中PRRX1、E-cadherin阳性表达率低于癌旁组织,HOXC8、Vimentin阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。PRRX1表达与E-cadherin表达呈正相关(P<0.05),与Vimentin表达呈负相关(P<0.05)。HOXC8表达与E-cadherin表达呈负相关(P<0.05),与Vimentin表达呈正相关(P<0.05)。PRRX1阳性表达患者肿瘤最大径≥5 cm、TNM分期为ⅢA期、淋巴结转移占比低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。HOXC8阳性表达患者肿瘤最大径≥5 cm、TNM分期为ⅢA期、淋巴结转移占比高于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析显示,PRRX1阳性表达患者5年总体生存率[69.05%(29/42)]高于阴性表达患者[36.99%(27/73)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.956,P=0.026)。HOXC8阳性表达患者5年总体生存率[39.47%(30/76)]低于阴性表达患者[66.67%(26/39)],差异有统计学意义(χ^(2)=6.974,P=0.008)。多因素COX风险回归模型分析提示肿瘤最大径≥5 cm、TNM分期ⅢA、淋巴结转移、HOXC8阳性表达为预后不良的危险因素(P<0.05),PRRX1阳性表达是预后不良的保护因素(P<0.05)。结论 NSCLC患者癌组织中PRRX1阳性表达率下降,HOXC8阳性表达率升高,且与临床病理特征、上皮间质转化相关标志物、疾病预后密切相关,有望作为判断NSCLC预后的潜在标志物。

过表达PRRX1通过p53介导的线粒体凋亡途径诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡

目的:探讨配对相关同源框1蛋白(PRRX1)过表达对肝癌SMMC7721细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:分别用慢病毒介导PRRX1过表达载体(pGMLV-PRRX1)、空载质粒(Vector)感染人肝癌SMMC7721细胞,用qPCR和WB实验检测慢病毒感染后细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达变化,用CCK-8法、Annexin-V FITC/PI染色流式细胞术分别检测PRRX1过表达对SMMC7721细胞增殖、凋亡的影响,用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10染色法)检测细胞线粒体膜电位变化,用caspase活性检测试剂盒(分光光度法)测定细胞中caspase-8和caspase-9酶活性,用WB实验检测细胞中p53、Bcl-2、Bax、Fas、Cleaved-caspase-3以及线粒体和细胞质中细胞色素C(Cty C)蛋白的表达。结果:成功构建PRRX1过表达的SMMC7721细胞株,感染细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达水平显著升高(均P<0.01)。与对照组和空载组比较,PRRX1过表达组SMMC7721细胞的增殖能力显著下降、细胞凋亡率显著增高、Cleaved-caspase-3剪切水平显著升高、线粒体膜电位显著下降、线粒体中Cty C蛋白表达下调、胞质中Cty C蛋白表达上调以及caspase-9酶活性升高(P<0.05或P<0.01),同时p53和Bax蛋白表达增加而Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05),但Fas蛋白表达及caspase-8酶活性无显著变化(均P>0.05)。结论:PRRX1过表达可诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡,其机制可能与p53介导的线粒体凋亡途径被激活有关。

子宫内膜样腺癌组织中PRRX1蛋白的表达及临床意义

目的探讨配对相关同源框1(paired related homoeobox 1,PRRX1)蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达及临床意义。方法选取安徽医科大学第一附属医院以及安徽医科大学附属巢湖医院267例子宫内膜组织标本,其中正常子宫内膜86例,子宫内膜上皮内瘤变90例,子宫内膜样腺癌91例,均行免疫组化EliVision法检测,观察不同子宫内膜组织中PRRX1表达及子宫内膜样腺癌临床病理特征与PRRX1的关系。结果PRRX1蛋白表达主要定位于子宫内膜样腺癌组织的细胞核中,91例子宫内膜样腺癌组织中PRRX1阳性率为79.1%,高于正常子宫内膜组织(0)、子宫内膜上皮内瘤变组织(10.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜样腺癌患者按FIGO分级分类,FIGO1级的PRRX1阳性率低于FIGO 2、3级,差异有统计学意义(P<0.05);按患者年龄、临床分期、有无淋巴结转移分组,PRRX1阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论子宫内膜样腺癌组织中的PRRX1表达量高,且与FIGO分级相关。

