三七蛋白对小鼠黑色素瘤B16细胞黑色素的抑制作用及机制研究

目的:探讨三七蛋白对小鼠黑色素瘤B16细胞黑色素的抑制作用及机制。方法:采用硫酸铵沉淀法提取三七蛋白,氨基酸自动分析仪测定三七蛋白氨基酸组成。采用NaOH裂解法测定三七蛋白不同质量浓度(0.125、0.25、0.5 mg·mL–1)作用下B16细胞内黑色素含量,CCK8法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测线粒体膜电位及细胞凋亡,多巴氧化法测定细胞内酪氨酸酶(tyrosinase,Tyr)活性,同时采用体外抑制Tyr活性试验观察对Tyr活性的影响,Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)、Tyr以及Tyr相关蛋白1(Tyr-related protein 1,TRP-1)表达变化。结果:与对照组相比,三七蛋白显著降低B16细胞内黑色素含量,抑制细胞增殖,提高细胞凋亡率,降低线粒体膜电位,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax表达比值;此外,三七蛋白显著抑制B16细胞内及体外Tyr活性,显著下调p-MIFP/MITF、Tyr及TRP-1蛋白表达。结论:三七蛋白对B16细胞黑色素生成具有抑制作用,且可能与诱导细胞凋亡、降低Tyr活性相关。