五味子乙素对胰腺癌Pan02细胞增殖的抑制作用及其机制

目的:探讨五味子乙素对胰腺癌Pan02细胞增殖的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度(0、0.78、1.56、3.12、6.25、12.50和25.00 mg·L^(-1))五味子乙素作用下Pan02细胞增殖率,以选择五味子乙素作用的最适浓度和最佳作用时间。小鼠胰腺癌Pan02细胞分为对照组(0 mg·L^(-1)五味子乙素)、2.5 mg·L^(-1)五味子乙素组、5.0 mg·L^(-1)五味子乙素组和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组。光学显微镜观察各组Pan02细胞形态表现,5-乙基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测各组Pan02细胞中EdU阳性细胞率,流式细胞术检测各组不同细胞周期Pan02细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组Pan02细胞周期和凋亡相关蛋白表达水平。结果:CCK-8法,五味子乙素作用Pan02细胞48和72 h后,与0 mg·L^(-1)五味子乙素比较,其他浓度五味子乙素作用下Pan02细胞增殖率明显降低(P<0.01),72 h时细胞抑制作用最明显。选择0、2.5、5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素作用Pan02细胞,作用时间为72 h。对照组Pan02细胞呈长梭形,状态良好,紧密且贴壁生长,细胞器和细胞质正常;2.5和5.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞体积减小,细胞之间黏连消失,细胞膜虽完整但通透性增强,细胞质皱缩,细胞内部产生空泡结构,部分呈碎片状漂浮于溶液表面;10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞有明显凋亡小体生成,呈现凋亡状态。EdU染色法,与对照组比较,2.5、5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞中EdU阳性细胞率均明显降低(P<0.01)。流式细胞术,与对照组比较,2.5、5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞S期细胞百分率明显升高(P<0.01),G_(2)/M期细胞百分率明显降低(P<0.01),5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组G_(0)/G_(1)期细胞百分率明显降低(P<0.01);与对照组比较,2.5、5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。Western blotting法,与对照组比较,2.5 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞中p27、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase-3)和裂解的多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶(cleaved PARP)蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);5.0和10.0 mg·L^(-1)五味子乙素组Pan02细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)A2、Cyclin E2和Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),p27、 Bax、 cleaved Caspase-3和cleaved PARP蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。结论:五味子乙素具有抑制胰腺癌Pan02细胞增殖的作用,其作用机制可能与激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)通路诱导细胞凋亡和激活p27蛋白并诱导细胞周期S期阻滞有关。

吉西他滨增强HUVEC疫苗抗胰腺癌作用实验研究

目的研究低剂量化疗药吉西他滨(gemcitabine,GEM)能否增强人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)疫苗抗胰腺癌作用,并探讨其作用机制。方法以Pan02小鼠胰腺癌细胞接种C57BL/6小鼠,建立皮下移植瘤模型,动物随机分为PBS组、GEM组、HUVEC组、HUVEC-GEM组,观察各组小鼠肿瘤生长及不良反应情况。通过小鼠免疫血清中HUVEC抗体检测实验、脾淋巴细胞增殖实验、细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验及INF-γ测定实验确定GEM能否增强HUVEC疫苗诱导的免疫应答。结果皮下移植瘤实验结果表明GEM引入HUVEC疫苗免疫方案后可以增强疫苗治疗性抗胰腺癌作用;酶联免疫实验结果证实GEM可以有效提升疫苗治疗组小鼠免疫血清中的HUVEC抗体及IFN-γ水平;脾淋巴细胞增殖实验及CTL杀伤结论低剂量GEM可以增强HUVEC疫苗诱导的免疫应答水平从而提升HUVEC疫苗的抗胰腺癌作用。