PRRX1的表达对卵巢癌血管生成拟态形成及患者预后的影响

目的:检测配对相关同源框1(PRRX1)及其通路分子在卵巢癌中表达情况以及其与血管生成拟态(VM)的关系,推测PRRX1对卵巢癌患者预后的影响。方法:采用免疫组化法检测62例卵巢癌中PRRX1、Wnt5a、β-catenin的表达情况,采用CD31/PAS双染法检测卵巢癌中VM的情况。采用χ~2检验和Pearson相关分析来分析PRRX1与VM形成和临床病理资料之间的关系以及PRRX1与Wnt5a、β-catenin的关系。采用Kaplan-Meier法评估PRRX1对卵巢癌患者生存预后的影响。结果:PRRX1表达对卵巢癌患者的FIGO分期、转移及VM形成有影响且具有统计学意义(P<0.05),而对患者的年龄、肿瘤大小、组织学类型、肿瘤分化程度的影响无明显统计学差异(P>0.05)。PRRX1表达与β-catenin的核表达有关,与Wnt5a、β-catenin的浆表达无关。PRRX1阳性表达和有VM形成的患者生存时间比PRRX1阴性表达或无VM形成的患者短(P<0.05)且预后差;PRRX1阳性表达和β-catenin核阳性表达的患者生存时间短于PRRX1阴性表达或β-catenin核阴性表达的患者(P<0.05);而PRRX1阳性表达与Wnt5a阳性表达、β-catenin的浆阳性表达的患者生存时间与PRRX1阴性表达或Wnt5a阴性表达、β-catenin的浆阴性表达的患者生存时间相比,差别无意义(P>0.05)。结论:PRRX1通过Wnt/β-catenin信号通路调节VM形成从而影响卵巢癌患者预后,PRRX1可作为卵巢癌诊断和预后预测的指标。

过表达配对相关同源框1(PRRX1)通过调控Wnt/β-catenin通路抑制肝癌细胞体内致瘤性

目的:研究慢病毒介导的配对相关同源框1(PRRX1)过表达对肝癌细胞体内致瘤性的影响及相关机制。方法:构建PRRX1过表达的慢病毒载体pLV-PRRX1-IRES2-EGFP,转染HEK293T细胞,获得慢病毒颗粒后,感染肝癌细胞株SMMC-7721,采用Western blot检测感染后细胞株中PRRX1蛋白表达。皮下注射SMMC-7721细胞(对照组、空载体组、PRRX1过表达组及PRRX1过表达+Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939干预组)构建裸鼠肝癌移植瘤模型,其中干预组使用XAV939处理,观察处理后移植瘤体积大小并绘制肿瘤生长曲线;采用HE染色观察各组移植瘤组织病变情况;采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测移植瘤中细胞凋亡情况;采用免疫组化检测移植瘤中细胞增殖相关抗原Ki-67的表达;采用Western blot检测移植瘤中PRRX1以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc的表达。结果:成功构建PRRX1过表达的慢病毒载体并成功感染肝癌细胞株SMMC-7721,感染后细胞中PRRX1蛋白水平明显升高;与空载体组比较,PRRX1过表达组裸鼠移植瘤生长缓慢,组织坏死加重,细胞凋亡及PRRX1蛋白表达增加,而Ki-67、β-catenin及c-Myc蛋白表达均受到抑制;与PRRX1过表达组比较,XAV939干预进一步促进PRRX1过表达对裸鼠移植瘤的作用效果,但不改变PRRX1的表达。结论:过表达PRRX1能显著降低肝癌细胞体内致瘤能力,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

PRRX1对乳腺癌多药耐药发生的影响及其机制

目的探讨配对相关同源框1(PRRX1)对乳腺癌多药耐药(MDR)发生的影响及其机制。方法选取乳腺癌MCF-7细胞进行培养,当细胞融合达80%后分离接种于24孔板中,细胞分为3组,未处理的MCF-7细胞为空白对照组(A组),转染空白载体的MCF-7细胞为阴性对照组(B组),转染携带PRRX1基因质粒的MCF-7细胞为实验组(C组)。用倒置荧光显微镜观察各组细胞形态变化及转染情况。通过RT-qPCR和WES蛋白印迹定量分析系统分别检测各组细胞PRRX1、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)以及P-糖蛋白(P-gp)mRNA及蛋白表达水平。用CCK8试剂盒评估多西他赛和顺铂对各组细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果B组和C组细胞均发出绿色荧光,转染效率约80%。PRRX1过表达使C组的MCF-7细胞由“铺路石”形态向“长梭形”形态转变。C组细胞的PRRX1、N-cadherin、vimentin和P-gp mRNA及蛋白表达水平与A、B组比较均明显升高(t=3.02~10.92,P<0.05)。经多西他赛和顺铂处理细胞24 h后,C组两种药物的IC50值明显高于A、B组(t=4.54~5.68,P<0.05)。结论PRRX1过表达可使乳腺癌MCF-7细胞发生MDR,其机制可能是通过诱导MCF-7细胞发生上皮间质转化而实现的。

配对相关同源框1基因与胃癌淋巴结转移的相关性

目的检测配对相关同源框1 (PRRX1)基因与上皮间质转化(EMT)相关蛋白(上皮型钙黏蛋白(E-ca)、波形蛋白(Vim))在胃癌组织及转移淋巴结组织中的表达水平以及PRRX1与E-ca、Vim表达的相关性,分析PRRX1的表达与胃癌淋巴结转移的相关性。方法分别收集转移淋巴结组织及胃癌组织标本,其中转移淋巴结组织标本65例,胃癌组织标本93例。通过实验分别测定胃癌组织及转移淋巴结组织中PRRX1、E-ca、Vim的表达情况,进一步根据实验数据探讨在胃癌组织、转移淋巴结组织中PRRX1和E-ca、Vim的表达差异及三者之间的相关性,结合临床病理学资料分析其临床意义。结果 (1) PRRX1和Vim在胃癌组织中的阳性表达率分别为69.89%、63.44%,在转移淋巴结组织中PRRX1和Vim的阳性表达率分别为43.08%、36.92%,两者之间差异具有统计学意义(P <0.05);E-ca在胃癌组织中的阳性率(44.09%)显著低于转移淋巴结组织(61.54%),两者之间差异具有统计学意义(P <0.05);(2)转移淋巴结组织中PRRX1蛋白的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴管侵犯、血管侵犯、神经侵犯密切相关(P <0.05);(3) PRRX1与Vim、E-ca在淋巴结转移组织中的表达分别呈正相关关系(r=0.429,P <0.05)、负相关关系(r=-0.334,P <0.05);(4)回归分析显示胃癌淋巴结转移的独立危险因素包含3个方面:PRRX1的表达、肿瘤大小、浸润深度。结论 PRRX1可能通过调控EMT促使胃癌发生淋巴结转移过程,影响患者预后。

配对相关同源框1蛋白在肝癌中的表达及其过表达对肝癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨配对相关同源框1(paired related homoeobox 1,PRRX1)蛋白在肝细胞癌中表达的临床意义以及其过表达对肝癌SMMC7721细胞侵袭转移的影响。方法采用免疫组化检测65例肝细胞癌患者癌组织及配对癌旁组织中PRRX1的表达,并分析其表达与肝细胞癌临床病理参数及生存曲线的关系。通过慢病毒介导PRRX1过表达载体感染肝癌SMMC7721细胞,应用qRT-PCR和Western blot技术检测慢病毒感染后细胞中PRRX1 mRNA和蛋白的表达变化,采用CCK-8法检测细胞活性,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot实验检测细胞中MMP-2、MMP-9以及上皮间质转化标志蛋白E-cadherin和Vimentin的表达。结果PRRX1在肝癌组织中表达显著低于癌旁组织(P<0.05),其表达水平与肝癌患者血管侵犯、肝内转移、远端转移和TNM分期等临床病理特征参数有相关性(P<0.05)。PRRX1阴性表达肝癌患者5年生存率显著低于PRRX1阳性表达肝癌患者(P<0.05)。慢病毒介导PRRX1过表达载体感染可显著增强SMMC7721细胞中PRRX1蛋白和mRNA表达水平(P<0.05),降低SMMC7721的细胞活性以及侵袭和迁移能力,并可显著下调MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达,同时显著上调E-cadherin蛋白表达。结论PRRX1在肝癌组织中低表达,其表达水平与肝癌患者血管侵犯、肝内转移、远端转移及TNM分期相关,过表达PRRX1可抑制肝癌SMMC7721细胞侵袭转移。

配对相关同源框1基因敲减促进脐带间充质干细胞增殖和多能性

目的：研究基因敲减配对相关同源框1 （prrxl）的表达对脐带间充质干细胞（UMSCs）增殖能力和多能性的影响.方法：胚胎干细胞-多能成体祖细胞-间充质干细胞（ESCs-MAPCs-MSCs）全基因组芯片筛选不同干细胞中差异表达的mRNA,针对所选基因特定序列构建prrx1-siRNA,转入UMSCs,real-time PCR验证干扰效率,检测增殖相关基因ki67,多能性相关基因oct4、sox2、nanog,上皮相关基因cdh1、epcam的表达,免疫荧光实验检测ki67蛋白表达.结果：干扰prrx1基因能明显促进增殖相关标志物ki67表达,促进多能性相关基因oct4、sox2、nanog的表达,促进上皮相关基因cdh1、epcam的表达,但不能使细胞发生形态上的改变.结论：下调MSCs中的相对高表达的prrx1基因表达,可促进UMSCs增殖能力与多能性.

配对相关的同源异型框1导入棕色脂肪干细胞构建生物起搏

目的:探讨过表达配对相关的同源异型框1(Prrx1)是否能诱导棕色脂肪干细胞(BADSC)向类窦房结细胞分化,构建生物起搏。方法:分离培养大鼠BADSC,分别转染带有GFP的空载腺病毒(Ad-GFP组)和带有Prrx1的腺病毒(Ad-Prrx1组)。光镜下观察细胞形态和荧光表达强度,Western blot、实时聚合酶链反应检测窦房结细胞相关的起搏蛋白(HCN4)和转录因子[TBX18、胰岛素基因增强子结合蛋白1(ISL-1)、Pitx2]的表达水平,膜片钳技术检测起搏电流I_f,免疫荧光技术检测细胞HCN4、TBX18和ISL-1的表达。结果:Ad-Prrx1组的起搏相关因子TBX18、ISL-1、HCN4的mRNA和蛋白表达水平均明显高于Ad-GFP组,而Pitx2的mRNA表达水平明显降低(P均<0.05)。膜片钳记录到BADSC的I_f电流,且该电流能被4 mmol/L CsCl阻断。免疫荧光显微镜下可见Ad-Prrx1组Prrx1与TBX18、ISL-1、HCN4在BADSC中共表达,而Ad-GFP组未发现有上述起搏相关蛋白共表达。结论:过表达Prrx1能诱导BADSC分化为类窦房结细胞。

配对相关同源框1蛋白、癌易感性候选基因2在原发性肝癌组织中的表达及临床意义

目的:分析配对相关同源框1蛋白(paired related homoeobox-1,PRRX1)、癌易感性候选基因2(cancer susceptibility candidate-2,CASC2)在原发性肝癌组织的表达特点,探讨其与临床病理参数和预后的关系。方法:收集2014年1月至2017年1月收治的72例经手术切除的原发性肝癌患者癌组织、癌旁组织石蜡标本。采用实时荧光定量聚合链反应(real-time fluorescence quantitative polymerization chain reaction,qRT-PCR)检测PRRX1、CASC2表达。分析PRRX1、CASC2表达与临床病理参数的关系。以随访期间患者死亡为终点事件,分析PRRX1、CASC2表达与患者预后的关系。结果:原发性肝癌组织中PRRX1、CASC2表达均低于癌旁组织(P<0.05)。PRRX1表达与血管侵犯、肝内转移、远端转移和TNM分期有关系(P<0.05);CASC2表达与肿瘤分化程度、TNM分期有关系(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,PRRX1低表达组、CASC2低表达组原发性肝癌患者3年生存率均低于PRRX1高表达组、CASC2高表达组患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,远端转移、PRRX1低表达、CASC2低表达与原发性肝癌患者不良预后独立相关(P<0.01)。结论:PRRX1、CASC2在原发性肝癌组织中呈低表达。PRRX1、CASC2低表达可能与原发性肝癌发生和进展有关,可作为其预后评估的辅助指标。

Paired related homeobox 1 transactivates dopamine D2 receptor to maintain propagation and tumorigenicity of glioma-initiating cells

Glioblastoma multiforme (GBM ) 是有有限治疗学的工具和差的预后的一个高度侵略的大脑肿瘤。最近的研究显示开始 glioma cells/glioma 干细胞(GICs/GSCs ) 可能为肿瘤开始，渗入，和复发负责。GIC 能异常地采用平衡胚胎的神经先锋的自强和区别的分子的机械。这里，我们发现那配对的相关 homeobox 1 (PRRX1 ) ，以前是的一个 homeodomain 抄写因素报导了控制骨胳的开发，在外皮的神经祖先被表示并且为他们的自强和合适的区别被要求。进一步， PRRX1 是在 glioma 样品和标签 GIC 的 overrepresented。Glioma 房间和 GIC 与 PRRX1 弄空不能在 vitro 宣传或在异种皮移植老鼠模型形成肿瘤。PRRX1 调整的 GIC 自强功能被多巴胺 D2 受体(DRD2 ) 调停。PRRX1 直接在 GIC 把它的表示绑在 DRD2 倡导者和 transactivates。发信号的 DRD2 的阻塞妨碍 GIC 自强，而它的 overexpression 恢复宣传和弄空 PRRX1 的 GIC 的 tumorigenic 潜力。最后， PRRX1 加强经由调停 DRD2 的细胞外的信号相关的 kinase (英皇家空军之阶级最低之兵) 和 AKT 的 GIC 激活。因此，我们的学习建议那治疗学的指向在 GIC 的 PRRX1DRD2ERK/AKT 轴是为对待 GBM 的有希望的策略。

PRRX1蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨配对相关同源框1（PRRX1）在乳腺癌中的表达及其临床病理学意义,为乳腺癌的诊断和治疗提供参考依据。方法：收集2002-2003年湖南省肿瘤医院收治的临床资料及随访资料完整的80例乳腺癌组织标本,应用免疫组织化学技术检测乳腺癌和癌旁正常乳腺组织中PRRX1的表达,并分析PRRX1表达与乳腺癌患者临床病理特征间的关系。结果：PRRX1在80例乳腺癌中的阳性表达率是45%（36/80）,在癌旁组织中的阳性表达率为12.5%（5/40）,二者比较有显著性差异（P〈0.05）。PRRX1的阳性表达率与乳腺癌患者的年龄、组织学类型、肿瘤分化程度均无显著性相关（P〉0.05）,而与淋巴结转移、临床分期显著相关（P〈0.05）,淋巴结转移及Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌患者PRRX1的阳性表达率显著高于无淋巴结转移及Ⅰ-Ⅱ期的乳腺癌患者（P〈0.05）。PRRX1表达阴性的乳腺癌患者5年生存率显著高于PRRX1表达阳性的乳腺癌患者（P〈0.05）。结论：乳腺癌中PRRX1的表达上调与其发生和恶性演进密切相关,可能作为乳腺癌诊断和预后预测的候选标志物。

PRRX1在胃癌细胞增殖与转移中的作用及其与TGF-β/Smad2介导的上皮间质转化的关系

背景与目的:上皮间质转化(EMT)在恶性肿瘤进展与转移中发挥着重要的作用,近年来研究显示配对相关同源框1(PRRX1)是促进EMT的重要转录因子。笔者前期研究表明,PRRX1在胃癌中表达增加,并与患者的不良预后密切相关。本研究进一步探讨PRRX1促胃癌细胞增殖、转移与EMT及相关信号通路的关系,为胃癌复发转移的防治提供研究思路。方法:用Western blot法检测人正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞SGC7901、MNK45中PRRX1表达。将MNK45细胞分别转染PRRX1过表达慢病毒(PRRX1过表达组)及空载慢病毒(阴性对照组),以无处理的MNK45细胞作为空白对照,用Transwell实验检测细胞的迁移能力,Western blot检测细胞PRRX1、TGF-β1、Smad2及EMT标志物的表达,以及TGF-β/Smad2通路阻断剂SB-431542干预后以上蛋白表达的变化。将8只裸鼠皮随机均分为两组,分别皮下接种转染PRRX1过表达慢病毒的MNK45细胞(PRRX1过表达组)与转染空载慢病毒MNK45细胞(阴性对照组),比较两组裸鼠皮下移植瘤的生长情况。结果:PRRX1在胃癌SGC7901与MNK45细胞中表达均明显高于正常胃黏膜细胞GES-1且在SGC7901细胞中高于MNK45(均P<0.05)。与空白对照组比较,PRRX1过表达组MNK45细胞的迁移能力明显增强,PRRX1、TGF-β1、Smad2、间质标志物vimentin蛋白表达明显增加,而上皮标志物E-cadherin表达明显降低(均P<0.05);阴性对照组MNK45细胞无以上变化(均P>0.05)。用SB-431542处理后,PRRX1过表达组MNK45细胞的PRRX1和TGF-β1表达未受影响(均P>0.05),但Smad2和vimentin表达的升高与E-cadherin表达的降低被明显抑制(均P<0.05)。PRRX1过表达组裸鼠移植瘤的体积生长速度与瘤体质量均明显大于阴性对照组(均P<0.05)。结论:PRRX1过表达能促进胃癌细胞的增殖与转移,机制可能与其诱导TGF-β/Smad2通路活化促进EMT有关。对过表达PRRX1及TGF-β/Smad2 通路的干预可能是胃癌复发转移防治的新途径。

沉默PRRX1基因表达可增强前列腺癌耐药细胞株PC-3/DTX对多西他赛的敏感性

目的探讨配对相关同源框1(PRRX1)基因沉默对前列腺癌耐药细胞多西他赛(DTX)敏感性的影响及可能机制。方法临床收集35例DTX化疗敏感患者(DTX-S)和29例DTX化疗耐药患者(DTX-R)的癌组织。采用qRT-PCR法检测癌组织中PRRX1 mRNA表达水平。体外培养人前列腺癌PC-3细胞,采用DTX浓度递增间断刺激法建立DTX耐药细胞株PC-3/DTX。采用qRT-PCR法和Western blotting法检测耐药株PC-3/DTX及其亲本PC-3细胞中PRRX1 mRNA和蛋白表达水平;通过siRNA沉默PC-3/DTX细胞PRRX1基因表达,采用qRT-PCR和Western blotting检测转染后PC-3/DTX细胞中PRRX1 mRNA和蛋白表达水平;DTX干预转染后PC-3/DTX细胞24 h,采用MTT法检测细胞增殖活性,计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI);采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞中cleaved caspase-3、p-mTOR、mTOR、Beclin-1和LC-3蛋白表达水平。结果DTX-R癌组织中PRRX1 mRNA表达水平高于DTX-S癌组织(6.59±1.49 vs 1.07±0.34),差异有统计学意义(F=656.401,P<0.05)。耐药细胞株PC-3/DTX及其亲本PC-3细胞对不同浓度DTX作用24 h后的IC50值分别为(89.88±6.86)nmol/L和(15.56±1.45)nmol/L,RI值为5.78。耐药细胞株PC-3/DTX中PRRX1 mRNA和蛋白表达水平高于其亲本PC-3细胞(mRNA:9.22±1.50 vs 1.00±0.17;蛋白:0.50±0.04 vs 0.08±0.02),差异有统计学意义(F_(mRNA)=59.05,F_(蛋白)=171.70,P<0.05)。PRRX1基因沉默后,PC-3/DTX细胞中PRRX1 mRNA和蛋白表达水平降低(mRNA:1.01±0.02 vs 0.98±0.04 vs 0.22±0.10;蛋白:0.62±0.01 vs 0.61±0.01 vs 0.11±0.01),差异有统计学意义(F_(mRNA)=122.01,F_(蛋白)=554.53,P<0.05)。沉默PRRX1基因可降低PC-3/DTX细胞对DTX的耐药性,促进细胞凋亡,并上调p-mTOR和cleaved caspase-3水平,下调Beclin-1和LC-3蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默PRRX1基因表达可增强前列腺癌耐药细胞株PC-3/DTX对DTX的敏感性,其机制可能与激活mTOR信号通路进而抑制细胞自噬有关。

配对相关同源框-1基因过表达对人胰腺癌细胞侵袭及上皮-间充质转化的影响

目的观察配对相关同源框-1（Prrx-1）基因过表达对胰腺癌细胞侵袭及上皮-间充质转化（EMT）的影响。方法培养人正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7和3株胰腺癌细胞AsPC-1、BxPC-3和CFPAC-1，采用Westernblot方法检测Prrx-1蛋白表达。采用Prrx-1基因过表达慢病毒载体转染胰腺癌BxPC-3细胞，构建高表达Prrx-1基因过表达BxPC-3细胞（简称Prrx-1过表达细胞）后，采用Westernblot方法检测癌细胞Prrx-1蛋白水平；采用显微镜观察癌细胞形态；采用Westernblot方法检测各组癌细胞中上皮标志物E-钙黏蛋白（E—cadherin）和间叶标志物波形蛋白（Vimentin）蛋白；采用Transwell方法观察癌细胞侵袭能力。结果Westernblot检测结果显示：Prrx-1蛋白在HPDE—C7细胞不表达，而在AsPC-1、BxPC-3和CFPAC-1均高表达。选取BxPC-1进一步研究。采用Westernblot方法检测结果显示，与空载对照组比较，Prrx-1过表达组细胞Prrx-1基因蛋白水平明显升高；形态学观察结果显示，Prrx-1基因过表达组细胞出现EMT改变；Westernblot检测结果显示，与空载对照组比较，Prrx-1过表达组细胞E—Cadherin表达下调，Vimentin表达上调；Transwell方法检测发现，空载对照组和Prrx-1过表达组穿膜细胞数分别为（89±5）个和（139±8）个（P〈0．05）。结论Prrx．1过表达可促进人胰腺癌细胞迁移和侵袭能力，其机制可能与促进EMT有关。

配对相关同源框1蛋白在不同胰腺组织表达及临床意义

目的探讨配对相关同源框1（Prrxl）表达基因在不同胰腺组织的表达及临床意义。方法收集诊断明确的80例胰腺癌组织、10例慢性胰腺炎组织以及8例正常胰腺组织，采用免疫组织化学方法探究Prrxl表达，并分析与胰腺癌临床参数相关性。结果免疫组织化学检测显示，Prrxl在胰腺癌组织中阳性表达为52．5％（42／80）、高于正常胰腺组织的12．5％（1／8）和慢性胰腺炎组织的20．0％（2／10）。进一步分析显示，Prrxl蛋白高表达与胰腺癌患者年龄、肿瘤脉管淋巴管侵犯、淋巴结转移、TNM分期及5年生存率明显相关（P〈0．05），而与患者性别、肿瘤位置、分化程度及肿瘤的浸润深度无明显相关（P〉0．05）。结论Prrxl与胰腺癌侵袭转移明显相关。